1、NY/T3111-20177分析步骤7.1称量用25mL烧瓶(5.6)称取试样100mg(精确至0.1mg)。对于甾醇总量低于100mg/kg的油脂，可用3倍量的试样。7.2样品前处理7.2.1油样皂化：准确吸取100L胆甾烷醇内标溶液(4.4)加于已称试样的烧瓶中(7.1)，用3L二氯甲烷(4.1.1)稀释，再加入10mL浓度为0.5mol/L氢氧化钾一乙醇溶液(4.1.8)和少许沸石，混合均匀。在烧瓶上连接好回流冷凝器(5.5)，加热并保持混合液微沸，15mi后，停止加热，冷却后将皂化混合液转移至液一液萃取装置(5.4)，并加入7L去离子水和10mL二氯甲烷(4.1.1)，充分振荡均匀，待
2、静置分层后，去除上层水相，有机相用去离子水洗涤3次，直至溶液变清澈。将所得含有甾醇的有机相在45条件下用氮气流缓缓吹干，残留物用5mL正己烷(4.1.2)复溶，备用。7.2.2固相萃取：称取1.0g无水硫酸钠(4.1.6)加到固相萃取柱(4.1.9)中，然后用10mL正己烷(4.1.2)溶液活化，流速1.5mL/min,弃去流出液：将上述5mL正己烷复溶液(7.2.1)注人固相萃取柱中，流速控制在1.2mL/min,弃去流出液：然后用5mL淋洗液(4.1.10)进行淋洗，流速控制在1.0mLmin,弃去流出液；最后用10mL洗脱液(4.1.11)洗脱甾醇并收集于洁净干燥的试管中，流速控制在1.
3、5mL/min。7.2.3甾醇三甲基硅醚的制备：将固相萃取所得的10mL洗脱液(7.2.2)在45条件下用氮气流缓吹，浓缩至大约1L,然后转移到反应瓶(5.7)中，继续用氮气缓缓吹干溶剂，再加人100L硅烷化试剂(4.1.7)，旋紧反应瓶盖，放于105的恒温箱中反应15min,然后冷却至室温供分析。7.3仪器分析条件7.3.1色谱条件a)色谱柱：DB-5MS30m0.25mm(内径)，膜厚0.25m毛细管气相色谱柱或等效柱；b)载气：氦气，流速0.7mL/min,分流比1：40；c)进样口温度320，进样量为1Ld)柱温箱升温程序：初始温度180，保持1min,然后以4/min升到300，并保
4、持25min;e)溶剂延迟时间：l0min。7.3.2质谱条件a)检测方式：全扫模式，扫描质量数从50m/z650m/z;b)电离方式：电子轰击电离源(EI源，电子能量70eV);c)离子源温度250，传输线温度300。7.4气相色谱一质谱分析7.4.1定性分析将衍生完毕的试样(7.2.3)注入气相色谱一质谱仪，记录总离子流图和质谱图。对胆固醇、菜油甾醇、芸墓甾醇、豆甾醇、3-谷甾醇、环阿屯醇、高根二醇、熊果醇，可根据其标准品的保留时间和对应的质谱图进行定性。对于不易购买商业标准品的甾醇，将试验样品所得质谱图与NIST谱库的标准质谱图进行比对，同时结合相对保留时间进行定性。各甾醇三甲基硅醚的重要定性离子参见附录A的表A.1。7.4.2定量分析7.4.2.1甾醇相对响应因子的测定取1mL标准系列混合工作溶液(4.3.3)按照7.2.3的规定进行硅烷化衍生，然后注入气相色谱一质谱仪，测定胆固醇、菜油甾醇、芸墓甾醇、豆甾醇、-谷甾醇、环阿屯醇、高根二醇和熊果醇三甲基硅醚3
