1、,云南桑树病菌(bngjn)初步鉴定及其对咪酰胺的敏感性测定,答 辩 人：陈文智指导(zhdo)教师：杜 飞 2012年6月12日,园林(yunln)园艺学院本科论文答辩,第一页，共二十四页。,第二页，共二十四页。,研究背景：在很多蚕区，桑树容易发生桑树叶斑病，影响桑树的生长发育，桑叶老化脱落，造成桑叶减产，叶质下降，蚕儿食下病叶后，吸收不到有利于蚕儿生长发育所需的营养，会降低蚕儿抗病的能力，影响蚕茧(cnjin)的产量和质量。,第三页，共二十四页。,研究目的：采用咪酰胺不同(b tn)浓度对桑树病菌的抑制率和EC50研究，为提高桑树的产量和质量提供理论依据。,第四页，共二十四页。,研究内容：
2、以云南保山、曲靖两地区带有叶斑病的桑叶为材料，采用菌落直径(zhjng)法，对杀菌剂咪酰胺的EC50进行测定。算出咪酰胺对病原菌的敏感性。,带病桑叶(sn y),第五页，共二十四页。,试验(shyn)技术路线图,第六页，共二十四页。,供试菌株分别(fnbi)从保山、曲靖采样得到。从桑树的叶片和枝条部位分离可得病原菌，病斑部有条状和斑点状，病斑颜色都为黑褐色。,表1 桑树病菌采集地点(ddin)、分离部位和病症,第七页，共二十四页。,表2 9种菌株在PDA平板上的形态(xngti)特征,第八页，共二十四页。,A、菌株在PDA平板(pngbn)上的正面形态 B、菌株在PDA平板(pngbn)上的背
3、面形态,图1 菌株在PDA平板(pngbn)上的形态,第九页，共二十四页。,表3 桑树病害孢子(boz)形态,第十页，共二十四页。,观察(gunch)结果表明（表3和图2）1号菌株初步鉴定为亚木霉（Trichoderma koningii），2号菌株初步鉴定为桑幹枯病（Phomopsis sp）,3、8、9号菌株初步鉴定为拟盘多毛孢（Pestalotiopsis），5号菌株初步鉴定为禾赤霉菌（Gibberella zeae），4号菌株初步鉴定为甘蓝长尾交链孢霉（Alternaria brassicae），5号菌株初步鉴定为禾赤霉菌（Gibberella zeae），6号菌株初步鉴定为桑牙枯病（
4、Fusarium cerealis），7号菌株初步鉴定为蔓枯病菌（Didymella bryoniae）。,A、3号菌株孢子(boz)形态 B、1号菌株孢子(boz)形态 C、5号菌株孢子(boz)形态,形态学鉴定(jindng)结果,图2 桑树病害孢子形态,第十一页，共二十四页。,分子鉴定结果：本试验中分离的9个菌株与从GeneBank比对结果表明，保2-2、曲4-1-1、曲6-2-1、曲5-1-1、曲5-1-2、曲2-2-2、曲2-1-2、曲5-2-1、曲3-1-1号菌株是亚木霉、桑干枯菌、细极链格孢、甘蓝(gnln)长尾交链孢霉、禾赤霉菌、桑牙枯菌、蔓枯病菌、细极链格孢、天竺葵链格孢。,
5、第十二页，共二十四页。,表4 分离(fnl)菌株在Genebank比对结果,第十三页，共二十四页。,表5 桑树病菌(bngjn)对咪酰胺的抑制率,第十四页，共二十四页。,实验表明咪酰胺对桑树病菌的抑制率较强，在咪酰胺浓度(nngd)为10ug/ml，30ug/ml，50ug/ml，100ug/ml，150ug/ml的PDA平板上培养的桑树病菌抑制都较明显。,图3 咪酰胺对桑树病菌(bngjn)的抑制效果图,第十五页，共二十四页。,农药测定结果 本实验(shyn)为桑树病菌在加入浓度10ug/ml和30ug/ml的咪酰胺在PDA平板上的生长状况。实验(shyn)表明桑树病菌对咪酰胺较敏感，不同的
6、桑树病菌对咪酰胺的敏感度不同。,图4 不同浓度的咪酰胺对桑树病菌(bngjn)的抑制效果图,第十六页，共二十四页。,本实验为桑树病菌(bngjn)在加入浓度为50ug/ml、100ug/ml 和150ug/ml的咪酰胺在PDA平板上的生长状况。实验表明咪酰胺的浓度越高桑树病菌(bngjn)越敏感，对桑树病菌(bngjn)的抑制率越强。,图5 不同(b tn)浓度的咪酰胺对桑树病菌的抑制效果图,第十七页，共二十四页。,本实验为不同的桑树病菌在PDA平板上的正常(zhngchng)生长状况。本实验表明不同地区的桑树病菌并不完全相同，病菌的菌落大小，颜色，菌丝的长短，有无菌丝，生长快慢都不相同。在不
