1、G B 1 7 7 1 6-1 9 9 9前言 为 了鉴定青鱼，保护和保存青鱼原种优 良的性状及种质，避免苗种生产过程 中种质混杂和退化，开展青鱼种质的有效监测，特制定本标准。本标准主要是“八五，科技攻关成果，并吸取 r“六五”、“七五”科技攻关及前人的有关成果 本标准的附录 A 和附录 B是标准的附录 本标准的附录 C是提示的附录 本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归 口。本标准起草单位:匕 海水产大学、中国水产科学研究院长江水产研究所。本标准主要起草人:李思发、赵金良、蔡完其、周碧云、吕国庆、范兆廷、徐忠法。本标准从 1 9 9 9年 7
2、月 1日起实施。中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准青鱼G B 1 7 7 1 6-1 9 9 9B l a c k c a r p1 范围 本标准给出了青鱼(似y l o p h a r y n g o d o n p i c e u s)的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性，以及检测方法 本标准适用于青鱼的种质鉴定。2 名称与分类2 门学名 青鱼(A 乃 d o p h a r y n g o d o n p i c e u s)e2.2 分类位置 属鲤形目(C y p r i n i f o r m e s),鲤科(C y p r i n i d a e),雅罗鱼亚科(L e
3、u c i s c i n a e)，青鱼属(A 乃 l o p h u r y n g o-d o n)3 主要形态构造特征3 门外部形态特征3.1.1 外形 体延长，呈梭形。腹圆，无腹棱。口端位，上领呈弧形。吻尖 眼中侧位 体被较大的圆鳞，侧线完全鳃耙稀而短小。尾鳍深叉.上下叶等长。体青黑色，背部深黑，腹部灰白色，各鳍均为灰黑色 青鱼的外部形态见图 1,图 1 青鱼外形国家质f技术监督局 1 9 9 9 一 0 4 一 0 5 批准1 9 9 9 一 0 7 一 0 1实施G B 1 7 7 1 6 一1 9 9 9可数性状 背鳍鳍式:D 3.7,臀鳍鳍式:A3.7-9,侧 线 鳞 鳞 式
4、 4 0 黯4 5 第一鳃弓外侧鳃耙数:1 5-2 1,可f i t 性状3123121312231233124313对f 体长 1 7.2 -5 3.4 c m，体重1 1 0.0 -2 2 5 0.0 g的个体，实测性状比例值见表1 表 1 实测可量性状 比例值全长i 本长体 长了 体高体长/头长头长/吻长头长/眼径头长/眼间距体长/尾柄长尾柄长/尾柄高1.1 5 9 士 0.0 3 24.0 5 0 上0.3 5 04.3 1 8 士 0.2 9 53.3 1 8 士0.5 8 06.6 1 9士 0.7 9 82.2 9 0 士0.3 9 67.6 5 7 士 0.6 2 4l.0 5
5、 9 士0.1 0 012 内部构造特征3.2.1 缥 二 室，后室比较细长。3 2.2 下咽齿 1 行，臼齿状，齿式 4/5.32.3 脊椎骨 脊椎骨总数 3 9-4 2 03.2.4 腹膜 黑色4 生长与繁殖4.1 生长 不同年龄组的鱼体长、体重的实测值见表2。与表2 对应的不同年龄组的鱼体长、体重平均退算值、1 长方程、体长体重关系式见附录 c 提示的附录)。表 2 不同年龄组鱼的体长、体重实测值t i 龄、龄1 斗2 3 生4+5 十6+7 十8 斗9 十1 测 体 t28.6-4 6.9 4 0.5 5-5 5.7 5 7.8 4-6 8.0 6 5.9 7-69.1 7 1.7 6
