1、中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲料中异硫氮酸醋的测定方法G B 1 3 0 8 7 一 9 1Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f i s o t h i o c y a n a t e s i n f e e d s，主 题内 容与 适用 范困 本标准规定了配合饲料和菜籽饼粕中异硫氰酸醋的测定方法。本标准适用于配合饲料(包括混合饲料)和菜籽取油后的饼粕中异硫氰酸醋的测定。第一篇气相色谱法2 原理 配合饲料中存在的硫葡萄搪昔，在芥子酶作用下生成相应的异硫氰酸酷，用二氯甲 烷提取后再用气相色谱进行测定。3 试剂和溶液 除特殊规定外，
2、本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。3.1 二氯甲 烷或氯仿(G B 6 8 2).3.2 丙酮(G B 6 8 6),3.3 p H 7 缓冲液:市售或按下法配制。量取3 5.3 m L O.1 m o l/L 柠檬酸(C 6 H e 0 c H 2 0)溶液，置入2 0 0 m L定容瓶中，用0.2 m o l/L磷酸氢二钠(N a 2 H P O,1 2 H 2 0,G B 1 2 6 3)稀释至刻度，配制后检查p H值。3.4 无水硫酸钠。15 酶制剂:将白芥(S i n a p i s a l b a L.)种子(7 2 h内发芽率必须大于8 5，保存期不超过两年)粉
3、碎后，称取1 0 0 g，用3 0 0 m L丙酮(3.2)分1 0 次脱脂，滤纸过滤，真空干燥脱脂白芥子粉，然后用4 0 0 m L水分两次提取脱脂粉中的芥子酶，离心，取上层混悬液体，合并，于合并混悬液中 加入4 0 0 m L丙酮(3.2)沉淀芥子酶，弃去上清液，用丙酮(3.2)洗沉淀5 次，离心，真空干燥下层沉淀物，研磨成粉状，装入密闭容器中，低温保存备用，此制剂应不含异硫氰酸醋。3.6 丁基异硫氰酸酷内 标溶液:配制0.1 0 0 m g/m L丁基异硫氰酸酷C C H,(C H 2),N C S 二氯甲 烷或氯仿(3.1)溶液，贮于4 C，如试样中异硫氰酸酷含量较低，可将上述溶液稀释
4、，使内 标丁基异硫氰酸醋峰面积和试样中异硫氰酸酷峰面积相接近。4 仪器、设备气相色谱仪:具有氢焰检测器。氮气钢瓶:其中 氮气纯度为9 9.9 9 0 0 0微量注射器:5 p L,分析天平:感量。.0 0 0 1 g.41424.344国家技术监督局 1 9 9 1 一 0 7 门 6 批准1 9 9 2 一 0 4 一 0 1 实施G B 1 3 0 8 7 一 9 14.54.64.74.84.9实验室用样品粉碎机。振荡器(往复，2 0 0 次/m i n).具塞锥形瓶，2 5 m L e离心机。离心试管:1 0 m l,.5 试样制备 采集具有代表性的配合饲料样品，至少2 k g，四分法
5、缩分至约2 5 0 g，磨碎，过1 m m孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。6 测定步获6.1 试样的酶解 称取约2.2 g 试样于具塞锥形瓶(4-7)中，精确到0.0 0 1 g，加入5 m L p H 7 缓冲液(3.3),3 0 m g 酶制剂(3.5),1 0 m L丁基异硫佩酸醋内标溶液(3.6)，用振荡器(4-6)振荡2 h，将具塞锥形瓶(4-7)中内容物转入离心试管(4-9)中，离心机(4-8)离心，用滴管吸取少量离心试管(4-9)下层有机相溶液，通过铺有少量无水硫酸钠(3-4)层和脱脂棉的漏斗过滤，得澄清滤液备用。6.2 色谱条件6.2-1 色谱柱:玻璃，内
