1、第4 4卷第3期河 北 科 技 大 学 学 报V o l.4 4,N o.32 0 2 3年6月J o u r n a l o fH e b e iU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n dT e c h n o l o g yJ u n e2 0 2 3 文章编号:1 0 0 8-1 5 4 2(2 0 2 3)0 3-0 2 7 7-0 9冷水鱼固着类纤毛虫P C R检测方法探讨及感染因素分析王雨维1,2,南汇珠1,2,殷 实1,曹梦娟1,2,刘莉雯1,2,卢 鑫1,2,安瑞永1,马 磊1,2(1.河北师范大学生命科学学院教育部分子细胞生物学重点实验室
2、,河北石家庄 0 5 0 0 2 4;2.河北师范大学生命科学学院河北省生态环境协同创新中心,河北石家庄 0 5 0 0 2 4)摘 要:针对冷水鱼养殖中固着类纤毛虫检测难和污染源不明确、种类鉴定难的问题,对冷水鱼养殖环境中固着类纤毛虫的主要寄生种类及感染因素进行调查分析,在不同季节于河北省内采集冷水鱼和水环境样本。首先,采用形态学方法对鱼体及水环境中的固着类纤毛虫进行初步鉴定;然后,建立P C R方法进行分子水平鉴定,并进行系统发育学分析;最后,对冷水鱼感染寄生虫的原因进行分析。形态学鉴定结果表明,冷水鱼寄生的固着类纤毛虫主要有累枝虫(E p i s t y l i ss p.)和钟虫(V
3、o r t i c e l l as p.)2类;引物设计、敏感性和特异性试验结果显示,建立的寄生虫P C R检测方法有效,测序比对和系统发育分析结果进一步验证了其形态学结果;运用已建立的P C R方法检测出固着类纤毛虫在水环境中高达9 4.3 8%,鱼体广泛寄生,感染率达到了1 0 0%;且无季节差异,水体中的虫体可能是造成鱼长期感染的原因之一。研究数据可为冷水鱼病害的科学预测、预防和治疗提供依据,同时为冷水鱼养殖产业的可持续发展提供疫病防治参考。关键词:动物寄生虫学;冷水鱼;纤毛虫;形态学;系统发育分析中图分类号:Q 9 5 9.1 7 文献标识码:A D O I:1 0.7 5 3 5/
4、h b k d.2 0 2 3 y x 0 3 0 0 8 收稿日期:2 0 2 3-0 5-2 5;修回日期:2 0 2 3-0 6-0 9;责任编辑:王淑霞基金项目:中国博士后面上项目(2 0 1 9 M 6 5 1 0 6 1);河北省重点研发计划项目(2 2 3 2 6 7 0 3 D);石家庄市厅市会商专项资金项目(2 2 5 5 0 0 3 9 5 A)第一作者简介:王雨维(1 9 9 7),女,河北唐山人,硕士研究生,主要从事水生动物学方面的研究。通信作者:马 磊副教授。E-m a i l:l m a h a p p y h e b t u.e d u.c n王雨维,南汇珠,殷实
5、,等.冷水鱼固着类纤毛虫P C R检测方法探讨及感染因素分析J.河北科技大学学报,2 0 2 3,4 4(3):2 7 7-2 8 5.WAN GY u w e i,NAN H u i z h u,Y I NS h i,e t a l.D i s c u s s i o no fP C Rd e t e c t i o nm e t h o da n d i n v e s t i g a t i o no f i n f e c t i o n f a c t o r so f s e d e n t a r i u s c i l i-a t e s i nc o l d-w a t e
6、r f i s hJ.J o u r n a l o fH e b e iU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y,2 0 2 3,4 4(3):2 7 7-2 8 5.D i s c u s s i o no fP C Rd e t e c t i o nm e t h o da n d i n v e s t i g a t i o no fi n f e c t i o nf a c t o r so f s e d e n t a r i u sc i l i a t e s i nc o l d-w a t
7、 e r f i s hWANGY u w e i1,2,NAN H u i z h u1,2,Y I NS h i1,C AO M e n g j u a n1,2,L I UL i w e n1,2,L UX i n1,2,ANR u i y o n g1,MAL e i1,2(1.K e yL a b o r a t o r yo fm o l e c u l a r c e l l b i o l o g y,M i n i s t r yo fE d u c a t i o n,C o l l e g eo fL i f eS c i e n c e s,H e b e iN o r
8、 m a lU n i v e r s i t y,S h i-河 北 科 技 大 学 学 报2 0 2 3年j i a z h u a n g,H e b e i 0 5 0 0 2 4,C h i n a;2.H e b e i C o l l a b o r a t i v e I n n o v a t i o nC e n t e r f o rE c o-E n v i r o n m e n t,C o l l e g e o fL i f eS c i e n c e s,H e-b e iN o r m a lU n i v e r s i t y,S h i j i a z
