1、基础研究m i R a p基于P H D/H I F 通路对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡作用的研究赵洁,李嘉,赵小丹,丁鹏,苗昌荣(唐山市协和医院心内科,河北 唐山 )D O I:/b j m y i s s n 收稿日期:;修回日期:基金项目:河北省医学科学研究课题(编号:)作者简介:赵洁(),女,本科,研究方向:心力衰竭.T e l:;E m a i l:z h a o j i e c o m通讯作者:苗昌荣(),本科,副主任医师,研究方向:心力衰竭.E m a i l:z h a o j i e c o m摘要:目的通过缺氧诱导信号通路P H D/H I F 探究m i R a p对慢性
2、心力衰竭(C H F)模型大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法将大鼠随机分为假手术组、C H F组、N C组和m i R a p组,每组 只.C H F组、N C组与m i R a p组建立大鼠C H F模型,假手术组除不进行结扎外其他操作相同.N C组和m i R a p组分别尾静脉注射 n m o lN C a g o m i R和m i R a p a g o m i R,每天次,连续注射周,假手术组和C H F组通过尾静脉注射给予等量生理盐水.对大鼠心肌组织进行m a s s o n染色,实时定量P C R法检测大鼠心肌组织m i R a p表达水平,T u n e l法检测大鼠心肌组织进行凋
3、亡检水平,E L I S A法检测心肌组织氧化损伤因子超氧化物歧化酶(S O D)和丙二醛(MD A)水平,实时定量P C R法和W e s t e r nb l o t t i n g法检测心肌组织脯氨酸羟化酶(P H D)及低氧诱导因子 (H I F )m R N A及蛋白表达水平.结果与假手术组相比,C H F组和N C组出现心肌肥大并伴有大量纤维细胞出现,m i R a p组大鼠心肌肥大有所缓解,纤维细胞减少;C H F组和N C组心肌组织m i R a p表达水平有降低趋势,m i R a p组表达显著上升(P );C H F组和N C组心肌细胞显著增加(P ),m i R a p组
4、心肌细胞凋亡与C H F组和N C组相比显著降低,但仍高于假手术组(P );C H F组和N C组大鼠心肌组织S O D显著降低、MD A表达显著升高(P ),与C H F组和N C组相比,m i R a p组S O D显著升高、MD A表达显著降低(P );C H F组和N C组P H D m R N A和蛋白均有上调趋势,H I F 有下调趋势,与C H F组和N C组相比,m i R a p组P H D m R N A及其蛋白表达下调,H I F 表达上调(P ).结论m i R a p可以抑制C H F大鼠心肌细胞凋亡,提高S O D表达,降低MD A表达,降低氧化损伤,其机制与缺氧诱
5、导信号通路P H D/H I F 的调控相关.关键词:m i R a p;慢性心力衰竭;凋亡;氧化损伤;P HD/H I F 信号通路中图分类号:R 文献标识码:AA p o p t o s i s I n h i b i t i o nE f f e c t o fM i R a po nC a r d i a cF u n c t i o n i nR a t sw i t hC h r o n i cH e a r tF a i l u r eb yR e g u l a t i n gP H D/H I F S i g n a l i n gP a t h w a yZHAOJ i e
6、,L I J i a,ZHAOX i a o d a n,D I NGP e ng,M I AOC h a ngr o ng(I n t e r n a lM e d i c i n e C a r d i o v a s c u l a rD epa r t m e n t,T a ngs h a nU n i o nM e d i c a lC o l l egeH o spi t a l,T a ngs h a n ,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v eT oe xpl o r et h ee f f e c to fm i R a po
7、 nc a r d i o myo cyt eapopt o s i s i nr a t sw i t hc h r o n i ch e a r t f a i l u r e t h o ughP H D/H I F pa t h w ay M e t h o d s S P FW i s t a r r a t sw e r e r a n d o m lyd i v i d e d i n t o t h e s h a mope r a t i o ngr o up(n ),C H Fgr o up(n ),N Cgr o up(n)a n dm i R a pgr o up(n)
8、C H Fgr o up,N Cgr o upa n dm i R a pgr o upw e r eu s e dt oe s t a b l i s ht h er a tm o d e l o fc h r o n i ch e a r t f a i l u r e T h eL a b e l e dI mm u n o a s s a y s&C l i nM e d,M a r ,V o l ,N o s h a mope r a t i o ngr o upr e c e i v e dt h es a m eope r a t i o ne x c ept l iga t i
