1、DB53/T 760.22016 云南半细毛羊养殖 第 2 部分：人工授精 2016-09-10 发布 2016-12-01 实施ICS 65.020.30 B 40 中华人民共和国国家质量监督 检验检疫总局备案号：52076-2016 云南省地方标准 云南省质量技术监督局 发 布 DB53/T 760.22016 I 前 言 DB53/T 760-2016云南半细毛羊养殖分为以下部分：第1部分：品种 第2部分：人工授精；第3部分：胚胎移植；第4部分：营养需要；第5部分：饲草饲料；第6部分：饲养管理；第7部分：疫病防治；第8部分：羊舍建设；第9部分：档案管理。本部分为DB53/T 760的第2
2、部分。本部分按照GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。本部分由云南省农业厅提出。本部分由云南省农业标准化专业技术委员会（YNTC07）归口。本部分起草单位：云南省畜牧兽医科学院。本部分主要起草人：权国波、洪琼花、李东江、兰蓉、朱兰、吕春荣、石国庆、赵远崇、周翔。DB53/T 760.22016 1 云南半细毛羊养殖 第 2 部分：人工授精 1 范围 本部分规定了采精、精液保存和输精等要求。本部分适用于云南半细毛羊。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最
3、新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 5458 液氮生物容器 3 采精 3.1 种公羊选择和调教 3.1.1 种公羊选择 种公羊选择应符合下列要求:a)系谱清楚、遗传稳定、生产性能好，符合云南半细毛羊特级或一级种羊要求；b)无遗传性或传染性疾病，体质健康，发育良好；c)每次射精量在 0.75 mL 以上，精子活力在 0.7 以上，密度在 3109 个/mL 以上，畸形率低于15%。3.1.2 种公羊调教 对初次采精的种公羊宜用下列方法调教：a)让种公羊与发情母羊在采精室本交 3 次5 次。b)将发情母羊的阴道分泌物涂抹在种公羊鼻尖上，以刺激其性欲。c)每天用温水擦洗种公羊阴囊，然后
4、用手从下往上轻轻按摩睾丸，早晚各 1 次，每次 10 min左右。d)采精时，让被调教种公羊在旁边“观摩”。3.2 采前准备 采精宜用假阴道法进行，采精地点应固定，要求平坦、避风、安静，避免阳光直射。按下列顺序进行采精前准备：a)检查假阴道是否漏气、橡皮内胎是否扭转，松紧是否适度；b)灌注 50 55 热水，竖直假阴道使水量至出口处；c)装上气嘴和经消毒处理及生理盐水冲洗过的集精杯，吹气至内胎呈松紧适度的三角形；d)取适量消过毒的凡士林由外向内涂擦假阴道前 1/3 处；DB53/T 760.22016 2 e)检查内胎夹壁温度，最适宜的采精为温度为 40 42。3.3 操作方法 采精操作方法和
5、要求如下：a)采精人员站立于公羊右侧，右手握假阴道，食指、中指夹住集精杯，气嘴向内下侧，在公羊上跳发情母羊时采精人迅速下蹲，将假阴道以斜上 45 度角靠近发情母羊臀部，用左手轻轻引导公羊阴茎至假阴道内；b)当公羊的后躯向前冲即完成射精，公羊从母羊身上滑下时，顺势将假阴道取下，竖立集精杯，打开气卡活塞放气，待精液完全流入集精杯后，取下集精杯加盖送操作室，记录射精量，进行精液品质检查；c)每只种公羊每天可采精 2 次3 次，每次射精量 0.5 mL2.0 mL，两次采精间隔 5 min10 min，连续采精 5 d7 d，休息 1 d。3.4 精液品质检查 3.4.1 肉眼观察 正常的精液呈浓厚乳