6、-7 7.191.7 3-97.51 0 0.5-1 0 4.01 0 6.0-1 1 0.01 1 0.0-1 1 2.0实测体重 g1 80-2 00 01 0 5 0-3 3 2 03 1 00-5 1 0 04 5 6 2-6 8 2 75 4 42-7 3 1 71 1 1 0 0-1 4 0 0 01 5 9 0 0-2 1 5 0 02 2 9 0 0-2 8 5 0 02 0 2 5 0-3 1 4 0 0早实测体长 cm2 6.2-4 9.6 38.5 9-5 5.7 53.8 5-6 x.0 6 1.9 0-6 9.1 7 1.1 6-8 1.4 9 5.5 2 -95.5
7、 9 9.0-10 4.01 0 4.0-1 1 0.01 1 0.0-1 1 2.0实测体重 g4 80 -2 2 5 01 0 0 0-3 3 2 02 8 0 0-5 1 0 03 5 0 0-6 8 2 75 4 42-1 1 8 0 01 2 9 0 0-1 7 8 0 01 5 9 0 0-2 2 0 0 01 7 4 0 0-2 8 5 0 02 0 2 5 0-31 4 0 0I)年龄土要依据鳞片上的年龄数鉴定4.2 繁殖42 门性成熟年龄:雌鱼 5-7 龄，雄鱼 4-6 龄。4.2.2 性成熟个体性腺每年成熟一次，一次产卵。4.2.3 怀卵量:不同年龄组个体怀卵量见表 3 e
8、G B 1 7 7 1 6 一1 9 9 9表 3 不同年龄组个体怀卵量年龄，龄7+8 斗 一体鱼.g1 6,1 0 0.01 7 9 0 0.02 1 4 0 0.0绝对怀卵量.粒6.a 义1 0 57.2火 1 0,9.1沐 1 0相对怀卵量，粒/g3 9.0 24 0.194 2.6 25 遗传学特性5.1 细胞遗传学特性5.1 门染色体数 体细胞染色体2 倍数，2 n=4 85.1.2 核型 中部着丝粒染色体(m组)1 4对;亚中部着丝粒染色体(s m组)4 对;亚端部着丝粒染色体(s t 组)6对，染色体臂数(N F)8 4(见图2).I Y 以 越 盆X fi7 共挑翔君0卜蕊六
9、翻蕊 月孔共翻 吸 吕 入J A蕊决肠 图 2J、八 决卜 心)己、八扣卜价器扎几、青鱼染色体组型5.2 生化遗传学特性5.2.1 肌肉中乳酸脱氢酶(L D H)同工酶5.2 门.1 肌肉中乳酸脱氢酶(L D H)同工酶酶谱见图 3,5.2 门.2 肌肉中乳酸脱氢酶(L D H)同工酶酶带扫描图见图4,LDHL DH,L DH,L D H,L D H,图 3 青鱼肌肉L D H同工酶电泳酶谱图 4 青鱼肌肉L D H同工酶酶带扫描图5.2.1.3 肌肉中乳酸脱氢酶(L D H)同工酶酶带的活性强度见表 4。表 4 青鱼肌肉L D H同工酶酶带活性强度%酶带L D H,L D H,L DH,L
10、D H,L DH.活性强度4 1.92 0.211.52.92.65.2.1.4 群体变异范围:长江中、下游青鱼群体的多态座位比例为 5.9%-1 1.a%，平均杂合度为0.0 0 1 0-0.0 3 5 0 _G B 1 7 7 1 6-1 9 9 96 检测方法6 门年龄的鉴定6.1 门鳞片选取部位 体侧背鳍基部下方与侧线鳞_ L 方之间。6 门.2 操作步骤 。)取下背侧鳞片。保存在鳞片袋中;b)将保存在鳞片袋中的鳞片取出，放在培养皿中，清洗干净;c)将清洗好的鳞片按在鱼体的位置夹在两块玻片之间，贴上标签，两端用透明胶带封好;d)在显微镜或投影仪下观察鳞片的年轮，确定鱼的年龄。注:再生鳞
11、不得用作年龄鉴定6.1.3 取胸鳍第一根鳍条基部磨片(厚度为。.2 0-0.2 5 m m)作为对照。6.2 繁殖力的测定 青鱼的繁殖力可通过计数亲鱼实际产卵量来估算，避免杀死亲鱼。在繁殖季节，称量产卵前、后亲鱼(选取 一 次产空的亲鱼)的体重(精确到5 0 g)，前后两次称量之差即为产的卵重。用电子天平称1.0 g卵,2 个样品，在解剖镜下分别计数每克卵的平均卵粒数。卵巢中所含的全部卵粒数即为绝对怀卵量，单位体重(9)所含的卵粒数为相对怀卵量。6.3 染色体的检测6.3.1 标本制备 采用体内注射植物血凝聚素(P H A)，取肾细胞悬液滴片，空气干燥制片，吉姆萨(G i e m s a)染色
