1、SN中华人民共和国进出口 商品检验行业标准s N 0 6 9 4 一 1 9 9 7出口肉及肉制品检验方法中壮观霉素残留量液相色谱法Me t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f s p e c t i n o my c i n r e s i d u e s i n me a t s a n d m e a t p r o d u c t s f o r e x p o r t-L i q u i d c h r o m a t o g r a p h i c,m e t h o d1 9 9 7 一 1 2 一 0 1 发布1 9
2、9 8 一 0 4 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布S N 0 6 9 4 一1 9 9 7前言 本标准是根据G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则 第1 单元:标准的 起草与表述规则 第1 部分:标准编写的基本规定 及S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口 商品中 农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的 基本规定 的要求而进行编写的。其中测定方法是参考国内 外有关文献，经研究、改进和验证后制定的。本 标准同时 制定了 抽样和制样方法。测 定低限 是根据国际上对肉品中壮观霉素残留量的最高限量和测定方 法的 灵敏度而制定的。本标准的附录 A为提
3、示的附录。本 标准由中 华人民 共和国国家 进出口 商品检验局提出并归口。本 标准由中国 进出口 商品检验技术研究所负责起草。本标准主要起草人:徐宝梁、于文莲、李瑾、马颖、邱月明。本标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口肉及肉制品检验方法中壮观霉素残留量液相色谱法s N 0 6 9 4 一 1 9 9 7Me t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f s p e c t i n o m y c i nr e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t
4、 s f o r e x p o r t -Li q u i d c h r o ma t o g r a p h i c me t h o d1 范围 本标准规定了出口肉及肉制品中壮观霉素残留量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法.本标准适用于出口 猪肉中壮 观霉素残留量的检验。2 抽样和制样2.1 检验批 以不超过 2 5 0 0 件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 批量，件最低抽样数，件 1-2 5 1 2 6 1 0 0 5 1 0 1-2 5 0 1 0 2 5 1-5 0 0 1 5 5 0 1 -1 0 0 0 1 7
5、 1 0 0 1 -2 5 0 0 2 02.3 抽样方法 按2.2 规定的抽样件数随机抽取，逐件 开启。从每件中 取一袋作为 原始样品。原始样品总量不少 于2 k g，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送 交实验室。如 每件中无小包装，或有小包装但每 袋重量超过2 k g 者，则可用 灭菌 锋利刀在抽出的包件中，每件割取不 少于1 0 0 9.混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的 总量不少于2 k g。加封后，标明标记，及时送交实验室。2.4 试样制备 从 所取原始样品中取出有代 表性样品约1 k g，充分绞碎，混匀，均分成两份。分别装入清洁容器内作为试样，加封后，标明标记
6、。2.5 试样保存 将试样于一1 8 C以下冷冻保存。注:在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化中华人民共和国国家进出口商品检验局1 9 9 7-1 2-0 1 批准1 9 9 8 一 0 4 一 0 1 实施 Is N 0 6 9 4 一 1 9 9 7测定方法3.1 方法提要 试样中残留的 壮观霉素用水提取。提取液经三抓乙 酸处理以去除蛋白质，然后分别用二氛甲 烷、正己 烷、乙 酸乙醋进行液一 液分配.水相定容后过活 性炭柱净化。所得溶液用配有电化学 检测器的高 效液相色 谱仪(H P L C)测定，外标法定量。3.2 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分
7、析纯，水为重蒸馏水。3.2.1 乙睛;HP L C级。3.2.2 柠檬酸。3.2.3 二抓甲烷。3.2.4 正己烷。3.2.5 辛烷基磺酸溶液:0.1 m o l/L水溶液，HP L C级。3.2.6 活性炭:层析用，粒径5 0 ja m，使用前1 3 0 活化2 h,3.2.7 水饱和的乙酸乙酷。3.2.8 三氯乙酸溶液:3 0%a(m/V)水溶液。3.2.9 氢氧化钠溶液:5 0 0 o(二/v)水溶液。3.2.1 0 离子对缓冲液:0.0 2 m o l/L柠檬酸和。.0 0 2 m o l/L 辛烷基磺酸，p H 6.1 0。准确称取4.2 0 3 g柠檬酸，溶于适量水中，加入2 0
8、m L辛烷基磺酸溶液(3.2.5)，加水至近 1 0 0 0 m L，用氢氧化钠溶液(3.2.9)调节p H至6.1 0。用水定容至1 0 0 0 m l，用。4 5 p m膜过滤，在冰箱中 保存，有效 期为3 个月。3.2.1 1 壮观霉素(盐酸盐)标准品:己知纯度，每毫克含 6 1 1 l c g 壮观霉素。3.2.1 2 壮观霉素标准溶液:准确称取适量的壮观霉素标准品(精确至。.0 0 0 1 g)，用水配成浓度为1 0 0 p g/m L 的标准储备液。贮于棕色容量瓶中，保存于冰箱中。根据需要用水稀释储备液成适当浓度的标准工作溶液。3.3 仪器和设备3.3.1 高效液相色谱仪:配有电
