1、8 陈明木，王春英，庞杰，等.海藻酸钙凝胶特性影响因素的探讨J.广州食品工业科技，2002，18(3):4-6，11.9 中华医学会消化病学分会肠胃动力学组、中华医学会外科学分会结直肠肛门外科学组.中国慢性便秘诊治指南(2013 年，武汉)J.中华消化杂志，2013，33(5):292.10 刘世信.结肠运输试验对诊断便秘的价值 J，中华医学杂志，1993，73(2):75.蓼大青叶标准汤剂鸟苷含量测定及指纹图谱研究姚杭琦1，2，3，张美玲1，2，3，蒋春亮1，2，3，周婷1，2，3，程立伟1，2，3，周永康1，2，3，张志强1，2，3*(1.北京康仁堂药业有限公司，北京 101301;2.中
2、药配方颗粒关键技术国家地方联合工程研究中心，天津 301700;3.北京市中药配方颗粒工程技术研究中心，北京 101301)摘要:目的建立蓼大青叶标准汤剂鸟苷含量测定及指纹图谱分析方法。方法采用 Agilent ZOBAX Bonus-P 色谱柱(250 mm 4.6 mm，5m);以甲醇-水为流动相，梯度洗脱;流速1.0 mLmin1;柱温30;进样量10 L;检测波长260 nm。测定15 批蓼大青叶样品中鸟苷含量，进行相似度评价，建立 15 批标准汤剂指纹图谱，并确认共有色谱峰。结果15 批标准汤剂鸟苷含量范围 1.67 mgg12.84 mgg1;指纹图谱共确定 9 个共有峰，相似度均
3、大于 0.98，并通过对照品对比指认出尿苷、鸟苷和腺苷 3 个特征峰。结论建立的标准汤剂鸟苷含量测定及指纹图谱分析方法稳定，重复性良好，可为后续质量标准的研究及建立提供参考。关键词:蓼大青叶;标准汤剂;含量测定;指纹图谱中图分类号:969.4文献标识码:B文章编号:1006-3765(2023)-04-0026-05作者简介:姚杭琦，女(1993 )。职称:助理工程师。研究方向为中药配方颗粒质量标准研究。通讯作者:张志强，男(1981 )。职称:高级工程师。研究方向为中药及中药配方颗粒。Study on Guanosine Content and Fingerprint of Polygoni
4、 Tinctorii FoliumStandard DecoctionYAO Hang-qi1，2，3，ZHANG Mei-ling1，2，3，Jiang Chun-liang1，2，3，Zhou Ting1，2，3，CHENG Li-wei1，2，3，ZHOUYong-kang1，2，3，ZHANG Zhi-qiang1，2，3*(1.Beijing Tcmages Pharmaceutical Co.Ltd，Beijing 101301，China;2.National and Local Joint Engineering esearch Center for Key Technolog
5、y of Chinese Medicine Compo-sition Granules，Tianjin 301700，China;3.Beijing Engineering Technology esearch Center for ChineseMedicine Composition Granules，Beijing 101301，China)ABSTACT:OBJECTIVETo establish a method for content determination of guanosine and characteristic finger-print of Polygoni Tin
6、ctorii Folium standard decoction.METHODSThe separation was performed on Agilent ZOB-AX Bonus-P column(250 mm 4.6 mm，5 m)，with methanol-water as the mobile phase for gradient elution.Theflow rate was 1.0 mLmin1，the column temperature was 30.The injection was 10 L and the detection wave-length was 260
7、 nm.To determine the content of guanosine in 15 batches of Polygoni Tinctorii Folium and evaluate thesimilarity.To establish fingerprints of 15 batches of standard decoction and confirm the common chromatographicpeaks.ESULTSThe guanosine content was 1.67-2.84 mgg1.A total of 9 common peaks were iden
8、tified，thesimilarity was greater than 0.98，and 3 of them were identified through the comparison of the reference sub-stances.The characteristic peaks are uridine，guanosine and adenosine.CONCLUSIONThe established method forguanosine content determination and fingerprint analysis is stable and reprodu
9、cible，which can provide a reference forthe establishment of subsequent research quality standards.KEY WODS:Polygoni Tinctorii Folium;Standard decoction;Quantitative Analysis;Fingerprint62海峡药学2023 年第 35 卷 第 4 期蓼大青叶为蓼科植物蓼蓝 Polygonum tinctorium Ait.的干燥叶1。现分布于河北、辽宁等地，东北、广东均有野生或少有种植2。蓼大青叶具有清热解毒，凉血消斑的功效，临