9、 h u a n g,H e b e i 0 5 0 0 2 4,C h i n a)A b s t r a c t:A i m i n ga tt h ep r o b l e m o fd i f f i c u l td e t e c t i o n o fs e d e n t a r i u sc i l i a t e s,u n c l e a rp o l l u t i o ns o u r c e sa n d d i f f i c u l ti d e n t i f i c a t i o no f s p e c i e s i n t h e c o l d-w
10、 a t e r f i s hf a r m i n g,t h em a j o rp a r a s i t i c s p e c i e so f t h ep a r a s i t e s a n d t h e i n f e c t i v e f a c t o r sw e r ei n v e s t i g a t e da n da n a l y z e d.S a m p l e so f c o l d-w a t e r f i s ha n dw a t e rw e r ec o l l e c t e di nd i f f e r e n ts e
11、a s o n s i nH e b e iP r o v i n c e.F i r s t l y,t h es e d e n t a r i u sc i l i a t e so n t h e f i s hb o d ya n d i n t h ew a t e r e n v i r o n m e n tw e r e i n i t i a l l y i d e n t i f i e db yu s i n gm o r p h o l o g y.S e c o n d l y,aP C R m e t h o dw a s e s t a b l i s h e
12、d f o rm o l e c u l a r l e v e l i d e n t i f i c a t i o na n dp h y l o g e n e t i c a n a l y s i s.F i n a l l y,t h e r e a s o n s f o r c o l d-w a t e r f i s hi n f e c t i n gt h ep a r a s i t ew e r ea n a l y z e d.M o r p h o l o g i c a l i d e n t i f i c a t i o nr e v e a l s t
13、 h a t t h em a i n l yp a r a s i t i cs p e c i e so f s e d e n t a r i u sc i l i a t e sw e r eE p i s t y l i ss p.a n dV o r t i c e l l as p.;AP C Rm e t h o d t o t e s t t h ep a r a s i t e s i s s u c c e s s f u l l ye s t a b l i s h e d.T h e r e s u l t so f s e q u e n c e sa l i g
14、n m e n t a n dp h y l o g e n e t i ca n a l y s i sv e r i f y t h e c o r r e c t n e s so fm o r p h o l o g i c a l t e s t.T h ee s t a b l i s h e dP C Rm e t h o d i su s e dt od e t e c tt h ep r e v a l e n c eo f s e s s i l ec i l i a t e s i nt h ew a t e r e n v i r o n m e n t,w h i c
15、 h i sa sh i g ha s9 4.3 8%,a n dt h e i n f e c t i o nr a t eo f t h e f i s h i su pt o1 0 0%w i t hn os e a s o n a l d i f f e r e n c e.T h ep a r a s i t e s i nw a t e rm a yb eo n eo f t h er e a s o n s f o r t h e l o n g-t e r mi n f e c t i o no f t h ef i s h.T h e f i n d i n g sp r o
16、 v i d eas c i e n t i f i cb a s i s f o rp r e d i c t i n g,p r e v e n t i n ga n dt r e a t i n gc o l d-w a t e r f i s hd i s e a s e s,a sw e l l a ss e r v i n ga sar e f e r e n c e f o rd i s e a s ep r e v e n t i o na n dc o n t r o l i nt h es u s t a i n a b l ed e v e l o p m e n to f t h ec o l d-w a t e r f i s hf a r m i n g i n d u s t r y.K e y w o r d s:a n i m a l p a r a s i t o l o g y;c o l d-w a t e r f i s h;s e d e n t a r i u sc i l i a t e;m o r p h o l o g y;p h y
