1、附件1保健食品中75种非法添加化学药物的检测BJS 2017101 范围本方法规定了保健食品中利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾
2、司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸的液相色谱-串联质谱检测方法。本方法适用于片剂、口服液、硬胶囊和软胶囊保健食品中的利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、
3、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸共75种非法添加物质的检测，同样适用于片剂、口服液、
4、硬胶囊、软胶囊类声称具有保健功效的食品中上述75种物质的检测。2 原理试样经甲醇提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测。3 试剂和材料注：水为GB/T 6682规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH)：色谱纯。3.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.3 甲酸（CH2O2）：质谱级。3.1.4 乙酸铵（CH3COONH4）：质谱级。3.1.5 0.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵水溶液：精密量取甲酸（3.1.3）1 mL，称取乙酸铵（3.1.4）0.771 g，用水溶解并定容至1000 mL。3.2 标准品利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美
5、脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴
6、比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式和相对分子量见附录A表A.1，纯度均98%。3.3 标准溶液配制3.3.1 标准储备液：分别精密称取利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼
7、群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸标准品（3.2）0.01 g（精确至0.000 01 g）于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，得到浓度为1 mg/mL的储备液，-20 避光
8、贮存，有效期3个月。3.3.2 混合标准溶液：分别精密量取储备液（3.3.1）适量，用甲醇（3.1.1）稀释成混合标准中间液，其中利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、尼莫地平、辛伐他丁、氨氯地平、洛伐他丁、美伐他丁、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、艾
9、司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N-单去甲基西布曲明、N,N-双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、褪黑素、芬氟拉明、可乐定、卡托普利、苯乙双胍、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸和二甲双胍浓度为10 g/mL，洛伐他汀羟酸钠盐、呋塞米、氢氯噻嗪、司可巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥、巴比妥和烟酸浓度为100 g/mL。再用初始流动相（见表1）稀释成混合标准使用液，上述物质浓度分别为100 ng/mL和1 g/mL，临用时配制。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2 分析天平：感量分别为0.001 g、0.000 1 g
10、和0.000 01 g。4.3 离心机：转速4 000 r/min。4.4 超声波清洗器。5 分析步骤5.1 试样制备精密称取样品1 g（精确至0.000 1 g），置于50 mL容量瓶中，加甲醇（3.1.1）适量，超声提取15 min，放冷至室温，用甲醇（3.1.1）定容（若样品中含有油脂，则将样品提取液在-20 条件下放置2448 h，时间可视样品是否澄清而定），5 000 r/min离心5 min，上清液经微孔滤膜过滤(0.22 m，有机相)，取续滤液作为待测液。5.2 仪器参考条件5.2.1 色谱条件a）色谱柱：C18柱，1.8 m，2.1100 mm，或性能相当者。b）流动相：A为0
11、.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵（3.1.5），B为乙腈（3.1.2），参考梯度洗脱程序见表1。c）流速：0.3 mL/min。d）柱温：40 。e）进样量：5 L。表1 参考梯度洗脱程序时间/minA：0.1%甲酸-10 mmol/L乙酸铵/%B：乙腈/%09010290102.16535465354.160406.5604072080920809.110905.2.2 质谱条件a）电离方式：电喷雾正负离子模式。b）检测方式：多反应检测（MRM）。c）雾化气：N2。d）干燥气流速：8 L/min。e）喷雾电压：500 V。f）气流温度：350 。g）毛细管电压：3500 V（+）3000
12、 V（-）。h）鞘气流速：11 L/min。i）鞘气温度：250 。j）定性离子对、定量离子、碎裂电压、碰撞能量和离子化模式见表2。表2 非法添加化学药物的主要质谱参数序号化合物母离子（m/z）子离子（m/z）碎裂电压（V）碰撞能量（eV）离子化模式1利血平609.2448.113528+609.2397.1*13524+2格列喹酮528403*1357+52838613519+3羟基豪莫西地那非505487*13520+50537713520+4硫代艾地那非50544813520+505393*13520+5格列苯脲4953691356+495169*13518+6格列美脲491352135
13、7+491126*13523+7豪莫西地那非48931113520+489113*13520+8伐地那非48929913520+489151*13520+9西地那非47537713520+475311*13520+10红地那非46742013520+467396*13520+11伪伐地那非460432*13520+46037713520+12那莫西地那非46037713520+460329*13520+13瑞格列奈45316213520+45386*13520+14那红地那非45340613516+453353*13524+15格列吡嗪4463471357+446321*1357+16洛伐他丁
14、羟酸钠盐445343*13510+44517313530+17尼莫地平419343*13510+41930113520+18辛伐他汀41928513520+419199*13520+19氨氯地平40929413510+409238*13510+20洛伐他汀40528513520+405199*13520+21美伐他汀391185*13520+39115913520+22氨基他达拉非391269*13520+39126213520+23他达拉非39030213520+390268*13520+24佐匹克隆389.2245*13510+389.221713520+25尼索地平389239*13510+3891951
