1、SN/T1316-2003(50)上,烘干(约30min)。也可在37温箱中过夜。干燥后的组织切片在室温下保存,待检。4.4苏木素一伊红溶液(H.E)染色步骤4.4.1二甲苯脱蜡:10min。4.4.2二甲苯脱蜡:10min。4.4.3二甲苯:无水乙醇(1:1)溶液:2min5min。4.4.4无水乙醇:2 min5min。4.4.5无水乙醇:2min5min。4.4.695%乙醇溶液:2 min5 min。4.4.780%乙醇溶液:2 min5 min。4.4.870%乙醇溶液:2 min5 min。4.4.9二水:2 min5 min。4.4.10苏木素染色液:3min(可根据苏木素放置时
2、间和染色效果调整)。4.4.11自来水:1min。4.4.12盐酸乙醇溶液:3s10s。4.4.13自来水:10min。4.4.14二级水:1min。4.4.1570%乙醇溶液:2min。4.4.1680%乙醇溶液:2min。4.4.17乙醇染液:1min2min。4.4.1895%乙醇溶液:2min。4.4.19无水乙醇:3min。4.4.20无水乙醇:3min。4.4.21无水乙醇:二甲苯(1:1)溶液:2min。4.4.22二甲苯:3min。4.4.23二甲苯:2min。上述各步骤可以在自动染色机上完成。染色后,用中性树胶封片。如果用甘油乙烯乙醇溶液封片,则仅做到步骤4.4.18。注:除
3、“去除感染性”外,其余均按常规H.E制片染色法操作。4.5免疫组织化学(IHC)染色步骤4.5.1将被检切片放入自动染色机上脱蜡(二甲苯10min、二甲苯10min)、脱二甲苯二甲苯:无水乙醇溶液(1:1)溶液3min、无水乙醇3min、无水乙醇3min、95%乙醇溶液3min、80%乙醇溶液3min、70%乙醇溶液3min。4.5.2将组织切片移至二级水中,在微波炉中加热煮沸20min。加热时,要保证切片一直浸在水中。加热后,在空气中自然冷却2min。或把切片浸人预热至37含有蛋白酶K(5g/mL)的50mL缓冲液中(见第A.3章),消化15min。4.5.3 PBS 5 min。4.5.4将切片放入含1%过氧化氢甲醇溶液中,10min。4.5.5自来水洗1min,再用PBS洗2min。4.5.6切片上滴加含0.1%胰酶的缓冲液(见第A.4章),湿盒中室温作用15min20min。4.5.7自来水洗1min,再用PBS洗两次,每次5min。4.5.8在切片上滴加(ABCkit中的)正常马血清,湿盒中反应20min。4.5.9用纸巾蘸掉马血清。4.5.10切片上滴加第一抗体(FH11,终浓度稀释至5g/mL),在相同的另一张切片上滴加正常鼠血3