10、床上用于治疗喘咳肺热、发疹发斑、痈肿等症。现代药理学研究表明，蓼大青叶具有抗病毒、抗菌、解热、抗炎和抗敏等药理作用3。蓼大青叶中的有效成分主要有生物碱类如靛蓝、靛玉红4、核苷类成分鸟苷、尿苷、腺苷以及有机酸类水杨酸等化合物5。其中核苷类成分鸟苷具有抗炎、抗菌及抗病毒等作用6，与蓼大青叶药理作用相近。2020 年版 中国药典 所收载的蓼大青叶的质量控制方法是采用 HPLC 法测定靛蓝的含量，但靛蓝多被用于染料7，8，因此以核苷类药效成分鸟苷作为蓼大青叶有效成分进行检测。中药指纹图谱可将中药成分有效信息全面展现，从而控制中药有效指标成分，是一种综合有效分析手段9-11。本研究通过 HPLC 法建立
11、了 15 批蓼大青叶饮片标准汤剂指纹图谱，并进行相似度评价，确认共有色谱峰。同时还建立了鸟苷的含量测定方法，以期为蓼大青叶及其制剂质量标准的研究及建立提供参考和依据。1仪器与材料1.1仪器Waters e2695 高效液相色谱仪(美国沃特世公司);MSA6.6S-0CE-DM 电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司);ML204T 电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);JA1002 电子天平(上海浦春计量仪器有限公司);KQ-100DE 数控超声波清洗(昆山市超声仪器有限公司);电热鼓风干燥箱(中仪国科(北京)科技有限公司)。1.2试药与试剂鸟苷对照品(批号:111977-201
12、501;纯度:93.6%)、尿苷对照品(批号:110887-201803;纯度:99.5%)、腺苷对照品(批号:110879-201703;纯度:99.7%)均购自中国食品药品检定研究院;甲醇(色谱纯，默克股份两合公司);水为屈臣氏蒸馏水。1.3蓼大青叶饮片依照2020 年版 中国药典 及地方炮制规范，规定蓼大青叶饮片炮制方法为:“取蓼大青叶药材，将杂质及枝梗除去，洗润，干燥。”收集来自不同产地的 15 批蓼大青叶样品，批号(见表 1)，经北京康仁堂药业有限公司于立伟老师鉴定为蓼科植物蓼蓝 Polygonum tinctorium Ait.的干燥叶。2方法2.1标准汤剂的制备参照医疗机构中药煎
13、药室管理规范 及 中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求12中有关规定制备蓼大青叶标准汤剂。最终确定标准汤剂制备工艺为:取 15 批蓼大青叶饮片各 200 g，置于煎药壶中，一煎加入饮片量 10 倍水，浸泡 30 min，武火煮沸后，文火煎煮 20min，滤布过滤;二煎加入饮片量 8 倍水，武火煮沸后，文火煎煮 15 min，滤布过滤，合并滤液，减压浓缩(65 以下)至料液比约 11 的浸膏，放置冻干盘中进行冷冻干燥，得到 15 批蓼大青叶标准汤剂冻干粉。2.2出膏率测定称定“2.1”中各批次标汤液重量，充分混匀后取出总药液质量(M1M0)的十分之一，称定重量(M样)，置于已恒重(M皿)的蒸发
14、皿中，水浴蒸干，置于 105 电热鼓风干燥箱中，干燥 6 h 后，取出，置干燥器中放冷至室温，称重，再在上述温度干燥 1 h，放冷，称重(M2)，计算出膏率=(M2M皿)(M1M0)/(M样M药)100%，结果(见表2)。表 115 批蓼大青叶产地信息表编号批号产地S1K478YP01河北省保定市安国市S2K478YP02河北省保定市竞秀区S3K478YP03河北省保定市莲池区S4K478YP04辽宁省沈阳市苏家屯区S5K478YP05辽宁省沈阳市大东区S6K478YP06河北省保定市来水县S7K478YP07河北省邢台市襄都区S8K478YP08陕西省西安市渭南县S9K478YP09陕西省西
15、安市富平县S10K478YP10河北省邢台市内丘县S11K478YP11河北省邢台市柏乡县S12K478YP12河北省承德市双桥区S13K478YP13河北省承德市双滦区S14K478YP14河北省承德市承德县S15K478YP15河北省承德市兴降县表 215 批蓼大青叶出膏率及含量结果批号饮片含量(mgg1)标准汤剂出膏率(%)鸟苷含量(mgg1)K478YP010.7214.982.79K478YP020.6514.712.00K478YP030.7214.992.70K478YP040.5214.592.14K478YP050.5014.551.96K478YP060.4614.051.
16、67K478YP070.4114.351.89K478YP080.5513.621.69K478YP090.6414.932.84K478YP100.7714.142.26K478YP110.6113.232.04K478YP120.5013.811.68K478YP130.6014.282.26K478YP140.4613.772.07K478YP150.6714.652.37表 3梯度洗脱表时间(min)流动相 A(%)流动相 B(%)0 1039710 15325977515 202555754520 255564453625 356490361035 4590102.3鸟苷含量测定方法的建立2.3.1色谱条件:Agilent ZOBAX Bonus-P 色谱柱(柱长72Strait Pharmaceutical Journal Vol.35 No.4 2023250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 m);以甲醇为流动相 A，以水为流动相 B，按表 3 中的规定进行梯度洗脱;柱温为 30;流速为 1.0 mLmin1;检测波长为 260 nm;进样量 10 L。理论板数按鸟苷
