1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 6食品安全国家标准食品中有机锡的测定2 0 1 6-0 8-3 1发布2 0 1 7-0 3-0 1实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发 布G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 6 前 言 本标准代替G B/T5 0 0 9.2 1 52 0 0 8 食品中有机锡含量的测定。本标准与G B/T5 0 0 9.2 1 52 0 0 8相比,主要变化如下:标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中有机锡的测定”;标准文本格式的更新。G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 61 食品安全国家标准食品
2、中有机锡的测定1 范围本标准规定了食品中有机锡的气相色谱-脉冲火焰光度检测器检测方法。本标准适用于鱼类、贝类、葡萄酒和酱油等样品中二甲基锡、三甲基锡、一丁基锡、二丁基锡、三丁基锡、一苯基锡、二苯基锡、三苯基锡的测定。2 原理分别以一甲基锡为单取代有机锡的内标,三丙基锡为二、三取代有机锡的内标,采用内标法定量。在试样中定量加入一甲基锡和三丙基锡内标,超声辅助将有机锡提取出来,有机溶剂萃取,提取后的样品溶液经凝胶渗透色谱净化、戊基格林试剂衍生、衍生化产物再经弗罗里硅土(F l o r i s i l)净化,采用气相色谱-脉冲火焰光度检测器(G C-P F P D)测定。3 试剂和材料除非另有说明,
3、本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 正己烷(n-C6H1 4):重蒸。3.1.2 四氢呋喃(CH2CH2O CH2CH2):重蒸。3.1.3 乙酸乙酯(CH3C OO C2H5):重蒸。3.1.4 环己烷(C6H1 2):重蒸。3.1.5 甲醇(CH3OH)。3.1.6 无水乙醚(C2H5O C2H5)。3.1.7 溴代正戊烷(n-C5H1 2B r)。3.1.8 无水硫酸钠(N a2S O4):将无水硫酸钠置干燥箱中,于1 2 0干燥4h,冷却后,密闭保存。3.1.9 氯化钠(N a C l)。3.1.1 0 硫酸(H2S O4):优级
4、纯。3.1.1 1 盐酸(HC l):优级纯。3.1.1 2 氢溴酸(H B r)。3.1.1 3 乙二胺四乙酸二钠(E D T AN a2)。3.1.1 4 金属钠(N a)。3.1.1 5 镁条(M g)。3.1.1 6 环庚三烯酚酮(t r o p o l o n e):9 8%。3.1.1 7 弗罗里硅土(F l o r i s i l):0.1 4 7mm0.2 5mm(6 0目1 0 0目),1 2 0烘烤1 2h。3.1.1 8 聚苯乙烯凝胶:0.0 7 5mm0.1 4 7mm(1 0 0目2 0 0目),或同类产品。G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 62 3.2 试
5、剂配制3.2.1 环庚三烯酚酮-正己烷溶液(0.0 3%):量取正己烷1 0 0m L,加入0.0 3g环庚三烯酚酮混匀。3.2.2 氯化钠溶液(2 0g/L):称取氯化钠1 0 0g,溶于水并稀释至5 0 0m L。3.2.3 饱和氯化钠溶液:在1 0 0m L水中加入过量氯化钠,水浴使溶解,恢复室温后要求结晶析出。3.2.4 甲醇-水溶液(4+1):取甲醇适量,制备甲醇-水(4+1)溶液,并根据每1m L甲醇加1L盐酸的要求,加入盐酸,制得含盐酸的甲醇-水(4+1)溶液。3.2.5 氢溴酸-四氢呋喃溶液(1+2 0):取氢溴酸和四氢呋喃各适量,按照1+2 0的比例制备成溶液。3.3 标准品