6、白色不透明，用肉眼观察能见到云雾状运动。3.4.2 活力评定 精子活力采用0 分1.0 分评级。在400倍显微镜视野里，以做快速直线运动精子的比例进行评分，当100的精子作直线运动时，评为1.0分，80的精子作直线运动时，评为0.8 分，以此类推。3.4.3 密度评定 精子密度评定分为“密”、“中”、“稀”、“无”。在400倍显微镜视野内精子与精子间的距离小于一个精子的长度为“密”；精子间有明显的空隙，两精子间的距离相当于1个2个精子长度为“中”；在视野中只有少数精子，精子之间超过两个精子的长度为“稀”；若视野里没有精子则记为“无”。3.5 采精记录 采精记录参见表1。表1 采精记录表 公羊耳
7、号 采精日期 采精量（ml）精子活力 精子密度备注 4 精液保存 精液保存方式有常温保存和冷冻保存。采精后2 d内使用宜采用常温保存，2 d后使用宜采用低温冷冻保存。4.1 常温保存 DB53/T 760.22016 3 4.1.1 稀释液配制 精液常温保存稀释液配制参见附录A。4.1.2 稀释 精液稀释按照以下步骤进行：a)将装有稀释液的 50 mL 锥形离心管置于 37水浴锅中至稀释液温度与精液相同；b)沿装有精液的 15 mL 锥形离心管管壁缓缓加入稀释液，同时轻轻摇晃至精液和稀释液混匀。4.1.3 包装、标记、贮存和运输 4.1.3.1 包装 用经过灭菌处理的15 mL锥形塑料离心管装
8、分装精液。4.1.3.2 标记 精液包装器皿上应标明产品名称、公羊品种、编号、采精日期、精液剂量、稀释液种类、稀释倍数、精子活力、精子密度和贮存温度。4.1.3.3 贮存 置于15 20 恒温箱内保存。4.1.3.4 运输 置于l5 20 的运输箱内运输，注意避光，运输过程中避免强烈震动和碰撞。4.2 冷冻保存 4.2.1 稀释液配制 精液冷冻稀释液配制参见附录B。4.2.2 冷冻 4.2.2.1 稀释：将新鲜精液和冷冻稀释液按 5 倍10 倍体积比稀释，用于稀释的精液和冷冻稀释液温度应相同。4.2.2.2 装管：在塑料细管上打印好品种、羊号、生产日期后，将稀释后的精液分装于 0.25 mL
9、塑料细管，并用封口粉封口。4.2.2.3 降温：以 0.1/min0.6/min 速率缓慢降温至 5，在此温度下平衡 2 h4 h。4.2.2.4 预冻：预冻时塑料细管与液氮面的距离应该在 1 cm1.5 cm，预冻温度为-80-120，预冻时间为 5 min10 min。4.2.2.5 保存：预冻结束后将塑料细管直接投入液氮进行长期保存，储存冻精的液氮容器应符合 GB/T 5458 的规定。4.2.3 解冻 将细管冻精从液氮中取出，空气浴10 s后，置于37 水浴锅中解冻30 s。DB53/T 760.22016 4 4.2.4 质量评价 解冻后的精子满足以下两个方面的指标，即视为质量合格：
10、a)解冻后精子活力不低于 0.3，质膜完整率不低于 50%，顶体完整率不低于 70%，运动速度在 100 m/s 以上。b)每头份冻精解冻后成直线运动的精子数不低于 1000 万个。5 输精 5.1 母羊发情鉴定 每天上、下午用试情公羊试情，母羊接受公羊爬跨，站立不动，即为发情。5.2 输精时间 母羊发情后8 h12 h第一次输精，间隔10 h12 h第二次输精，若还持续发情的，可在第二次输精后8 h12 h进行第三次输精。5.3 输精操作 5.3.1 输精前将母羊外阴部用 0.1%新洁尔灭溶液擦洗消毒，再用生理盐水冲洗干净；5.3.2 将用生理盐水温润过的内窥镜慢慢插入母羊阴道，打开电源开关
