1、动物(dngw)细胞融合与单克隆抗体,第一页，共二十一页。,动物细胞与植物(zhw)细胞的差别：,无细胞壁全能性受限制，不能发育成杂种(zzhng)动物,动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：不需去除细胞壁不能发育(fy)成新的动物个体,第二页，共二十一页。,一、动物(dngw)细胞融合（细胞杂交）P52,1、概念(ginin)：,指两个或多个动物细胞(xbo)结合形成一个细胞(xbo)的过程。,2、结果：,形成单核的杂交细胞,3、原理：,细胞膜的流动性,4、诱导方式,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（PEG),生物法：灭活的病毒,5、动物细胞融合过程,(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所
2、特有的。病毒外壳上的某些糖蛋白可能有促进细胞融合的功能。),思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？,不灭活的话会感染胞，而不能诱导细胞融合,第三页，共二十一页。,第四页，共二十一页。,不同DNA的两个(lin)细胞,灭活病毒(bngd)诱导细胞融合,融合后的细胞进行(jnxng)有丝分裂,5、动物细胞融合过程,第五页，共二十一页。,6、意义：突破了有性杂交方法(fngf)的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物(shngw)新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体,阅读(yud)课本
3、53页,第六页，共二十一页。,总结(zngji)：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合,细胞膜的流动性、植物(zhw)细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、果胶酶去壁,用胰蛋白酶使细胞(xbo)分散,物理、化学方法,物理、化学、生物方法,获得部分或完整植株,主要用于制备单克隆抗体,第七页，共二十一页。,1.抗体是由何种细胞产生(chnshng)的？效应B细胞（浆细胞）。2.一个淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.简述获得抗体的传统途径？抗原 动物体 抗体 抗原不纯 抗体不纯,二、单克隆抗体(kngt),刺激(cj),浆细胞,第八页，共二十一页。,体外培养
4、淋巴细胞能无限(wxin)增殖吗?怎样解决这个问题？,4.这种方法获得的抗体有什么(shn me)缺陷？产量低，纯度低，特异性差,第九页，共二十一页。,一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞(xbo)能无限增殖,杂交瘤细胞(xbo),动物(dngw)细胞培养技术,设计方案：,动物细胞融合技术,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞,第十页，共二十一页。,(1)、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本(qn bn)的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。,(2)、过程(guchng),第十一页，共二十一页。,效应(xioyng)B淋巴细胞,注射(zhsh)特定抗原蛋白,融合(
5、rngh),（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞-B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞,多种杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,1、单克隆抗体的制备过程,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高,产生相应的B淋巴细胞,第十二页，共二十一页。,2.诱导其
6、融合的方法(fngf)有哪些？,3.融合(rngh)后培养液中有几种细胞?,4.怎样(znyng)筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点?原因？,1.注射抗原的目的是什么?,5.为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选?,6.大量增殖杂交瘤细胞和获得单抗的方法?,产生相应的B淋巴细胞,选择培养基,既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体,具有双亲细胞的遗传物质,培养液中或小鼠腹腔中培养,从培养液或小鼠腹水中提取,第十三页，共二十一页。,如何(rh)进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？,融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，
7、通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体。那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选(tioxun)阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。,第十四页，共二十一页。,(2)、过程(guchng),B淋巴细胞骨髓瘤细胞(xbo),诱导(yudo)融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养基第一次筛选,杂交瘤细胞（B-瘤细胞）,克隆化培养,专一抗体检测 第二次筛选
8、,相应杂交瘤细胞,体外培养,单克隆抗体,第十五页，共二十一页。,(3).单克隆抗体(kngt)的应用：,单克隆抗体(kngt)的优点：特异性强、灵敏度高、产量大,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合 优点：准确、高效(o xio)、简易、快速,用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。,第十六页，共二十一页。,总结(zngji),一种(y zhn)诱导细胞融合的新方法,一种(y zhn)新细胞,一个优势,第十七页，共二十一页。,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞(xbo)与某种细胞(xbo)融合，得到杂交细胞(xbo)，经培养可产生
9、大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞(xbo)融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固(gngg)练习,第十八页，共二十一页。,2.动物细胞融合的目的中最重要的是-（）A.克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新品种 D.生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同 C.所采用的原理(yunl)完全相同 D.都能形成杂种细胞,B,D,第十九页，共二十一页。,4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与
10、肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导(yudo)融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,第二十页，共二十一页。,内容(nirng)总结,动物细胞融合与。动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：。物理法：离心、振动、电激。病毒外壳上的某些糖蛋白可能有促进细胞融合的功能。该细胞继承双亲(shungqn)细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。培养液中或小鼠腹腔中培养。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。B-B细胞。瘤-瘤细胞。单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大。D。B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成,第二十一页，共二十一页。,