6、3.3.1 有机锡标准品及其标准溶液:见附录A。除二甲基锡、三丁基锡纯度为9 5%外,其他标准品纯度均大于9 7%。3.3.2 内标:一甲基锡(MMT)和三丙基锡(T P r T)标准品:纯度9 8%。3.4 标准溶液配制3.4.1 有机锡标准贮备液:准确称取有机锡的标准品适量,置于1 0m L烧杯中,加入甲醇-水溶液(3.2.4)溶解,转移到1 0m L容量瓶中,并稀释至刻度。于-2 0冰箱保存。3.4.2 内标标准贮备溶液:准确称取内标适量,置于1 0m L烧杯中,加入甲醇-水溶液(3.2.4)溶解,转移到1 0m L容量瓶中,并稀释至刻度。于-2 0冰箱保存。3.4.3 有机锡标准及内标
7、中间溶液:量取有机锡标准或内标贮备液适量,用甲醇-水溶液(3.2.4)稀释1 0 0倍,质量浓度见附录A。于-2 0冰箱保存。3.4.4 有机锡标准及内标工作溶液:量取有机锡标准或内标中间液适量,置于1 0m L容量瓶中,加入甲醇-水溶液(3.2.4)并稀释至刻度,浓度见附录A。于-2 0冰箱保存。4 仪器和设备4.1 气相色谱仪(G C):配脉冲火焰光度检测器(P F P D),硫滤光片。4.2 色谱柱:D B-1毛细管柱或等效柱,柱长3 0m,膜厚0.2 5m,内径0.2 5mm。4.3 组织匀浆器。4.4 振荡器。4.5 超声波清洗器。4.6 旋转蒸发仪。4.7 氮气浓缩器。4.8 三口
8、瓶、分液漏斗和加热回流装置。4.9 加热磁力搅拌装置。4.1 0 玻璃层析柱。4.1 1 分析天平:感量为1m g。4.1 2 电加热套。5 分析步骤5.1 戊基格林试剂的合成5.1.1 乙醚重蒸与除水:在3 5下,采用全玻璃蒸馏装置重蒸两次。G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 63 在蒸馏的乙醚中,加入光洁金属钠片,至不再产生明显气泡后,放置1h2h,继续加入金属钠片,保存备用。5.1.2 溴代正戊烷的重蒸:量取溴代正戊烷1 0 0m L,置于蒸馏瓶中,在1 4 0下,采用全玻璃蒸馏装置重蒸两次,馏分避光收集。5.1.3 镁屑的制备:取镁条,刮去表面氧化膜层,用剪刀剪成约0.3mm的
9、碎屑,用正己烷洗涤2次3次,挥干,保存备用。5.1.4 戊基溴化镁的合成:称取镁屑1 0g,置5 0 0m L三口瓶中,加入重蒸乙醚1 0 0m L,加入搅拌子。在搅拌下,滴加重蒸溴代正戊烷6 0m L和重蒸乙醚5 0m L的混合溶液。反应发生后,停止搅拌。当反应速度减缓后,继续滴加上述溴代正戊烷和乙醚的混合溶液,并搅拌。调节滴加速度,使反应瓶中的乙醚保持微沸状态。当反应缓慢时,开始加热,保持反应发生,继续加热回流至反应完全,得到戊基溴化镁溶液约2 0 0m L,溶液呈灰黑色混浊状态。将合成的戊基溴化镁分装至棕色小瓶中,封口,干燥器内保存。5.2 试样制备鱼去皮及刺,制成肉糜;贝类试样取可食组
10、织制成匀浆;葡萄酒和酱油试样混合均匀。鱼贝类试样制成匀浆后,可采用冷冻干燥,制成冻干粉末,置-2 0以下低温保存。5.2.1 试样提取5.2.1.1 鱼类样品准确称取试样适量,加入乙二胺四乙酸二钠0.1 5g和2 0g/L氯化钠溶液5m L,摇匀,加入内标工作溶液5 0L,加入氢溴酸-四氢呋喃溶液(1+2 0)(3.2.5)1 5m L,超声5m i n。如果为湿样,加入饱和氯化钠溶液1m L,摇匀,加入内标工作溶液5 0L,加入氢溴酸-四氢呋喃溶液(1+2 0)(3.2.5)1 5m L,超声5m i n。5.2.1.2 贝类样品准确称取试样适量,加入2 0%氯化钠溶液5m L,摇匀,加入内
11、标工作溶液5 0L,加入氢溴酸-四氢呋喃溶液(1+2 0)(3.2.5)1 5m L,超声5m i n。5.2.1.3 葡萄酒等液体样品量取试样1 0m L,加入氯化钠2g,摇匀,加入内标工作溶液5 0L,加入氢溴酸-四氢呋喃溶液(1+2 0)(3.2.5)1 5m L,超声5m i n。5.2.2 试样溶液的净化在试样溶液中加入含0.0 3%环庚三烯酚酮的正己烷2 5 m L,振荡萃取4 0 m i n,离心1 0 m i n(30 0 0r/m i n),静置分层,吸取有机相转移至茄形瓶中,在残渣中加入正己烷1 0m L,振荡萃取1 0m i n,离心1 0m i n(30 0 0r/m