12、。吉姆萨染色液的配制见附录A(标准的附录)。6.3.2 测定染色体数 在显微镜油镜下观察，计数 1 0 0 个以上清晰、分散良好的中期分裂相的染色体数目，测定染色体数。6.3,3 组型分析 选择部分最佳中期分裂相，进行显微摄影，按放大照片剪贴配组，进行染色体组型分析。染色体的形态类别，按下列规定划分。即臂比1.0-1.7 为中部着丝粒染色体(m组);1.7 -3。为亚中部着丝粒染色体(s m组);3.0-7.。为亚端部着丝粒染色体(s t 组);7.0-a为端部着丝粒染色体(t 组).m组和s m组染色体臂数为2;s t 组和t 组染色体臂数为1.6.4 生化遗传分析6.4.1 样品的采集与保
13、存 先剪断腹侧主动脉放血，活体解剖，取背部白肌，放人编号的小塑料袋中，液氮中保存。运回实验室后，置于-2 5 C冰箱中保存。6.4.2 样品制备 样品加3%辅酶 I 液匀浆，低温离心，至上清液澄清。整个制备过程均在低温下操作6.4.3 电泳分离 用水平平板电泳仪及 4.O Y o 聚丙烯酞胺凝胶电泳分离。加样前，预电泳:5 0 mA.3 0 m i n。加样后，前电泳 2 5 m A.1 0 m i n;正式电泳;2 7 5 V.1 0 0 m i n。电泳结束后，放人预先配好并在3 7 恒温箱中保温的同J _ 酶染色液中染色。同工酶染色液的配制见附录 B(标准的附录)。6.4.4 扫描测定
14、用激光扫描仪对电泳图谱进行扫描。G B 1 7 7 1 6 一1 9 9 9 附录A (标准的附录)吉姆萨(G i e ms a)染色液配制A1 G i e ms a染色母液的配制称取。.5 g G i e ms a粉，量取甘油 3 3 ml-，在研钵中先用少量甘油与G i e m s a粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘油加人，在 5 6 C 条件下保温 2 h后，再加 3 3 mL甲醇，保存于棕色瓶内。A 2 磷酸缓冲液(0.2 m o l/L,p H7.2)配制 磷酸缓冲液由 A液和 B液按比例混合而成。A 2.1 A液(0.2 m o l/L,N a,H P O,)配制:取 3 6.6
15、1 g含 1 个结晶水的磷酸氢二钠(N a 2 H P O,H B O)定容于1 0 0 0 m l蒸馏水中，或取7 1.6 4 g 含2 个结晶水的磷酸氢二钠(N a,H P O,H 0)定容于1 0 0 0 m L蒸馏水中，即成。A 2.2 B液(0.2 m o l/L N a H,P O,)配制:取 2 7.6 g含 1 个结晶水的磷酸二氢钠(N a H 2 P O,H,O)定容于1 0 0 0 m l-蒸馏水中，或取3 1-2 1 g含2 个结晶水的磷酸二氢钠(N a H 2 P O,2 H 2 0)定容于1 0 0 0 m l蒸馏水中，即成。A 2.3 取 A液 7 2 0 ml，加
16、上 B液 2 8.0 ml,混合即成所需的磷酸缓冲液。A 3 G i e m s a 工作染色液的配制 取 1 0 0 ml,磷酸缓冲液，加人 3 m L G i e m s a 染色母液即成 附录B (标准的附录)同工酶染色液的配制B 1 三m甲基氮基甲烷一 盐酸(T r i s-H C I)染色级冲液(1.5 m o l/L)的配制 取T r i s 1 8 1.7 1 g 溶于9 0 0 m l蒸馏水中，用盐酸调节至p H 9.5，再用蒸馏水稀释至1 0 0 0 m L,B 2 抓化硝墓四氮哩蓝(N B T)液(m g/m L)的配制 取2 5 0 m g抓化硝基四氮哇蓝溶于2 5 0 m L蒸馏水中。B 3 乳酸钠溶液(1 mo I/L)的配制 取 2 0 3.7 6 mL乳酸，加人 7 0 0 mL蒸馏水混合，用 5 0%氢氧化钠溶液调节至p H7.0，再用蒸馏水稀释至 1 0 0 0 ml。B 4 同工酶染色液的配制 所需同工酶染色液按表 B I 配制。G B 1 7 7 1 6 一1 9 9 9表 B l 同工酶染色液配方T,i s-H C I 染色缓冲液辅 酶 1m g