7、同地区不同气候条件下影响桑树减产的主要病害不同。,图6 桑树病菌的正常生长(shngzhng)状况图,第十八页，共二十四页。,咪酰胺对桑树病菌的抑制效果：咪酰胺的EC50从0.012774ug/ml-17.815ug/ml。EC500.1的菌株有3个分别是细极链格孢（3号）、甘蓝长尾交链孢霉（4号）和禾赤霉菌（5号）这4个菌株对咪酰胺的敏感性最强。证明(zhngmng)咪酰胺能有效防治亚木霉、细极链格孢、甘蓝长尾交链孢霉和禾赤霉菌所引起的桑树病害。,表6 咪酰胺对桑树病菌(bngjn)的EC50,第十九页，共二十四页。,8个菌株对咪酰胺的EC50分布(fnb)有一个单峰，其中6号（桑牙枯病菌）
8、、3号（细极链格孢）、4号霉（甘蓝长尾交链孢）和5号（禾赤霉菌）这四个菌株的EC502。即除了EC502的这两菌株外，其余6个菌株菌落对咪酰胺敏感。,图7 咪酰胺对桑树病菌(bngjn)的EC50分布图,第二十页，共二十四页。,结论(jiln)与讨论,桑树病菌的病原：本文鉴定表明，云南省引起桑树真菌病害的病原有：细极链格孢（Alternaria tenuissima）、甘蓝长尾交链孢霉（Alternaria brassicae）、禾赤霉菌（Gibberella zeae）、桑牙枯病（Fusarium cerealis）、蔓枯病菌（Didymella bryoniae）、天竺葵链格孢（Alter
9、naria porri）。前人研究表明云南桑树病害主要是侵染性病害，而引起桑树侵染性病害的病原物主要是真菌，属于子囊菌纲（Ascomycetes）、担子菌纲（Basidiomycetes）和半知菌类（Fungi imperfecti）。菌丝体发达，有隔膜和分枝，菌丝体可构成菌核、子座、子囊果等组织体。此外，本文还分离到一株亚木霉（Trichoderma koningii），亚木霉（Trichoderma koningii）是否(sh fu)对桑树的其它病原有防治效果，需进一步研究。,第二十一页，共二十四页。,本文中，咪酰胺可以有效防治桑树真菌病害，在供试的8个菌株中有三个菌株：细极链格孢（Al
10、ternaria tenuissima）、甘蓝长尾交链孢霉（Alternaria brassicae）和禾赤霉菌（Gibberella zeae）的EC500.1，表明咪酰胺对桑树上的这些病菌抑制和杀菌作用很显著。2007年仇铁烨用咪酰胺防治水稻恶苗病的效果显著，每hm2用咪酰胺60ml，对秧苗期和分蘖末期恶苗病防治效果达到(d do)90左右，齐穗期防效达到(d do)98以上；2010年郭双义、郭漠镁、罗晓新等用20咪酰胺防治水稻纹病在水稻破口前施用750 kg/hm2 效果最好，防效达761，水稻产量为655208 kg/hm 2。前人研究结果表明，咪鲜胺是一种咪唑类杀菌剂，对大田作物、
11、水果、蔬菜、皮革及观赏植物上的多种病害具有治疗和铲除作用 由于它具有选择性高、杀菌谱广、高效、安全等特点，而且咪鲜安属低毒杀菌剂，未发现致畸、致突变和致癌作用。蚕食少量没有影响。在本文中咪鲜胺也可以有效防治桑树病害，因此，以后对桑树真菌病害的防治可以采用咪鲜胺。,咪酰胺可以(ky)有效防止桑树病害,第二十二页，共二十四页。,谢谢(xi xie),第二十三页，共二十四页。,内容(nirng)总结,云南桑树病菌初步鉴定及其对咪酰胺的敏感性测定。研究内容：以云南保山、曲靖两地区带有叶斑病的桑叶为材料，采用菌落直径法，对杀菌剂咪酰胺的EC50进行(jnxng)测定。曲靖、保山、采集新鲜带病桑叶。保2-2。曲6-2-1。从桑树的叶片和枝条部位分离可得病原菌，病斑部有条状和斑点状，病斑颜色都为黑褐色。小型孢子椭圆形或卵形，大孢子椭圆形至长卵形。图4 不同浓度的咪酰胺对桑树病菌的抑制效果图。图6 桑树病菌的正常生长状况图。谢谢,第二十四页，共二十四页。,
