1、GB/T31798一2015油菜黑胫病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了油菜黑胫病菌(Plenodomus biglobosus)的检疫鉴定方法。本标准适用于油菜种子、植株及其产品中油菜黑胫病菌的检疫和鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3仪器设备和主要试剂3.1仪器设备生物显微镜、体视显微镜、高速冷冻离心机、纯水仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、PCR仪、凝胶成像系统、电泳仪、培养箱、超低温冰箱、常规冰箱、涡旋振
2、荡器。3.2主要试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，试验用水符合GB/T6682。3.2.11%次氯酸钠3.2.2DNA提取试剂：DNA提取试剂盒，异丙醇，无水乙醇。尿素提取液(7mol/L Urea、50mmol/LTris-HCI pH8.0、62.5mmol/LNaC1、1%SDS),蛋白酶K(20mg/mL),苯酚：三氯甲烷：异戊醇(25：24：1)溶液，3mol/L NaAc(pH5.2)。3.2.3PCR试剂：10XPCR缓冲液（含25mmol/L MgSO,),Tag酶，dNTPs.3.2.4凝胶电泳试剂：琼脂糖，TAE,Loading缓冲液，EB。3.2.520%V8培养基：V8蔬菜汁(Campbell Soup公司)200mL,CaCO30.75g,琼脂粉13.0g,蒸馏水定容至1000mL,调整pH至5.8,121高压灭菌20min。3.2.6马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯浸粉5.0g,葡萄糖20.0g,氯莓素0.1g,琼脂13.0g,蒸馏水定容至1000mL,调整pH至5.6,121高压灭菌20min。4病菌的鉴定4.1症状检查4.1.1种子症状检查取样品量1%5%（若样品少可适量增大比例）的种子，在解剖镜下挑选皱缩、干瘪、变色、残缺的种子或有霉变的籽粒或病残体，每份种子样品挑选不少于500粒，用做病原菌的分离。另取1kg种子，1
