1、中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲料中亚硝酸盐的测定方法G B 1 3 0 8 5 一 9 1Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f n i t r i t e i n f e e d s，主题内容与适用范围本标准规定了饲料中亚硝酸盐的测定方法。本标准适用于饲料原料(鱼粉)、配合饲料(包括混合饲料)中亚硝酸盐的测定。2 原理 样品在微碱性条件下除去蛋白质，在酸性条件下试样中的亚硝酸盐与对氦墓苯磺酸反应，生成重氮化合物，再与N-1-蔡乙二胺盐酸盐偶合形成红色物质，进行比色测定。3 试剂和溶液 本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯
2、度的水。11 四硼酸钠饱和溶液:称取2 5 g 四硼酸钠(N a,B,0 7-l O H 2 0,G B 6 3 2)，溶于5 0 0 m L温水中，冷却后备用3.2 1 0.6%亚铁氰化钾溶液:称取5 3 g 亚铁氰化钾 K,F e(C N),3 H,O,G B 1 2 7 3),溶于水，加水稀释至5 0 0 mLo1 3 2 2%乙酸锌溶液:称取1 1 0 g乙酸锌 Z n(C H,C O O),2 H,O,H G 3-1 0 9 8),溶于适量水和1 5 m L冰乙酸(G B 6 7 6)中，加水稀释至5 0 0 mL,3.4 0.5%对氨基苯磺酸溶液:称取0.5 g 对氨基苯磺酸(N
3、H 2 C,H,S O,H H,O,H G 3-9 9 2),溶于1 0 YO盐酸中，边加边搅，再加1 0 y o 盐酸稀释至1 0 0 m L,贮于暗棕色试剂瓶中，密闭保存，一周内 有效。3.5 0.1%N-1-蔡乙二胺盐酸盐溶液:称取。.1 g N-1-蔡乙二胺盐酸盐(C,o H 7 N H C H,N H,2 H C I)，用少量水研磨溶解，加水稀释至1 0 0 m L,贮于暗棕色试剂瓶中密闭保存，一周内有效。3.6 5 m o l/L盐酸溶液:量取4 4 5 m L盐酸(G B 6 2 2)，加水稀释至1 0 0 0 M I。3.7 亚硝酸钠标准贮备液:称取经1 1 5 士5 C 烘至
4、恒重的亚硝酸钠(G B 6 3 3)0.3 0 0 0 g，用水溶解，移入5 0 0 m L 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于4 0 0 tt g 亚硝酸根离子。3.8 亚硝酸钠标准工作液:吸取5.0 0 m L亚硝酸钠标准贮备液(3.7),置于2 0 0 m L容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当 于1 0 p g 亚硝酸根离子。4 仪器、设备分光光度计:有1 0 m m比色池，可在5 3 8 n m处测量吸光度。分析天 平:感量0.0 0 0 1 g.恒温水浴锅。实验室用样品粉碎机或研钵。41424344国家技术监督局1 9 9 1 一 0 7 一 1 6 批准1 9 9
5、 2 一 0 4 一 0 1 实施G B 1 3 0 8 5 一 9 14.5 容量瓶:5 0(棕色),1 0 0,1 5 0,5 0 0 m L4.6 烧杯:1 0 0,2 0 0,5 0 0 m l。4.7 量筒:1 0 0,2 0 0,1 0 0 0 m L.4.8 长颈漏斗;直径7 5 -9 0 m m,4.9 吸量管:1,2,5 m l。4.1 0 移液管:5,1 0,1 5,2 0 m L.5 试样制备 采集具有代表性的饲料样品，至少2 k g，四分法缩分至约2 5 0 g,磨碎，过1 m m孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。6 测定步驻6.1 试液制备 称取约
6、5 g 试样，精确到0.0 0 1 g,置于2 0 0 m L 烧杯(4-6)中，加约7 0 m L温水(6。士5 C)和5 m l四硼酸钠饱和溶液(3-1)，在水浴(4-3)上加热1 5 m i n(8 5 15 0C)，取出，稍凉，依次加入2 m L 1 0.6%亚铁氰化钾溶液(3.2),2 mL 2 2%乙酸锌溶液(3.3)，每一步须充分搅拌，将烧杯内溶液全部转移至1 5 0 m l容量瓶(4-5)中，用水洗涤烧杯数次，并入容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，静置澄清，用滤纸过滤，滤液为试液备用。6.2 标准曲线绘制 吸取。,0.2 5,0.5 0,1.0 0,2.0 0,3.0 0 m L
7、亚硝酸钠标准工作液(3-8)，分别置于5 0 m L棕色容量瓶(4-5)中，加水约3 0 m L，依次加入2 m L O.5%对氨基苯磺酸溶液(3.4),2 m L盐酸溶液(3.6)，混匀，在闭光处放置3 -5 m i n，加入2 m L O.1 肠 N-1-蔡乙二胺盐酸盐溶液(3.5)，加水稀释至刻度，混匀，在闭光处放置1 5 m i n，以。m L亚硝酸钠标准工作液(3.8)为参比，用1 0 m m比色池，在波长5 3 8 n m处，用分光光度计(4-1)测其他各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，各溶液中所含亚硝酸根离子质量为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。6.3 测定 准确吸取试液约3
8、 0 m L,置于5 0 m L棕色容量瓶(4-5)中，从“依次加入2 m l,O.5%对氨基苯磺酸溶液(3.4),2 m L 盐酸溶液(3-6)”起，按6.2 的方法显色和测量试液的吸光度。了 测定结果7，计算公式X 二 m,X1 5 0V X”七/1.5 一 会X 2 2 5式中:X试样中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)含量,m g/k g;V试样测定时吸取试液的体积，m L;m,-V m L试液中 所含亚硝酸根离子质量+la g(由标准曲 线读得或由回 归方程求出);。试祥质量，9;1.5 亚硝酸钠质量和亚硝酸根离子质量的比值。7.2 结果表示 每个试样取2 个平行样进行测定，以其算术平均值为结果 结果表示到。.1 m g/k g.了.3 重复性G B 1 3 0 8 5 一 9 1同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值;在亚硝酸盐含量小于或等于1 m g/k g 时，不得超过平均值的5 0 yo;在亚硝酸盐含量大于1 m g/k g 时，不得超过平均值的2 0%.附加说明:本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由中国农业科学院畜牧研究所负责起草。本标准主要起草人冯学勤、汪傲、雷祖玉。