9、 o n N Cgr o upa n dm i R a pgr o upw e r ei nje c t e dw i t h n m o lN Cago m i Ra n dm i R a p ago m i Rt h r o ughc a u d a lv e i nr e spe c t i v e ly,o n c ee v e ryd ays f o r w e e k s T h e s h a mope r a t i o ngr o upa n dC H Fgr o upw e r e i nje c t e dw i t ht h es a m ea m o u n to f
10、 s a l i n et h r o ughc a u d a lv e i n M a s s o ns t a i n i ngw a spe r f o r m e do nt h e myo c a r d i u m o fr a t si ne a c hgr o up T h ee xpr e s s i o nl e v e lo f m i R a pw a sd e t e c t e dbyr e a l t i m equ a n t i t a t i v eP C R,w h i l et h eapopt o s i sw a sd e t e c t e db
11、yT U N E L,a n dt h el e v e l so fo x i d a t i v e d a m agef a c t o r ss upe r o x i d e d i s m u t a s e(S O D)a n dm a l o n d i a l d e hyd e(MD A)w e r ed e t e c t e dbyE L I S A R e a l t i m equ a n t i t a t i v eP C Ra n dw e s t e r nb l o tw e r eu s e dt od e t e c tpr o l i n ehyd
12、r o xyl a s e(P H D)a n dhy po x i ai n d u c i b l ef a c t o r i nmyo c a r d i a l t i s s u e(H I F )R e s u l t sC o mpa r e dw i t ht h e s h a mope r a t i o ngr o up,myo c a r d i a l hy pe r t r ophya n da l a rgen u m b e r o f f i b r o b l a s t sap pe a r e d i nC H Fgr o upa n dN Cgr o
13、 up,w h i l em i R a pgr o up,myo c a r d i a lhy pe r t r ophyr e l i e v e da n df i b r o b l a s t s r e d u c e d T h ee xpr e s s i o no fm i R a pd e c r e a s e di nC H Fgr o upa n d N Cgr o up,w h i l et h ee xpr e s s i o no fm i R a pi n c r e a s e ds ign i f i c a n t lyi n m i R a pgr
14、o up(P )T h ee xpr e s s i o no fc a r d i o myo cyt e s i nC H Fgr o upa n dN Cgr o upi n c r e a s e d s ign i f i c a n t ly(P )C a r d i o myo cyt eapopt o s i s i nm i R a pgr o upw a ss ign i f i c a n t lyl o w e rt h a nC H Fgr o upa n dN Cgr o up(P )S O Dd e c r e a s e ds ign i f i c a n t
15、 lya n dMD Ai n c r e a s e d s ign i f i c a n t ly(P ),c o mpa r e dw i t hC H Fgr o upa n dN Cgr o up S O Di nm i R a pgr o upi n c r e a s e ds ign i f i c a n t lya n dMD Ad e c r e a s e ds ign i f i c a n t ly(P )P H D m R N Aa n dpr o t e i nw e r eup r egu l a t e da n dH I F d o w n r egu
16、l a t e di nC H Fgr o upa n dN Cgr o up,c o mpa r e dw i t hC H Fgr o upa n dN Cgr o up P H D m R N Aa n dpr o t e i nw e r ed o w n r egu l a t e da n dH I F up r egu l a t e d i nm i R a pgr o up C o n c l u s i o n m i R a pc a ni n h i b i tc a r d i o myo cyt eapopt o s i s,i n c r e a s eS O De xpr e s s i o na n dr e d u c eMD Ae xpr e s s i o n,r e d u c eo x i d a t i v ed a m age i nr a t sw i t hc h r o n i ch e a r t f a i l u r e I t i spo t e n t i a l lyr e l a t e dt ot h er egu
