1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B8 2 7 02 0 1 4食品安全国家标准食品添加剂 甜菊糖苷2 0 1 5-0 1-2 8发布2 0 1 5-0 7-2 8实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发 布G B8 2 7 02 0 1 4 前 言 本标准代替G B8 2 7 01 9 9 9 食品添加剂 甜菊糖甙。本标准与G B8 2 7 01 9 9 9相比,主要变化如下:标准名称修改为“食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷”;修改了标准结构;修改了结构式、分子式和相对分子质量等相关内容;取消了理化指标中的等级要求,统一指标;修改了鉴别试验;修改了理化指标中甜菊糖苷含量
2、、灼烧残渣和干燥减量指标;删除了理化指标中甜度、比旋光度、比吸光度和重金属指标;增加了铅、甲醇和乙醇指标。G B8 2 7 02 0 1 41 食品安全国家标准食品添加剂 甜菊糖苷1 范围本标准适用于以甜叶菊(S t e v i aR e b a u d i a n aB e r t o n i)干叶为原料,经提取、精制而得的食品添加剂甜菊糖苷。主要糖苷为甜菊苷和瑞鲍迪苷A,其他已知糖苷包括瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷及甜菊双糖苷。2 分子式、结构式和相对分子质量2.1 主要糖苷的分子式甜菊苷:C3 8H6 0O1 8瑞鲍迪苷A:C4 4H7 0O2 32.
3、2 9种糖苷的结构式9种糖苷的化合物名称、R1位取代基和R2位取代基见表1。表1 9种糖苷的化合物名称、R1位取代基和R2位取代基化合物名称中文名称英文名称R1位取代基R2位取代基甜菊苷s t e v i o s i d e-G l c-G l c-G l c(21)瑞鲍迪苷Ar e b a u d i o s i d eA-G l c-G l c-G l c(21)|-G l c(31)瑞鲍迪苷Br e b a u d i o s i d eBH-G l c-G l c(21)|-G l c(31)瑞鲍迪苷Cr e b a u d i o s i d eC-G l c-G l c-R h a
4、(21)|-G l c(31)瑞鲍迪苷Dr e b a u d i o s i d eD-G l c-G l c(21)-G l c-G l c(21)|-G l c(31)瑞鲍迪苷Fr e b a u d i o s i d eF-G l c-G l c-X y l(21)|-G l c(31)G B8 2 7 02 0 1 42 表1(续)化合物名称中文名称英文名称R1位取代基R2位取代基杜克苷Ad u l c o s i d eA-G l c-G l c-R h a(21)甜茶苷r u b u s o s i d e-G l c-G l c甜菊双糖苷s t e v i o l b i o
5、 s i d eH-G l c-G l c(21)2.3 主要糖苷的相对分子质量甜菊苷:8 0 4.8 8(按2 0 0 7年国际相对原子质量)瑞鲍迪苷A:9 6 7.0 3(按2 0 0 7年国际相对原子质量)3 技术要求3.1 感官要求应符合表2的规定。表2 感官要求项 目要 求检验方法色泽状态白色至浅黄色粉末或晶体取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中,在自然光线下观察其色泽和状态3.2 理化指标应符合表3的规定。表3 理化指标项 目指 标检验方法甜菊糖苷含量(以干基计,w)/%8 5附录A中A.3灼烧残渣(w)/%1G B5 0 0 9.4干燥减量(w)/%6G B5 0 0 9.3直接干
6、燥法a铅(P b)/(m g/k g)1G B5 0 0 9.1 2总砷(以A s计)/(m g/k g)1G B5 0 0 9.1 1甲醇/(m g/k g)乙醇/(m g/k g)2 0 050 0 0附录A中A.4 注:商品化的甜菊糖苷产品应以符合本标准的甜菊糖苷为原料,可添加用于标准化目的的淀粉等食品原料。a 干燥温度和时间分别为1 0 52和2h。G B8 2 7 02 0 1 43 附 录 A检验方法A.1 一般规定本标准所用试剂和水,在没有注明其他要求时,均指分析纯试剂和G B/T6 6 8 2中规定的三级水。试验中所 用 标 准 滴 定 溶 液、杂 质 测 定 用 标 准 溶
7、液、制 剂 及 制 品,在 没 有 注 明 其 他 要 求 时,均 按G B/T6 0 1、G B/T6 0 2、G B/T6 0 3的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。A.2 鉴别试验A.2.1 甜菊苷和瑞鲍迪苷A试验在甜菊糖苷含量试验中,试样溶液的液相色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A两个主峰应与混合标准溶液的色谱图相对应。A.2.2 试样溶液的p H称取1g试样,溶于1 0 0m L水中,用酸度计测定试样溶液的p H在4.57.0。A.3 甜菊糖苷含量的测定A.3.1 方法一A.3.1.1 试剂和材料A.3.1.1.1 乙腈:色谱纯。A.3.1.1.2 磷酸二氢钠:色
8、谱纯。A.3.1.1.3 磷酸:色谱纯。A.3.1.1.4 水:G B/T6 6 8 22 0 0 8中规定的一级水。A.3.1.1.5 乙腈水溶液:乙腈和水的体积比为3 07 0。A.3.1.1.6 磷酸钠缓冲液(p H2.6):称取1.2 0g磷酸二氢钠(N a H2P O4),溶于8 0 0m L水中,用磷酸调节p H至2.6。A.3.1.1.7 甜菊苷标准品:甜菊苷含量(质量分数,以干基计)9 9.0%。A.3.1.1.8 瑞鲍迪苷A标准品:瑞鲍迪苷A含量(质量分数,以干基计)9 9.0%。A.3.1.1.9 其他7种糖苷标准品:瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A
