1、第三章 免疫细胞的别离及其外表标志检测技术,第一页，共四十一页。,第一节 免疫细胞的别离 一、外周血单个核细胞别离 二、淋巴细胞的别离 三、T细胞和B细胞的别离 四、T细胞亚群的别离,第二页，共四十一页。,第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 一、细胞外表标志及亚群 二、B细胞外表标志 三、NK细胞外表标志第三节 其他的免疫细胞第四节 免疫细胞外表标志的检测及应用 一、免疫细胞外表标志的检测方法 二、淋巴细胞外表标志检测的临床意义,思考题小结,第三页，共四十一页。,第四页，共四十一页。,第一节 免疫细胞的别离,外周血单个核细胞别离 淋巴细胞的别离 T细胞和B细胞的别离 T细胞亚群的别离,第五页，共四
2、十一页。,一、外周血单个核细胞别离,外周血单个核细胞peripheral mononuclear cells,PMNC包括淋巴细胞和单核细胞monocyte。Ficoll别离液法主要用于别离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的别离法。,第六页，共四十一页。,细胞别离根本原理,不同细胞密度不同不同细胞外表生物学特性不同不同细胞外表分化抗原不同,第七页，共四十一页。,不同细胞密度不同,人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞淋巴细胞和单核细胞的密度为1.075-1.090,第八页，共四十一页。,不同细胞密度不同,第九页，共四十一页。,用1.0770.001的分层
3、液可将细胞别离,第十页，共四十一页。,密度梯度离心(Ficoll)离心,第十一页，共四十一页。,二、淋巴细胞别离,贴壁粘附法 吸附柱过滤法 磁铁吸引法 Percoll 别离液法 连续密度梯度离心,去单核细胞,第十二页，共四十一页。,E花环沉降法 尼龙毛柱别离法,三、T细胞和B细胞的别离,第十三页，共四十一页。,四、T细胞亚群的别离,亲和板结合别离法 磁性微球别离法 荧光激活细胞别离仪别离法,第十四页，共四十一页。,荧光激活细胞别离仪别离法,第十五页，共四十一页。,第十六页，共四十一页。,磁珠大小可以选择,第十七页，共四十一页。,大小免疫磁珠别离细胞的特点比较,第十八页，共四十一页。,第十九页，
4、共四十一页。,第二十页，共四十一页。,免疫磁珠法细胞分选过程,第二十一页，共四十一页。,免疫磁珠细胞分选装置,第二十二页，共四十一页。,全自动细胞分选系统,第二十三页，共四十一页。,流式细胞分析仪,第二十四页，共四十一页。,第二节 淋巴细胞标志及亚群分类,常用于鉴定和检测淋巴细胞外表标志是簇分化抗原Cluster of differentiation，CD。,第二十五页，共四十一页。,细胞外表分化抗原CD抗原,适用于T、B细胞的别离能看出CD抗原细胞亚群的别离未知CD抗原细胞亚群的别离阴性分选,第二十六页，共四十一页。,一、T细胞外表标志及其亚群,CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞 help
5、 T cell,ThCD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞 cytotoxic T cell,Tc or CTLCD4+CD25+调节性T细胞 regulatory T cell,Tr or Treg,第二十七页，共四十一页。,二、B细胞外表标志,SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，局部CD分子是B细胞的重要外表标志，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的B细胞。,第二十八页，共四十一页。,三、NK细胞外表标志,人类NK细胞外表标志
6、主要以CD16、CD56来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为NK细胞。,第二十九页，共四十一页。,T细胞及NK细胞,第三十页，共四十一页。,第三节 其他的免疫细胞,抗原提呈类细胞外表标志,第三十一页，共四十一页。,第四节 免疫细胞外表标志的检测及应用,免疫细胞外表标志的检测方法淋巴细胞外表标志检测的临床意义,第三十二页，共四十一页。,一、免疫细胞外表标志的检测,抗体致敏细胞花环法 免疫细胞化学法 免疫荧光法 流式细胞分析法,第三十三页，共四十一页。,二、淋巴细胞外表标志检测的临床意义,淋巴细胞外表标志检测是评价免疫功能的重要指标。对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助于免
7、疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反响的监测。,第三十四页，共四十一页。,临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化,第三十五页，共四十一页。,思考题,1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其别离纯化？2.淋巴细胞有哪几类细胞？能用形态学的方法加以区别吗？3.将细胞别离的原理有哪些？各有什么特点？4.形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？5.T细胞和B细胞进一步区分亚群的依据是什么？,第三十六页，共四十一页。,6.什么是细胞外表标志？其作用是什么？7.细胞外表标志的检测方法有哪些？8.利用细胞外表标志CD抗原别离细胞的方法有哪几种？9.T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞的主要生物标志是什么？10.淋
8、巴细胞外表标志检测的临床意义是什么？,第三十七页，共四十一页。,小 结,淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态根本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其外表标志的检测。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的外表标志是CD抗原。,第三十八页，共四十一页。,进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向一致和单一。但目前看来，还很少有只通过一个CD抗原就能将某一类淋巴细胞亚群指示出来的CD抗原，CD抗原指示出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特异。,第三十九页，共四十一页。,根据T细胞的免疫效应功能和外表CD分子表达至少可以分为：辅助性T细胞、细胞毒性
9、T细胞和调节性T细胞；SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标，以CD5和CD19为标志可将B细胞分为B1和B2两个亚群；目前多以CD3-、CD16+、CD56+作为NK细胞的典型标志。,第四十页，共四十一页。,内容总结,第三章 免疫细胞的别离及其外表标志检测技术。一、免疫细胞外表标志的检测方法。T细胞和B细胞的别离。密度梯度离心(Ficoll)离心。三、T细胞和B细胞的别离。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。T细胞及NK细胞。1.免疫细胞都包括哪些细胞。5.T细胞和B细胞进一步区分亚群的依据是什么。8.利用细胞外表标志CD抗原别离细胞的方法有哪几种。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的外表标志是CD抗原,第四十一页，共四十一页。,
