1、 ICS 65.020 CCS B 39 DB 42 湖北省地方标准 DB42/T 18392022 大球盖菇菌种 Culture of Stropharia rugosoannulata 2022-03-23 发布 2022-05-23 实施 湖北省市场监督管理局 发 布 DB42/T 1839-2022 I 目次 前言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 质量要求.2 5 检验.5 6 标签、标志、包装、运输和贮存.6 附录 A（资料性）大球盖菇菌种培养基配方.8 DB42/T 1839-2022 III 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作
2、导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由宜昌市农业科学研究院提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：宜昌市农业科学研究院、华中农业大学、湖北森源生态科技股份有限公司。本文件主要起草人：刘世玲、申露露、李克彬、冯德品、朱红、边银丙、夏辉、周刚、沈祥陵、焦海涛、施昌华、杨迎春、孔祥琼、周伟、彭慧雯。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱：；对本文件的有关修改意见建议请反馈至宜昌市农业科学研究院，联系电话：0717-6671246,邮箱：。DB
3、42/T 1839-2022 1 大球盖菇菌种 1 范围 本文件规定了大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）菌种的术语和定义、质量要求、抽样规则、检验方法以及抽样、检验以及标签、标志、包装、运输、贮存、生产档案等。本文件适用于大球盖菇菌种的生产和储运。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 191 包装储运图示标志 GB/T 12728 食用菌术语 GB/T 37671-2019 金针菇菌种 NY/
4、T 528-2010 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731-2009 食用菌菌种良好作业规范 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。母种 stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位。也称一级种、试管种。来源：GB/T 127282006,2.5.7 原种 mother spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。来源：GB/T 127282006,2.5.8 栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称三级种。来源：GB/T 12
5、7282006,2.5.9 DB42/T 18392022 2 固体菌种 solid spawn 生长在固体培养料上的菌种。来源：GB/T 127282006,2.5.31 液体菌种 liquid spawn 生长在液体培养基里的菌种。锁状联合 clamp connection 一种锁状桥接的菌丝结构,是异宗结合担子菌次生菌丝的特征。来源：GB/T 127282006,2.2.5 拮抗现象 antagonism 具有不同遗传基因的菌落间互相抑制产生不生长区带或形成不同形式线形边缘的现象。来源：GB/T 127282006,2.3.21 生物学效率 biological efficiency 单
6、位质量培养料的风干物质所培养产生出的子实体或菌丝体质量（鲜重），常用百分数表示。如风干料100 kg产生了新鲜子实体50 kg，即生物学效率50%。来源：GB/T 127282006,2.1.27 摇瓶液体菌种 liquid spawn culturing by Erlenmeyer flask on a shaker 由母种接种到摇瓶液体培养基中在摇床上震荡扩大培养而成的菌丝体纯培养物。发酵罐液体菌种 liquid spawn culturing by fermentation tank 由摇瓶液体菌种或者种子发酵罐液体菌种接种到发酵罐液体培养基中扩大培养而成的菌丝体纯培养物。4 质量要求
7、菌种分类 根据来源、繁殖代数与生产目的，大球盖菇菌种分为母种、原种、栽培种；根据培养基质的形态，分为固体菌种和液体菌种。母种 DB42/T 1839-2022 3 4.2.1 容器规格应符合 NY/T 528-2010 中 4.7.1.2 的规定。4.2.2 感官要求应符合表 1 规定。表1 母种感官要求 项目 要求 检验方法 容器 洁净、透明、完整、无损 肉眼观察 棉塞或硅胶塞 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 肉眼观察 培养基斜面长度 顶端距棉塞或硅胶塞 40 mm 50 mm 肉眼观察、测量 接种块大小（35）mm （35）mm 肉眼观察 菌种外观 菌丝生长量 长满斜面 肉眼观
8、察、显微镜观察 菌丝体表面特征 白色、浓密，有绒毛状气生菌丝，有锁状联合，表面均匀、平整、无角变、无原基 表面分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 肉眼观察，检测 斜面背面外观 培养基不干缩，颜色均匀、无暗斑 肉眼观察 气味 有大球盖菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 鼻嗅 4.2.3 母种培养条件和培养时间：附录 A 规定培养基、232避光恒温培养，18 d22 d 长满斜面。4.2.4 母种栽培性状：母种需经出菇实验，确定种性合格后，方可用于扩大繁殖或出售。原种 4.3.1 固体原种 4.3.1.1 容器规格应符合 NY/T 528-2010 中 4.7.1.3 的规定。4.3.1.