12、i n),静置分层,吸取有机相。合并至茄形瓶中,旋转蒸发浓缩至近干。5.2.3 凝胶渗透色谱净化5.2.3.1 凝胶柱的装填:取聚苯乙烯凝胶,用四氢呋喃-乙酸乙酯(1+1)溶液浸泡过夜。用玻璃棉封堵内径为1.7c m1.8c m的玻璃层析柱底端,湿法加入浸泡好的凝胶,凝胶自然沉降,稳定后柱长约为1 5c m。5.2.3.2 净化:在试样提取液的浓缩残渣中加入四氢呋喃-乙酸乙酯(1+1)溶液1m L,将此溶液全部转G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 64 移至层析柱上,用1m L四氢呋喃-乙酸乙酯(1+1)溶液洗涤茄形瓶。待层析柱中试液溶液的液面降至接近凝胶时,将洗液转移至柱上。用四氢呋
13、喃-乙酸乙酯(1+1)溶液洗脱,弃去0m L1 8m L流分,收集1 8m L3 3m L流分,收集流出体积1 5m L。5.2.4 戊基溴化镁格林试剂衍生将5.2.3.2收集的净化溶液旋转蒸发浓缩近干,加入环己烷1 0m L,继续旋转蒸发浓缩至约1m L,转移至1 0m L离心管中,用环己烷洗涤茄形瓶,合并在离心管中,并定容至2m L。用1m L注射器加取上述合成的戊基溴化镁格林试剂0.8m L,涡旋振荡混匀,超声反应1 5m i n后,逐滴加入0.5m o l/L硫酸约3m L,振摇,终止衍生反应,涡旋振摇,静置使上层溶液澄清。5.2.5 弗罗里硅土(F l o r i s i l)柱净化
14、5.2.5.1 层析柱装填:用玻璃棉封堵玻璃柱底端后,从底部到顶部依次装入活化弗罗里硅土(F l o r i s i l)1.5g、无水硫酸钠2g,用正己烷1 0m L预淋洗。5.2.5.2 净化:将5.2.4衍生溶液的上层有机相全部转移至弗罗里硅土柱上,当柱中溶液的液面降至无水硫酸钠层时,用正己烷洗脱,收集洗脱液5m L,在氮气流下浓缩至约1m L后,转移至另一根填以1.5g弗罗里硅土(F l o r i s i l)和2g无水硫酸钠的层析柱上,用正己烷-甲苯(5+1)溶液1 0m L预淋洗,用正己烷-甲苯(5+1)溶液洗脱,收集1 0m L流分。5.2.6 浓缩在氮气流下,将5.2.5.2
15、净化的试样溶液浓缩定容至1.0m L,转移进进样小瓶中,待G C测定。5.3 仪器参考条件气相色谱参考条件:a)色谱柱1):D B-1柱(或等效柱),柱长3 0m,膜厚0.2 5m,内径0.2 5mm。1)给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可,如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效的产品。b)采用不分流方式,进样口温度2 8 0。c)柱温程序:开始温度为5 0,保持1 m i n;以1 0/m i n升温至1 2 0;5/m i n升温至2 0 0;1 0/m i n升温至2 8 0,保持5m i n。d)载气为高纯氮气(纯度9 9.9 9 9%)。e)脉冲火
16、焰光度检测器参考条件:模式:硫滤光片;温度:3 5 0;燃气和助燃气流速:空气12 1m L/m i n,氢气2 2m L/m i n,空气21 1m L/m i n;光电倍增管电压:5 5 0V;门槛时间:4m s;门延迟时间:5m s;激发电压:1 0 0mV。5.4 标准曲线制作准确称取不含有机锡的对应食物样品作为空白基质适量,加入5m L2 0%氯化钠溶液,分别加入有机锡混合标准溶液0L、1 0L、3 0L、5 0L、1 0 0L、2 0 0L、4 0 0L及内标工作溶液5 0L,按试样提取与净化过程要求同步操作。吸取标准系列溶液1L注入气相色谱仪进行分析,得到色谱图(参见附录B.1及附录B.2),以保留时间定性。5.5 试样溶液的测定吸取试样溶液1L注入气相色谱仪中,得到色谱图(参见附录B.3),以保留时间定性。计算目标G B5 0 0 9.2 1 52 0 1 65 化合物与内标的峰面积或峰高比,以标准系列溶液中目标有机锡的进样量(n g)与对应的目标有机锡与内标的峰面积或峰高比绘制线性曲线,根据线性曲线计算试样中有机锡含量。6 分析结果的表述试样中目标有机锡含量(以S n