9、、甜茶苷和甜菊双糖苷。A.3.1.2 仪器和设备高效液相色谱仪:配备紫外检测器,或其他等效的检测器。G B8 2 7 02 0 1 44 A.3.1.3 参考色谱条件A.3.1.3.1 色谱柱:C1 8反相色谱柱,2 5 0mm4.6mm,粒径5m;或其他等效的色谱柱。A.3.1.3.2 流动相:乙腈磷酸钠缓冲液=3 26 8。A.3.1.3.3 流动相流速:1.0m L/m i n。A.3.1.3.4 检测波长:2 1 0n m。A.3.1.3.5 进样量:2L1 0L。A.3.1.3.6 柱温:4 0。A.3.1.4 分析步骤A.3.1.4.1 混合标准品溶液的制备分别称取适量甜菊苷、瑞鲍
10、迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品,置于同一个容量瓶中,用乙腈水溶液完全溶解后定容,得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间。A.3.1.4.2 标准溶液的制备分别称取0.0 5g甜菊苷标准品和瑞鲍迪苷A标准品,精确至0.0 0 1g,分别置于5 0m L的容量瓶中,用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度,得到甜菊苷标准溶液和瑞鲍迪苷A标准溶液。A.3.1.4.3 试样溶液的制备称取0.0 5g 0.1g试样,精确至0.0 0 1g,置于5 0m L的容量瓶中,用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度,得到试样溶液。A.3.1.5 测定
11、在A.3.1.3参考色谱条件下,分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较,以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的峰面积。A.3.1.6 结果计算瑞鲍迪苷A含量(以干基计)的质量分数wa按式(A.1)计算:wa=mRmAaAR1 0 0%(A.1)式中:mR 瑞鲍迪苷A标准溶液中瑞鲍迪苷A的质量(以干基计),单位为毫克(m g);m 试样溶液中试样的质量(以干基计),单位为毫
12、克(m g);Aa 试样溶液色谱图中瑞鲍迪苷A的峰面积值;AR 瑞鲍迪苷A标准溶液色谱图中瑞鲍迪苷A的峰面积值。其他8种糖苷含量(以干基计)的质量分数wi按式(A.2)计算:wi=mSmfiAiAS1 0 0%(A.2)式中:i s、b、c、d、f、d a、r u、s b,分别对应甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、G B8 2 7 02 0 1 45 杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷;mS 甜菊苷标准溶液中甜菊苷的质量(以干基计),单位为毫克(m g);m 试样溶液中试样的质量(以干基计),单位为毫克(m g);fi i组分与甜菊苷的式量比值:1.0 0(甜菊苷)、1.0 0
13、(瑞鲍迪苷B)、1.1 8(瑞鲍迪苷C)、1.4 0(瑞鲍迪苷D)、1.1 6(瑞鲍迪苷F)、0.9 8(杜克苷A)、0.8 0(甜茶苷)、0.8 0(甜菊双糖苷);Ai 试样溶液色谱图中i组分的峰面积值;AS 甜菊苷标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积值。由式(A.1)和式(A.2)计算得到9种组分的含量wa、ws、wb、wc、wd、wf、wd a、wr u和ws b,取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。A.3.2 方法二A.3.2.1 试剂和材料A.3.2.1.1 乙腈:色谱纯。A.3.2.1.2 磷酸二氢钠:色谱纯。A.3.2.1.3 磷酸:色谱纯。A.3.2.1.4 水:G B/T6 6
14、 8 22 0 0 8中规定的一级水。A.3.2.1.5 乙腈水溶液:乙腈和水的体积比为3 07 0。A.3.2.1.6 磷酸钠缓冲液(p H2.6):称取1.2 0g磷酸二氢钠(N a H2P O4),溶于8 0 0m L水中,用磷酸调节p H至2.6,用水稀释至10 0 0m L。A.3.2.1.7 甜菊苷标准品:甜菊苷含量(质量分数,以干基计)9 9.0%。A.3.2.1.8 其他8种糖苷标准品:瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷。A.3.2.2 仪器和设备同A.3.1.2。A.3.2.3 参考色谱条件同A.3.1.3。A.3.2.4
15、 分析步骤A.3.2.4.1 混合标准品溶液的制备分别称取适量甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品,置于同一个容量瓶中,用乙腈水溶液完全溶解后定容,得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间。A.3.2.4.2 标准溶液的制备称取0.0 5g甜菊苷标准品,精确至0.0 0 1g,置于5 0m L的容量瓶中,用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度,得到甜菊苷标准溶液。A.3.2.4.3 试样溶液的制备称取0.0 5g 0.1g试样,精确至0.0 0 1g,置于5 0m L的容量瓶中,用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度,得到试
16、样溶液。G B8 2 7 02 0 1 46 A.3.2.5 测定在A.3.2.3参考色谱条件下,分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较,以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积。A.3.2.6 结果计算9种糖苷含量(以干基计)的质量分数wi按式(A.3)计算:wi=mSmfiAiAS1 0 0%(A.3)式中:i s、a、b、c、d、f、d a、r u、s b,分别对应甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷;mS 甜菊苷标准溶液中甜菊苷的质量(以干基计),单位为毫克(m g);m 试样溶液中试样的质量(以干基计),单位为毫克(m g);fi i组分与甜菊苷的式量比值:1.0 0(甜菊苷)、1.2 0(瑞鲍迪苷A)、1.0 0(瑞鲍迪苷B)、1.1 8(瑞鲍迪苷C)、1.4 0(瑞鲍迪苷D)、1.1 6(瑞鲍迪苷F