9、2 感官要求应符合表 2 规定。表2 固体原种感官要求 项目 要求 检验方法 容器 洁净、透明、完整、无损 肉眼观察 棉塞或塑料盖 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 肉眼观察 接种物大小 12 mm 15 mm 肉眼观察 菌种外观 紧实度 菌种紧实不软散 肉眼观察 菌丝生长量 长满容器 DB42/T 18392022 4 表2 固体原种感官要求（续）项目 要求 检验方法 菌种外观 菌丝体特征 菌丝洁白、浓密、生长均匀，无高温抑制线，无原基，无子实体。培养基及菌丝体 贴瓶（袋）壁或略有干缩 表面分泌物 无 拮抗现象 无 杂菌菌落 无 肉眼观察、检测 螨虫 无 肉眼观察、检测 气味 有大
10、球盖菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 鼻嗅 4.3.1.3 固体原种培养条件和培养时间：附录 A 规定的培养基、232避光恒温培养，菌丝长满容器（500 mL 菌种瓶或 500 g 菌种袋）的时间为 55 d60 d。4.3.2 液体菌种（原种）4.3.2.1 摇瓶容器规格应符合 GB/T 37671-2019 中 4.4.1.1 的规定。4.3.2.2 不锈钢发酵罐容器宜在温度小于或等于 126，工作压力小于或等于 0.15 Mpa 的条件下工作，要求压力表、安全阀和各个进出口阀门完好，工作正常；无菌通风换气系统完好，工作正常。4.3.2.3 大球盖菇液体菌种培养基配方采用附录 A 中规
11、定的配方。4.3.2.4 感官要求应符合表 3 规定。表3 液体菌种感官指标要求 项目 要求 检验方法 容器 洁净、完整、无损 肉眼观察 摇瓶棉塞或硅胶塞 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 肉眼观察 培养基装量 容器的 55%65%肉眼观察 接种量 摇瓶（接种块大小）12 mm 15 mm，2 块3 块 肉眼观察 发酵罐 生物量干重是罐体装料体积的 3%5%测量 菌液外观 菌液色泽 菌丝体白色；液体清澈透亮 肉眼观察 菌液形态 有大量球状、絮状、片状菌丝体，分布均匀 肉眼观察 杂菌菌丝 无 肉眼观察，检测 气味 有大球盖菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉、甜等异味 鼻嗅 4.3.2.5
12、摇瓶液体菌种培养条件和时间：置于摇床上，振荡频率 80 次/min120 次/min，温度 232，避光培养 8 d10 d。发酵罐液体菌种培养条件和时间：通风量 0.8 L/min 1.5 L/min、罐压保持在 0.03 Mpa 0.05 Mpa之间，温度 232,培养 8 d10 d。DB42/T 1839-2022 5 栽培种 4.4.1 容器规格应符合 NY/T 528-2010 中 4.7.1.4 的规定。4.4.2 感官要求应符合表 4 规定。表4 栽培种感官要求 项目 要求 检验方法 容器 洁净、透明、完整、无损 肉眼观察 棉塞或塑料盖 干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要
13、求 肉眼观察 菌种外观 菌丝生长量 长满容器 肉眼观察 菌丝体特征 洁白、浓密，生长均匀、旺盛，无高温圈现象 培养基及菌丝体 基本贴瓶（袋）壁或稍有干缩 表面分泌物 允许有少量无色水珠或棕黄色水珠 拮抗现象 无 子实体原基 无或少量 杂菌菌落 无 肉眼观察 检测 螨虫 无 肉眼观察 检测 气味 有大球盖菇菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 鼻嗅 4.4.3 栽培种培养条件和培养时间：附录 A 中规定的配方、232避光恒温培养，菌丝长满容器（500 g 菌种袋）时间为 55 d60 d。5 检验 抽样 母种按品种、培养条件、接种时间分批编号，原种（固体原种、液体原种）、栽培种按菌种来源、制种方法
14、和接种时间分批编号。按批随机抽取被检样品。固体菌种的母种、原种、栽培种的抽样量分别为该批菌种量的10%、5%、1%，但每批抽样数量不得少于10 支（瓶、袋）。液体菌种摇瓶菌种的抽样量为每批1个2个摇瓶，液体菌种的发酵罐菌种为每罐100 mL500 mL。留样 固体菌种各级菌种应留样备查，留样的数量应每个批次3支（瓶、袋）5支（瓶、袋），于 0 4 贮存，贮存至使用者在正常生产条件下该批次菌种出菇结束为止。检验 5.3.1 锁状联合检验 从检验样本中挑取菌丝少许，置于洁净的载玻片上做成水封片，用不低于1040的光学显微镜对水封片进行观察，每一检样应观察不少于50个视野。5.3.2 细菌检验 DB
15、42/T 18392022 6 将检验样本按无菌操作接种于营养肉汤培养液（蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、氯化钠5 g、蒸馏水1000 mL，pH值7.07.2）中，在温度371条件下培养24 h，观察培养液是否浑浊。培养液浑浊，为有细菌污染；培养液澄清，为无细菌污染。5.3.3 霉菌检验 将检验样本按无菌操作接种于PDA培养基（参见附录A）中，在2528条件下培养3 d4 d，出现大球盖菇以外的菌落，或有异味者为霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。5.3.4 菌丝体形态、螨虫检验 取适量菌丝体用放大镜或显微镜镜检观察。5.3.5 母种栽培农艺性状和商品性状检验 5.3.5.1 母种性状检验 按N
16、Y/T 1731-2009中“9 出菇试验”的规定进行母钟栽培农艺性状检验和商品性状检验。将被检母种制作成原种，参见附录A中A.2配方,制成菌袋。按照常规方法发菌、覆土出菇。按表5检验项目做好栽培记录。表5 母种栽培农艺性状和商品性状检验记录 检验项目 检验结果 母种栽培农艺性状检验 检验结果 母种长满所需时间 d 总产 kg 原种长满所需时间 d 平均单产 kg/m2 栽培种长满菌瓶（袋）所需时间 d 总生物学效率%出第一潮菇所需时间 d 色泽、质地 第一潮菇产量 d 菇形（菌盖直径，菌柄长度 mm）第一潮菇生物学效率%5.3.5.2 总生物学效率（%）计算 总生物学效率计算式：BE=100%(1)式中：BE 生物学效率；Ffw 大球盖菇子实体鲜品质量，单位为千克（kg）；Sdw 培养料风干物质质量，单位为千克（kg）。判定规则 按本文件“4章质量要求”进行，检验项目全部符合要求即为合格菌种，有一项不合格即为不合格菌种。不合格菌种按NY/T 1731-2009中“12 不合格品处理”的规定执行。6 标签、标志、包装、运输和贮存 标签、标志 DB42/T 1839-2022 7 6.1
