1、I C S6 7 0 5 0X0 4囝园中华人民共和国国家标准G B T2 3 2 11 2 0 0 8牛奶和奶粉中4 9 3 种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱一串联质谱法D e t e r m i n a t i o no f4 9 3p e s t i c i d e sa n dr e l a t e dc h e m i c a l sr e s i d u e si nm i l ka n dm i l kp o w d e r-L C _ _ M S _-M Sm e t h o d2 0 0 8-1 2-3 1 发布2 0 0 9 0 5 01 实施丰瞀粥紫瓣譬雠瞥星发布中
2、国国家标准化管理委员会“G B T2 3 2 1 1 2 0 0 8前言l 范围一2 规范性引用文件3 原理4 试剂和材料5 仪器6 试样保存7 测定步骤8 结果计算9 精密度附录A(资料性附录)标准溶液浓度附录B(资料性附录)能量-附录C(资料性附录)附录D(资料性附录)附录E(资料性附录)目次4 9 3 种农药及相关化学品中、英文名称、方法检出限、分组、溶剂选择和混合4 9 3 种农药及相关化学品保留时间、监测离子对、源内碎裂电压和碰撞气4 9 3 种农药及相关化学品多反应监测(M R M)色谱图4 9 3 种农药及相关化学品精密度数据表-4 9 3 种农药及相关化学品英文中文名称对照索引
3、(按英文字母顺序)I，l，222456毖聃的刖置本标准的附录A、附录B、附录C、附录D 和附录E 为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东农业大学。本标准主要起草人：庞国芳、郑军红、范春林、王明林、李岩。G B T2 3 2 11 2 0 0 81 范围牛奶和奶粉中4 9 3 种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱一串联质谱法G B T2 3 2 1 1 2 0 0 8本标准规定了牛奶和奶粉中4 9 3 种农药及相关化学品(参见附录A 和附录E)残留量液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶中4 8 2
4、 种农药及相关化学品的定性鉴别，4 4 1 种农药及相关化学品的定量测定；适用于奶粉中4 8 1 种农药及相关化学品的定性鉴别，4 2 7 种农药及相关化学品的定量测定。本标准定量测定的牛奶中4 4 1 种农药及相关化学品的方法检出限为0 0 1p t g L 2 4 1m g I。(参见附录A)；定量测定的奶粉中4 2 7 种农药及相关化学品的方法检出限为0 0 4u g k g 8 0 4 m g k g(参见附录A)。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本
5、标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G B T6 3 7 9 1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1 部分：总则与定义(G B T6 3 7 9 1 2 0 0 4，I S()5 7 2 5 一l：1 9 9 4，I D T)G B T6 3 7 9 2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(G B T6 3 7 9 22 0 0 4，I S O5 7 2 5-2：1 9 9 4，I D T)G B T6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法(G B T6 6 8
6、 22 0 0 8，I S O3 6 9 6：19 8 7，M O D)3 原理用乙腈提取试样，c。固相萃取柱净化，用乙腈洗脱农药及相关化学品，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料水为G B T6 6 8 2 规定的一级水。4 1 乙腈：色谱纯。4 2 丙酮：色谱纯。4 3 异辛烷：色谱纯。4 4 甲苯：色谱纯。4 5 正己烷：色谱纯。4 6 甲醇：色谱纯。4 7 甲酸：优级纯。4 8 乙酸铵：优级纯。4 90 1 甲酸溶液。4 1 05m m o l I。乙酸铵溶液。4 1 1乙腈+水(3+2，体积比)。1G B T2 3 2 1 1 2 0 0 84 1 2 氯化钠：分析纯
7、。4 1 3 硫酸镁(M g S O。7 H。O)：分析纯。4 1 4 农药及相关化学品标准物质：纯度9 5。4 1 5 农药及相关化学品标准溶液4 1 5 1 标准储备溶液分别称取5“g 1 0m g(精确至0 1r a g)农药及相关化学品各标准物分别于1 0m I 容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲醇、甲苯、丙酮、乙腈或异辛烷溶解并定容至刻度(溶剂选择参见附录A)。标准储备溶液避光4 保存，可使用一年。4 1 5 2混合标准溶液(混合标准溶液A、B、c、D、E、F 和G)按照农药及相关化学品的保留时间，将4 9 3 种农药及相关化学品分成A、B、C、D、E、F 和(；七个组，并根据每种农药
8、及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。本标准对4 9 3 种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录A。依据每种农药及相关化学品的分组、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于1 0 0m I，容量瓶中，用甲醇定容至刻度。混合标准溶液避光4 保存，可使用一个月。4 1 5 3 基质混合标准工作溶液农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液A、B、c、D、E、F 和G，用于做标准工作曲线。基质混合标准工作溶液应现用现配。4 1 6 微孔过滤膜(尼龙)：1 3r f t m
