1、,乙肝病毒五项检测,第一页，共十七页。,双抗体夹心法,乙型肝炎病毒外表抗原乙型肝炎病毒外表抗体乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒e抗体乙型肝炎病毒核心抗体,双抗体夹心法,双抗原夹心法,竞争抑制法,竞争抑制法,乙肝病毒五项检测,第二页，共十七页。,乙型肝炎病毒外表抗原,检验原理本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被纯化乙肝外表抗体HBsAb，配以酶标记抗体HBsAb-HRP及TMB显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的乙肝外表抗原HBsAg。,第三页，共十七页。,乙型肝炎病毒外表抗原,样本要求本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验
2、。不能检测含叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样品。样品中应无微生物，可在28储存一周，长期储存应低温冻存，防止反复冻融。使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。,第四页，共十七页。,乙型肝炎病毒外表抗原,检验方法配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照孔3孔，阳性对照孔2孔和空白对照孔1孔。用双波长检测，可不设空白对照孔。稀释：每孔参加样品稀释液20 L，空白对照孔除外。加样：分别在相对应孔中参加待测样品或阴性、阳性对照100L，轻轻振荡混匀。非常重要温育：用封板膜封后，置371温育602分钟。如有酶联反响加速仪
3、温育时间可减半。加酶：每孔参加酶标试剂50L，空白孔除外，轻轻振荡混匀。温育：用封板膜封后，置371温育301分钟。如有酶联反响加速仪温育时间可减半。洗版：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，拿出来在扣在洗版纸上重重拍干。显色：每孔参加显色剂A、B液底物各50L，轻轻振荡混匀，371避光显色30分钟。测定：每孔参加终止液50L，轻轻振荡混匀，十分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处建议用双波长450um/600650nm，用空白孔凋零点后测定各孔A值。,第五页，共十七页。,乙型肝炎病毒外表抗原,第六页，共十七页。,乙型肝炎病毒外表抗原,本卷须知本样品仅用于体外诊断，操作应按说明说严格进行。
4、封板膜不能重复使用，不同批号、酶标试剂和阴性对照不可混用，不能与其它厂家试剂混用。防止在有挥发性物质及次氯酸类消毒液如84消毒液的环境下操作。使用前请将试剂平稳至室温平衡30分钟以上，实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即回放28。未用完的微孔板条与枯燥剂一起用自封袋密封28保存。过期试剂请勿使用。加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。参加不同样品或不同试剂组份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。洗涤时各孔均匀需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定3060秒浸泡时间。在洗版结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板枯燥。防止长时间的中断实验步骤，以确保每孔
5、实验条件的均一。结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕可能影响板孔的读值。所有样品、废液和废弃物都应按照传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意平安。显色时必须先加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。由于ELISA反响原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HBV乙型肝炎感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。,第七页，共十七页。,乙型肝炎病毒外表抗体,【检验原理】本试剂采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被乙肝外表抗原HBsAg，参加待测样品及酶标抗原HBsAg-HRP试剂进行温育。样品中的HB
6、sAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原-抗体-酶标抗原复合物。洗板后参加显色剂TMB，复合物上连接的HRP催化显色剂反响，生成蓝色产物，终止反响后为黄色。假设样品中乙无型肝炎外表抗体时，不显色。,第八页，共十七页。,乙型肝炎病毒外表抗体,【检验方法】配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20稀释。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔用双波长检测，可不设空白对照孔。加样：分别在相应孔中参加待测样品及阴、阳性对照各50ul。加霉：每孔参加酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。温育：用封板膜封板后，置于37温育30分钟。洗涤：小心揭掉封板莫，用洗板机洗
7、涤5遍，最后一次尽量扣干。显色：每孔参加显色剂A、B液各50ul，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟。测定：每孔加终止液50ul，轻轻震荡混匀，10分钟内测定结果。,第九页，共十七页。,乙型肝炎病毒e抗体,检验原理：本试剂采用竞争抑制酶联免疫法吸附法实验原理，在微孔板上预包被乙肝e抗原，参加待测样品及酶标抗体HBeAb-HRP试剂进行温育，酶标抗体和样品中的HBeAb竞争酶标板上的包被抗原。假设样本中无乙型肝炎e抗体时，酶标抗体与包被抗原结合形成“包被抗原-酶标抗体复合物，洗板后参加显色剂TMB，复合物上连接的HRP催化显色剂反响，生产蓝色产物，终止反响后变为黄色。假设样本中存在乙型肝炎e抗体
8、时，会与酶标抗体竞争形成“包被抗原-抗体复合物，不显色。,第十页，共十七页。,乙型肝炎病毒e抗体,检验方法：配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔用双波长检测，可不设空白对照孔。加样：分别在相应孔中参加待测样品及阴、阳性对照各50l。加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。温育：用封板膜封板后置37温育30min。洗涤：小心撕掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。显色：每孔加人显色剂A、B液各50l，轻轻振荡混匀，37避光显色15min。测定：每孔加终止液50l，轻轻振荡混匀，1
9、0min内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处建议用双波长450nm/600-650nm检测，用空白孔调零点后测定各孔A值。,第十一页，共十七页。,乙型肝炎病毒核心抗体,乙型肝炎病毒核心抗体抗-HBc、e抗体抗-HBe检测1抗-HBc检测 先用生理盐水将待测血清作1:30稀释，然后取50l参加相应的包被板或条中，同时设阳性、阴性及空白对照各一孔对照血清不必稀释；再向每孔参加酶结合物50l空白孔不加，再进行同1的操作。但结果观察需反看：目测法是以不显色无色孔为阳性；比色法是以标本吸光度A值0.5N阴性对照值为阴性，标本吸光度A值0.5N者判为阳性。,第十二页，共十七页。,乙肝五项的32种组合,第十三页，共十七页。,第十四页，共十七页。,第十五页，共十七页。,谢谢,第十六页，共十七页。,内容总结,乙肝病毒五项检测。加酶：每孔参加酶标试剂50L，空白孔除外，轻轻振荡混匀。参加不同样品或不同试剂组份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。在洗版结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板枯燥。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。加霉：每孔参加酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。谢谢,第十七页，共十七页。,