9、化学检测 器(E S A C o u l o c h e m II，或相当者)。3.3.2 高速捣碎机。3.3.3 均质器。3.3.4 涡旋混匀器。3.3.5 冷冻离心机:2 0 0 0 0 r/m i n,3.3.6 p H计:精确度士。.0 0 2,3.3.7 微量进样器:2 5 I L.3.3.8 层析柱:8 5 m m X 1 5 m m(id)，底部填 入 3 m m脱脂棉，然后填入1 8 m m活性炭。3.4 测定步骤3.4.1 提取 称取试样约 1 0g(精确至。.0 1 g)于一 1 0 0 mL离心管中，加人 8 mL水，高速均质 3 min，于一4 0C,3 0 0 0 r
10、/m i n 离心3 0 m i n。准确移取上清液4 m L，加 入。.5 m L 三氯乙酸溶液(3.2.8),涡 旋混匀3 0 s,8 0 0 0 r/m i n 离心 3 0 m i n。移取全部上清液，加入6 m L二氯甲烷，涡旋混匀3 0 s,3 0 0 0 r/m in离匀5 m i n。移取全部水相，加人 5 mL正己烷，涡旋混匀 3 0 s,3 0 0 0 r/min离心 5 mi n。移取全部水相，加入2 X5 m L 水饱和过的乙酸乙醋，涡旋混 匀3 0 s,3 0 0 0 r/m i n 离心5 m i n。移取全部水相，用蒸馏水定容至5 m L,涡旋混匀3 0 s e3
11、.4.2 净化 千 卜 述水相中加入 0.0 6 2活性炭，涡旋混匀 3 0 s，过层析柱(3.3.8)，收集流出液，于 8 0 0 0 r/minS N 0 6 9 4 一1 9 9 7离心5 m in。取上清液供H P L C测定。3.4.3 测定3.4.3.1 液相色谱条件 a)色谱柱:S h i m-p a c k S T R O D S-2 C 11 5 0 m m X 4.6 m m(内 径)，粒径5 J i m，或相当 者，b)保护柱:S h i m-p a c k C L C G-O D S C,e，或相当者;c)流动相:离子对缓冲 液(3.2.1 0)-乙 睛(8 4+1 6
12、);d)流速:0.2 mL/mi n;e)保护池电 极电压:9 5 0 m V;f)扫描电极电压:6 5 0 mV;g)工作电 极电 压:8 5 0 m V;h)柱温:3 5 0C;i)进样量:2 0 p L.3.4-3.2 液相色谱测定 根据样液中壮观霉素残留 量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中壮观霉素的 响 应 值 均 应 在 仪 器 检 测 线 性 范 围 内。对 标 准 工 作 溶 液 和 样 液 等 体 积 参 插 进 样 进 行 测 定。每 完 成 一 次进样 分析后，仪器需继续平衡3 0 m i n，才能进行 下一次进样分析。在上述色谱条件下，壮观霉素保留时
13、间约为1 8 mi n。标准品液相色谱图见附录A中图A1.注:因壮观霉素会污染电极，故需平衡电极。3.5 空白试验 除 不加试样外，均按上述测定步骤进行。3.6 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式(功计算试样中壮观霉素残留含量:.(1)V-L尸一仇 .-hh-一-式中:X 试样中 壮观霉素残留含量，m g/k g;h 样 液中壮观霉素的色谱峰高,m m;气 标 准工作溶液中壮观霉素的色谱峰高，m m;标 准工作 溶液中壮观霉素的浓度，p g/m L;V样液最终定容体积，mL;m-最终样液所代表的试样量，9。注，计算结果需扣除空白值.测定低限、回收率1 测定低限 本方法的测定低限为。.0 5
14、 m g/k g,2 回收率 猪肉中 壮观霉素添 加浓度及其回收率的实验数据:在0.0 5 m g/k g 时，回收率为8 6.0 0 0;在0.1 0 m g/k g 时，回 收率为9 5.2%;在 0.5 0 mg/k g时，回收率为 9 8.5 0 0S N 0 6 9 4 一 1 9 9 7 附录A(提示的附录)标准品色谱图的卜0。8图 A2 壮观霉素标准品液相色谱图S N 06 94 一 19 97Fo r e wo r d T h i s s t a n d a r d wa s d r a f t e d i n a c c o r d a n c e wit h t h e r
15、 e q u i r e m e n t s o f G B/T 1.1-1 9 9 3 D i r e c t iv e s f o rt h e w o r k o f s t a n d a r d i z a t i o n-U n i t 1:D r a f t i n g a n d p r e s e n t a t i o n o f s t a n d a r d s-P a r t 1:G e n e r a l r u l e sf o r d r a f t i n g s t a n d a r d s a n d S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 G e
16、n e r a l r u l e s f o r d r a f t i n g t h e s t a n d a r d m e t h o d s f o r t h ed e t e r mi n a t i o n o f p e s t i c id e,v e t e r i n a r y d r u g r e s i d u e s a n d b i o t o x i n s i n c o m mo d i t i e s f o r e x p o r t .T h em e t h o d o f d e t e r m in a t i o n o f t h i s s t a n d a r d w a s d r a f t e d b y r e f e r r i n g t o r e le v a n t d o m e s t i c a n d f o r e i g n l i t-e r a t u r e s t h r o u g h r e s e a r c h,m o d i f i c a t i o n a n d