6、 径3 m m，长2 m,6.2.2 固定液:2 0%F F A P(或其他效果相同的固定液).6.2.3 载体:C h r o m o s o r b W,H P,8 0-1 0 0 目(或其他效果相同的载体)。6.2.4 柱温:l o o 0C。6.2.5 进样口及检测器温度:1 5 0 0C,6.2.6 载气(氮气)流速:6 5 m L/m i n,6.3 测定 用微量注射器(4.3)吸取1 一2 p L上述澄清滤液，注入色谱仪，测量各异硫氛酸酷峰面积。7 测定结果计算公式x=刀孟 e1 1 5.1 9 X S,X十(4/5 X 1 2 7.石 C(4/3 X 9 9.1 5 X S,)
7、+(4/4 X 1 1 3.1 8 X S O2 1 X S,)X 1 0 0 0 ，月.二 二一S,X m(1-1 5 S.+0-9 8 S、十 0.8 8 S,)X 1 0 0 0(1):X 试样中异硫氰酸醋的含量，m g/k g;m试样质量，9;m,-I O m L丁基异硫氰酸醋内标溶液中丁基异硫氛酸醋的质量,m g;S,丁基异硫氛酸醋的峰面积;S,丙烯基异硫氰酸醋的峰面积;S,丁烯基异硫氰酸醋的峰面积;S,戊烯基异硫氰酸酷的峰面积。，中不式7.2 结果表示 每个试样取2 个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到1 m g%k g.G B 1 3 0 8 7 一 9 1了.3
8、重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值;在异硫氰酸酷含量小于或等于1 0 0 m g/k g 时，不超过平均值的1 5 0 0 在异硫氰酸酷含量大于1 0 0 m g/k g 时，不超过平均值的1 0 0 0 0 第二篇 银t法8 原理 菜籽饼粕中存在的硫葡萄糖昔，在芥子酶作用下可生成相应的异硫氰酸醋。用水气蒸出后再用硝酸银一 氢氧化铁溶液吸收而生成相应的衍生硫脉。过量的硝酸银在酸性条件下以硫酸铁按为指示剂用硫氰酸铁回滴，再计算出异硫氰酸醋的含量。9 试荆和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。9.1 乙醉(G B 6 7
9、 9):9 5%(V/V)。9.2 去泡剂:正辛醉(C s H,7 0 H),9.3 6 m o l/L 硝酸溶液:量取1 9 5 m L浓硝酸(G B 6 2 6)，加水稀释至5 0 0 m L o9.4 1 0 0 o 氢氧化按溶液:取氨水(3 0 0 o,G B 6 3 1)1 0 0 m L，加2 0 0 m L水混匀。9.5 硫酸铁按溶液:称取1 0 0 g 硫酸铁按(N H,F e(S O,)Z 1 2 H,O,G B 1 2 7 9),溶于5 0 0 m L 水中。9.6 0.1 m o l/L 硝酸银标准溶液:准确称取在硫酸干燥器中干燥至恒重的基准硝酸银1 6.9 8 7 g，
10、用水溶解后加水定容至1 0 0 0 m L,置棕色瓶中避光保存。9.7 0.1 m o l/L 硫氰酸按标准贮备液:称取7.6 g 硫氰酸按(N H,C N S,G B 6 6 0),溶于1 0 0 0 m l水中。按下法标定:准确量取1 0.0 0 m L o.1 m o l/L硝酸银标准溶液(9.6)，加1 m L硫酸铁按(9-5)指示剂和2.5m L 6 m o l/L 硝酸(9.3)，摇动下用0.1 m o l/L硫氰酸按标准贮备液滴定，终点前摇动溶液至完全清亮后，继续滴定至溶液所呈淡棕色保持3 0:.硫氰酸按标准贮备液的摩尔浓度按式(2)计算:N_N,V,.。二。.。.(2)式中:N
11、 硫氰酸钱标准贮备液摩尔浓度，m o l/L;N,硝酸银标准溶液摩尔浓度，m o l/L;V，一一 硝酸银标准溶液的用量，m L;V 消耗硫氰酸钱标准贮备液的体积，m L,9.8 0.0 1 m o t/L硫氰酸钱标准工作液:临用前将。1 m o l/L硫氰酸按标准贮备液(9-7)用水稀释1 0倍，摇匀9.9 p H 4 缓冲液:称取4 2 g 柠檬酸(C s H,O,H O),溶于1 L水中，用浓氢氧化钠溶液调节p H至4,9.1 0 粗酶制剂:取白芥(S i n a p i s a l b a L)种子(7 2 h内发芽率必须大于8 5 0 o，保存期不得超过两年)，粉碎后用冷石油醚(沸程