9、0 2p m。4 1 7E N V I T M _ 1 8 固相萃取柱”：1 2m I。，20 0 0m g 或相当者。5 仪器5 1 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5 2 分析天平：感量0 1r n g 和0 0 1g。5 3 具塞离心管：5 0m I。5 4 均质器：最低转速不低于1 20 0 0r r a i n。5 5 离心机：最低转速不低于42 0 0r m i n。5 6 鸡心瓶：1 0 0m I。5 7 移液器：1m I。和1 0m I。5 8 旋转蒸发器。5 9 氮气吹干仪。5 1 0 样品瓶：2m I，带聚四氟乙烯旋盖。6 试样保存奶粉试样密封常温保存；牛奶试样置于0
10、 4 保存。7 测定步骤7 1 提取奶粉：称取3 0g 奶粉(精确至0 0 1g)于5 0m I。离心管中，加入2 0m I。乙腈以及4g 硫酸镁，用均E N V I T M1 8 柱是S U P E I。C O 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。G B T2 3 2 1 1 2 0 0 8质器1 50 0 0r m i n 均质提取1r a i n，在42 0 0r m i n 条件下离心5r a i n。上清液收集于1 0 0m I 鸡心瓶中，残渣用2 0m L 乙腈重复提取一次，离心后，
11、合并两次提取液，将提取液于4 0 水浴旋转蒸发至1m I。左右，待净化。牛奶：量取1 0 m L 牛奶于5 0 m I，离心管中，J J H，-2 0 m I，乙腈以及4g 硫酸镁和1g 氯化钠。于振荡器上剧烈振荡1 0r a i n，在42 0 0r m i n 条件下离心8m i n，收集上清液于1 0 0m L 鸡心瓶中，残液用2 0m L 乙腈重复提取一次，离心后，合并两次提取液，于4 0 水浴旋转蒸发至1m L 左右，待净化。7 2 净化用1 0m L 乙腈活化E N V I T M1 8 固相萃取柱后，将浓缩的提取液转移至固相萃取柱中。用5m L 乙腈洗涤样品瓶，将洗涤液并人固相萃
12、取柱中，重复此操作两次。收集流出液于1 0 0m L 鸡心瓶中，用1 0m L 乙腈洗脱固相萃取柱，合并流出液。4 0 水浴旋转蒸发至0 5m L 左右。于4 5 下氮气吹干，用1m L 乙腈+水(3+2，体积比)定容，经0 2p m 微 L 滤膜过滤，供液相色谱一串联质谱仪分析。同时取不含农药及相关化学品的牛奶或奶粉样品，按7 1 和7 2 步骤制备样品空白提取液，用于配制基质混合标准工作溶液。7 3 液相色谱-串联质谱测定7 3 1A、B、c、D、E 和F 组条件a)色谱柱：Z O R B A XS B C、8，3 5p m，1 0 0m m 2 1r a m(内径)或相当者；b)流动相及
13、梯度洗脱条件见表1；表1流动相及梯度洗脱条件步骤总时间m i n流速(1 L m i n)流动相A(0 1 甲酸水)流动相B(乙腈)O0 0 04 0 09 9 Ol _ O13 0 04 0 07 0 03 00260 04 0 06 004 0039 0 04 0 06 004 0 041 50 04 0 04 0 06 0051 90 04 0 0I 09 9062 3 0 04 0 0109 9 072 30 14 0 99 901 Oc)柱温：4 0o C-；d)进样量：1 0g I。；e)电离源模式：电喷雾离子化；f)电离源极性：正模式；g)雾化气：氮气；h)雾化气压力：0 2 8
14、M P a；i)离子喷雾电压：40 0 0V；j)干燥气温度：3 5 0；k)干燥气流速：1 0I。r a i n；1)监测离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录B。7 3 2G 组测定条件a)色谱柱：Z O R B A XS BC。3 5t L m，1 0 0m m 2】m m(内径)或相当者b)流动相及梯度洗脱条件见表2；G B T2 3 2 11 2 0 0 8表2 流动相及梯度洗脱条件步骤总时间r a i n流速(L r a i n)流动相A(5m m o l I，乙酸铵水)流动相B(乙腈)00 0 04 0 09 901 013 0 04 0 07 003 0026 0 04 0
15、06 0 04 0 039 0 04 0 06 004 0041 5 0 04 0 04 006 0051 9 0 04 0 0109 9 062 3 0 04 0 0109 9072 3 0 14 0 09 901 0c)柱温：4 0；d)进样量：1 0f t I，；e)电离源模式：电喷雾离子化；f)电离源极性：负模式；g)雾化气：氮气；h)雾化气压力：0 2 8M P a；i)离子喷雾电压：40 0 0V；j)干燥气温度：3 5 0；k)干燥气流速：1 0L r a i n；1)监测离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录B。7 3 3 定性测定在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色
16、谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致(相对丰度 5 0，允许2 0 偏差；相对丰度 2 0 5 0，允许2 5 偏差；相对丰度 1 0 2 0，允许3 0 偏差；相对丰度1 0，允许5 0 偏差)，则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。7 3 4 定量测定本标准中液相色谱一串联质谱采用外标一校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内。4 9 3 种农药及相关化学品多反应监测(M R M)色谱图参见附录c。7 4 平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验。7 5 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。8 结果计算液相色谱串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准龃线法定量结果按式(1)计算：x；书筹 黑式中：x。试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克或毫克每升(奶粉以m g k g 计，牛奶以4G B T2 3 2 11 2 0 0 8C i 从标准曲线上得到的被测组分溶