11、，寻找子宫颈口；5.3.3 采用鲜精输精时，用 2 mL 注射器连接输精枪，先吸取 0.5 mL 空气后吸取 0.5 mL 精液。采用冻精输精时，剪掉已解冻精液细管的封口粉部，把细管装入冻精输精枪；5.3.4 将输精枪慢慢插入子宫颈口内 0.5 cm1.0 cm 处，缓慢将精液注入；5.3.5 输精完毕使母羊继续倒立 2 min，防止精液倒流。5.4 输精记录 人工授精记录参见表2。表2 人工授精记录表 第一次输精 第二次输精 第三次输精 母羊编号 发情时间 时间 公羊编号输精量 时间 公羊编号输精量 时间公羊编号输精量 妊娠情况产羔日期 产羔数 备注 DB53/T 760.22016 5 A
12、 A 附 录 A（资料性附录）精液常温保存稀释液配制 精液常温保存稀释液分为即配即用稀释液和短期保存稀释液：A.1 即配即用稀释液 保存期为3 h5 h，可选择下列稀释液之一：A.1.1 牛、羊奶稀释液：把鲜牛奶或羊奶用6层8层纱布过滤，然后隔水煮沸10 min15 min，冷至室温，除去奶皮备用，一般稀释2 倍4 倍。A.1.2 脱脂乳稀释液：脱脂奶粉10 g、葡萄糖0.2 g溶于100 mL蒸馏水，95 加热处理8 min。冷却至室温后加入0.5 g青霉素和链霉素。然后于8000 g30 min离心去上清，用0.45 m滤器过滤备用。A.1.3 柠檬酸钠、蛋黄、葡萄糖稀释液：取柠檬酸钠2.
13、3 g、葡萄糖1.0 g，溶于100 mL蒸馏水中，过滤后加入蛋黄10 mL、青霉素10万单位、链霉素10万单位、磺胺粉0.3 g。A.2 短期保存稀释液 保存期为1 d2 d，可选择下列稀释液之一：A.2.1 柠檬酸钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、氨苯磺胺、蛋黄稀释液 取柠檬酸钠1.6 g、葡萄糖0.97 g、磷酸氢二钠0.15 g、氨苯磺胺0.3 g溶于100 mL蒸馏水中，消毒冷却至室温后加入青霉素10万单位、链霉素10万单位、蛋黄20 mL。A.2.2 Tris、葡萄糖、柠檬酸、蛋黄稀释液：取Tris 2.71 g、葡萄糖1.0 g、柠檬酸1.4 g、青霉素0.0627 g、链霉素0.1335
14、 g溶于90 mL蒸馏水中，0.22 m滤器过滤除菌后于4 保存。使用前加入10 mL蛋黄。A.2.3 Tris、Tes、葡萄糖、蛋黄稀释液：取Tris 0.9691 g、Tes 4.0339 g、葡萄糖0.1622 g、青霉素0.0150 g、链霉素0.0250 g溶于80 mL蒸馏水中，0.22 m滤器过滤除菌后于4 保存。使用前加入20 mL蛋黄。DB53/T 760.22016 6 B B 附 录 B（资料性附录）精液冷冻稀释液配制 B.1 精液冷冻稀释液配制 a)基础稀释液：取 Tris 2.71 g、柠檬酸 1.4 g、葡萄糖或果糖 1 g、青霉素 0.0627 g、链霉素0.1335 g、用超纯水稀释至 84 mL、最后用 0.22 m 一次性滤器过滤，于 4 保存不应超过1 个月；b)冷冻稀释液：取基础稀释液 8.4 mL，加蛋黄 1 mL、甘油 0.6 mL，混合均匀。然后用离心机高速离心（16000 g30 min），取上清用 0.45 m 滤器过滤备用。冷冻稀释液应现用现配，在4 下不应超过 24 h。_ DB53/T 760.22016 版权专有 不得翻印 侵权必究 举报电话：（0871）63215571（0871）63215571
