1、安徽科技学院学报,2 0 2 3,3 7(3):1 6-2 2 J o u r n a l o fA n h u iS c i e n c ea n dT e c h n o l o g yU n i v e r s i t y 收稿日期:2 0 2 2-1 0-1 9基金项目:广东省自然科学基金(2 0 2 1 B 1 5 1 5 1 2 0 0 0 6);河源市科技计划项目(2 0 2 1 0 0 8);云浮市科技计划项目(2 0 2 1 0 4 0 2 0 2,2 0 2 1 0 2 0 6 0 4,2 0 2 1 0 2 0 6 0 7);科技 创 新 战 略 专 项 资 金(高 水
2、平 农 科 院 建 设)(X T XM 2 0 2 2 0 2,2 0 2 1 1 0 T D,2 0 2 1 2 2 T D,R 2 0 2 0 P Y-J C 0 0 1,R 2 0 1 9 Y J-Y B 3 0 1 0,R 2 0 2 0 P Y-J G 0 1 3,R 2 0 2 0 Q D-0 4 8,R 2 0 2 1 P Y-QY 0 0 7);广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项(2 0 2 2 K J 1 1 9)。作者简介:刘少冰(1 9 9 8-),男,安徽宣城人,硕士研究生,主要从事鸡坏死性肠炎综合防控研究。通信作者:顾有方,教授,E-m a i l:y o u
3、 f a n g g u 1 6 3.c o m。G型产气荚膜梭菌全菌灭活疫苗的研制及其免疫效力的评估刘少冰1,2,方肆云3,戚南山2,廖申权2,魏光伟2,李 娟2,孙铭飞2,顾有方1*(1.安徽科技学院 动物科学学院,动物营养调控与健康安徽省重点实验室,安徽 凤阳 2 3 3 1 0 0;2.广东省农业科学院 动物卫生研究所,广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室,广东 广州 5 1 0 6 4 0;3.温氏食品集团股份有限公司,广东 新兴 5 2 7 4 0 0)摘 要:目的:以临床分离的G型产气荚膜梭菌(C l o s t r i d i u mp
4、 e r f r i n g e n st y p eG,G C P)G C P-D 2 5菌株为对象,研制G C P全菌灭活苗,并评估疫苗免疫效力。方法:利用甲醛灭活法处理G C P-D 2 5菌液,白油佐剂乳化后免疫1日龄雏鸡检测灭活效果;1 5 0只1日龄8 1 7肉鸡,随机分为5组(G1G5),即高剂量免疫组、中剂量免疫组、低剂量免疫组、攻菌对照组和空白对照组。G1G3组分别于1、8、1 5日龄通过皮下注射不同剂量的G C P-D 2 5乳化灭活疫苗进行免疫,G4G5组通过皮下注射P B S,其中G1G4组于2 62 9日龄每天灌服1次81 08C F U/m LG C P新鲜菌液,G
5、5组为不攻菌对照组。分别于一免、二免和三免后第7天采集鸡血液并分离血清,采用E L I S A方法检测血清抗体及I L-2、I N F-水平,同时结合攻菌后鸡临床表现及肠道病变计分等指标评估疫苗免疫保护效果。结果:G C P-D 2 5全菌液能被0.5%甲醛完全灭活,灭活时间为3 6h。间接E L I S A测定抗原(全菌液)的最佳包被浓度为21 08C F U/m L,血清最佳稀释度为14 0 0。肉鸡免疫保护试验显示,攻菌对照组试验鸡的坏死性肠炎病变平均分显著 高于各免疫 组(P0.0 1)。三免后第7天,各免疫组试验鸡血清抗体呈阳性,高剂量与中剂量免疫组试验鸡I L-2与I F N-含量
6、均显著高于空白对照组(P0.0 5)。结论:G C P-D 2 5全菌灭活疫苗免疫1日龄8 1 7肉鸡可诱导机体产生高水平免疫应答,能够在一定程度上预防鸡坏死性肠炎的发生。关键词:产气荚膜梭菌;坏死性肠炎;灭活疫苗;抗体水平;细胞因子中图分类号:S 8 5 2.6 1文献标志码:A文章编号:1 6 7 3-8 7 7 2(2 0 2 3)0 3-0 0 1 6-0 7开放科学(资源服务)标识码(O S I D):D O I:1 0.1 9 6 0 8/j.c n k i.1 6 7 3-8 7 7 2.2 0 2 3.0 0 5 0S t u d yo fw h o l e s t r a i
7、 n i n a c t i v a t e dC l o s t r i d i u mp e r f r i n g e n st y p eGv a c c i n ea n d i t s i mm u n e e f f i c a c yL I US h a o b i n g1,2,F ANGS i y u n3,Q IN a n s h a n2,L I AOS h e n q u a n2,WE IG u a n g w e i2,L I J u a n2,S UN M i n g f e i2,GUY o u f a n g1*(1.C o l l e g eo fA n
8、i m a lS c i e n c e,A n h u iP r o v i n c eK e yL a b o r a t o r yo fA n i m a lN u t r i t i o n a lR e g u l a t i o na n dH e a l t h,A n h u i S c i e n c ea n dT e c h n o l o g yU n i v e r s i t y,F e n g y a n g2 3 3 1 0 0,C h i n a;2.I n s t i t u t eo fA n i m a lH e a l t h,G u a n g d