12、4 0-6 0 C)或正己 烷脱脂，使脂肪含量不大于2 a,然后再粉碎一次使全部通过。.2 8 m m筛，放4 冰箱可使用6 周。仪器、设备分析天平:感量。0 0 0 1 g,恒温箱:温度范围3 0-6()C,精度士VC;1010llD2G B 1 3 0 8 7 一 9 11 0.3 异硫氰酸酷蒸馏装置:见下图，其中a 为5 0 0 m L三角烧瓶(具塞),b为2 5 0 m 1圆底烧瓶(在7 0m L处有一刻度)。尺寸(m.旧斗I O.L接口1 4/2 3接口1 9/2 6接口2 9 1 3 2接口1 9/2 6接 口2 9/3 2团底烧庙2 5 0 mL(7 0-L处有 刻度异硫氰酸醋蒸
13、馏装置图1 0.4 冰水浴。1 0.5 沸水浴。1 0.6 三角烧瓶:1 0 0,5 0 0(具塞)m L,1 0.7 容量瓶:1 0 0 m L.1 0.8 移液管:1 0,2 5 m L,1 0.9 吸量管:5,1 0 m L,1 0.1 0 半自 动滴定管:5 m L,JR小分度为。.0 2 m L,1 0.1 1 滤纸。1 0.1 2 回流冷凝器，可与瓶b 相配。G B 1 3 0 8 7 一 9 11 飞 试样制备 采集具有代表性的样品至少2 5 0 g，四分法缩分至5 0 g。若样品含脂率大于5%时需要事先脱脂，测定脂肪含量;若含脂率小于5%时，则进一步磨碎使其8 0%能通过。.2
14、 8 m m(4 0 目)筛，混匀，装入密闭容器中，置一1 5 保存备用。1 2 测定步驻1 2 门 称取试样2.2 g 于事先烘烤并精确称重至0.0 0 1 g 的烧杯中，1 0 3 士2 C 烘烤至少8 h，在干燥器中冷却至室 温后 精确称 重至0.0 0 1 g,1 2.2 试样的酶解 将上述烘烤过的试样全部转移至5 0 0 m L 三角烧瓶a 中，加入1 0 0 m L p H 4 缓冲液(9.9)，同时加入0.5 g 粗酶制剂(9.1 0)。另 取1 个5 0 0 m L 三角 烧瓶(1 0.6)加入1 0 0 m L p H 4 缓冲液(9.9)和0.5 g 粗酶制剂(9.1 0)
15、，将三角烧瓶塞好塞子，置4 0 C 恒温箱(1 0.2)中保温3 h，中间不时轻摇几次。1 2.3 蒸馏接收瓶准备 准确量取1 0.0 0 m L硝酸银标准溶液(9.6)至2 5 0 m L圆底烧瓶b中，并加入2.5 m L氢氧化按溶液(9.4)。将此瓶b 与蒸馏装置(1 0.3)相连并置于冰水浴(1 0.4)中，冷凝器(1 0.1 2)末端必须没于硝酸银-氢氧化铁液中。1 2.4 蒸馏 将盛试样的三角 烧瓶a 冷至室温，加入几粒玻璃珠和几滴去泡剂(9-2)，然后与蒸馏装置(1 0-3)相连，从上面漏斗中 加人1 0 m L 9 5%乙 醉(9-1)，另加3 m L乙 醇(9.1)于接收瓶上的
16、安全管中。缓慢加热蒸馏，至馏出液达到接收瓶b 7 0 m L刻度处。1 2.5 试样测定 取下接收瓶b，将安全管中的乙醇(9-1)倒入此瓶中，将它与回流冷凝器(1 0.1 2)连接，于沸水中加热瓶中内 容物3 0 m i n,然后取下冷却至室温。将内 容物定量地转至1 0 0 m L 容量瓶(1 0.7)中，用水洗接收瓶6 2-3 次，用水稀释至刻度，摇匀后过滤于1 0 0 m L三角烧瓶(1 0.6)中，用移液管(1 0.8)取2 5 m L滤液于另一1 0 0 m L三角烧瓶(1 0.6)中，加1 m L 6 m o i/L硝酸(9.3)和0.5 m L硫酸铁按指示剂(9.5)，用0.0 1m o l/L硫氰酸按标准工作液(9.8)滴定过量的硝酸银，直到稳定的淡红色出现为终点。1 2.6 空白测定 按同样测定步骤操作，但不加试样，得到空白 测定值。1 3 测定结果1 3.1 计算公式一X=4 X(V,一 V z)XcX 5 6.5 9 力2c(V,-V i)X 2 2 6.3 6式中:X试样中异硫氰酸醋的含量，以每克绝干样中丁基异硫氰酸酷的毫克数表示;V,空白测定所耗硫氰酸按标准工
