1、ICS67.160.20X51团体标准T/CBIA 005-2019饮料中微生物的检验(滤膜前处理法)2019-01-01发布2019-01-01实施中国饮料工业协会发布电话000502315刮涂层查真伪T/CBIA 005-2019饮料中微生物的检验(滤膜前处理法)1范围本标准规定了饮料（饮用天然矿泉水除外）中菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母的膜过滤方法，是GB4789.2-2016、GB4789.3-2016、GB4789.15方法的补充。本标准适用于可过滤样品的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文
2、件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.1-2016食品安全国家标准食品微生物学检验总则GB4789.2-2016食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1可过滤样品filtrable sample可在一定时间内通过滤膜过滤的样品原液或稀释液。包括可完全过滤的液体饮料样品，稀释后可完全过滤的饮料浓浆样品和溶解后可完全过滤的固体饮料样品。4原理滤膜是一种微孔薄膜，当一定量的样液通过滤膜时，细菌、
3、霉菌和酵母等微生物被截留在滤膜上。然后将滤膜贴于相应的培养基上培养，计数滤膜上生长的菌落数并进行相应确认试验，即可相应测得该样品的菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母等微生物数量。5实验室要求应符合GB4789.1-2016中第2章的规定。6设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料要求如下：6.1无菌滤膜：微孔薄膜，直径47mm或50mm,孔径为0.45m(根据过滤样品的特性选择适宜材质的膜片)。1T/CBIA005-20196.2过滤装置。6.3真空泵或隔膜泵等。6.4抽滤瓶或废液瓶。6.5拍击式均质器及均质袋。6.6电子天平：感量0.1g。6.7无菌平头镊子。6.8无菌吸管：
4、1mL(具0.01mL刻度)，10mL(具0.1mL刻度)或其他可精确刻度的无菌量器及吸头。6.9无菌瓶：容量500mL。6.10无菌培养皿：直径50mm0nm。6.11恒温培养箱：36+C,28士士6.12恒温水浴箱：46C士17培养基和试齐应符合GB4789.2明G82G4789的相关规定8检验程序检验程序见图1。检样液体样品：取样其不少于10m选择1个一3个适宜稀释度的样品匀液，各取不少于10mL样液过滤将滤膜移放在培养基由培养基选择、培养及验证菌落总数：GB4789.2一2016大肠菌群：GB4789.3一2016第二法罨開和酵母：GB4789.15菌落计数结果报告图1检验程序T/CB
5、IA 005-20199操作步骤9.1样品的制备9.1.1液体样品：混匀，待用。9.1.2饮料浓浆和固体饮料样品：取25mL(g)样品置盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水(霉菌和酵母可用无菌蒸馏水)的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min,制成1：10的样品匀液。9.1.3根据对样品污染状况的估计，选择1个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可为原液）抽滤检验，每份样品的过滤量不少于10ml9.2过滤9.2.1将已灭菌的过滤装置连接，用无菌平头镊子夹取无菌滤膜边缘部分，正面向上，贴放在已灭菌的滤床上，放上无菌滤杯并固定。9.2.2无菌吸取不少于10mL待测样液至滤杯内，进行抽
6、滤，当样液全部过滤后，使用不少于15mL无菌稀释液至滤杯。抽滤完成后取下滤杯，用无菌平头镊子移取滤膜9.2.3将滤膜截留微生物面向上贴于相应的培养基平板上，平铺并避免在滤膜和培养基之间产生气泡。9.2.4使用的无菌稀释液应进行空白对照9.3培养与验证9.3.1菌落总数参照GB4789.22016执行。9.3.2大肠菌群参照GB4789.32016第二法执行9.3.3霉菌和酵母参照GB4789,15执行10结果与报告10.1计算方法10.1.1若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计算范围内时，按照GB4789.2-2016中7.1.2执行。10.1.2平板上的数值乘以相应稀释倍数，作为每毫升（克
7、）样品中菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母的结果。10.1.3菌落总数和大肠菌群应选取菌落数在100CFU以内无延菌落生长的平板计数；霉菌和酵母应选取菌落数在50CFU以内无蔓延菌落生长的平板计数。以过滤膜片上的菌落数记为检验结果，若所有稀释度的样品（包括液体样品原液）滤膜上均无菌落生长，则记录为：1乘以最低稀释倍数。10.1.4当滤膜上有较大片状菌落生长时，则此平板结果不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板记录菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数；细菌大于100CFU的可记录为多不可计，霉菌和酵母菌大于50CFU的可记录为多不可计。10.1.5当滤膜上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。3