9、 o n gP r o v i n c eK e yL a b o r a t o r yo fA n i m a lD i s e a s eC o n t r o l a n dP r e v e n t i o n,K e yL a b o r a t o r yf o rA v i a nI n f l u e n z aa n dO t h e rP o u l t r yD i s e a s e s,M i n i s t r yo fA g r i c u l t u r ea n dR u r a lA r e a s,G u a n g d o n gA c a d e m
10、 yo fA g r i c u l t u r a lS c i e n c e s,G u a n g z h o u5 1 0 6 4 0,C h i n a;3.W e n sF o o d s t u f f sG r o u pC o.,L t d.,X i n x i n g5 2 7 4 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e:C l o s t r i d i u mp e r f r i n g e n st y p eG(G C P)i sab a c t e r i a lp a t h o g e n,w h i
11、 c hc a nc a u s en e c r o t i ce n t e r i t i s i nb r o i l e r s.G C Pi n a c t i v ew h o l eb a c t e r i a l v a c c i n ew a sp r e p a r e da n d i t s i mm u n ee f f i c a c yw a ss t u d i e d.M e t h o d s:T h eb a c t e r i a ls o l u t i o no fG C P-D 2 5w a si n a c t i v a t e dw i
12、 t h0.5%f o r m a l d e h y d e.O n e-d a y-o l dc h i c k s w e r ei mm u n i z e d w i t hi n a c t i v a t e dv a c c i n et od e t e c tt h ei n a c t i v a t i o ne f f e c t.T h ea n t i b o d y,I L-2 a n dI N F-w e r ed e t e c t e d b y E L I S A a t7 d a y sa f t e rt h ef i r s t,s e c o n
13、 da n dt h i r di mm u n i z a t i o n.T h e i mm u n ee f f e c to f t h ev a c c i n ew a se v a l u a t e db yt h e l e v e l so fs e r u ma n t i b o d i e s,I L-2a n dI N F-,c l i n i c a l s y m p t o m sa n d i n t e s t i n a l l e s i o ns c o r e sa f t e rc h a l l e n g e.R e s u l t s:T
14、 h ew h o l eb a c t e r i a ls o l u t i o no fG C P-D 2 5c o u l db ec o m p l e t e l yi n a c t i v a t e db y0.5%f o r m a l d e h y d ef o r3 6h.T h eo p t i m a lc o a t i n gc o n c e n t r a t i o no fw h o l eb a c t e r i a ls o l u t i o nb yi n d i r e c tE L I S A w a s21 08C F U/m L,a
15、 n dt h eo p t i m a l d i l u t i o no f s e r u m w a s14 0 0.T h er e s u l t so f i mm u n i z a t i o nt r i a li nv i v os h o w e dt h a t t h em e a nl e s i o ns c o r e so f n e c r o t i z i n ge n t e r i t i s i n t h e c h a l l e n g e c o n t r o l g r o u pw e r e s i g n i f i c a
16、n t l yh i g h e r t h a n t h o s e i nt h eh i g h,m e d i u m,l o wd o s e i n a c t i v a t e dv a c c i n eg r o u p sa n dt h en e g a t i v ec o n t r o l g r o u p(P0.0 1).O nt h e7 t hd a ya f t e r t h e t h i r d i mm u n i z a t i o n,t h ea n t i b o d yo f t h ec h i c k e n s i nd i f f e r e n t i mm u n i z a t i o ng r o u p sw e r ea l l p o s i t i v ec o m p a r e dw i t ht h en e g a t i v ec o n t r o lg r o u p.T h e l e v e l so f I L-2a n dI N F-i nh i g hd o s eg r o u
