1、SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T 1 0 9 0 一 2 0 0 2布氏杆菌病试管凝集试验操作规程P r o c e d u r e o f t u b e a g g l u t i n a t i o n t e s t f o r b r u c e l l o s i s2 0 0 2 一 0 3 门 5 发布2 0 0 2 一 0 9 一 0 1实施中华人民共和匡国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 肩S N/T 1 0 9 0-2 0 0 2前言 本标准是按照G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则第1 单元:标准的起草与表述规则 第 1 部分:标
2、准编写的基本规定 和O I E 动物疾 病诊断 方法和 疫苗使用标准 手册 而制定的。本标准参考了原中华人民共和国动植物检疫局编写的 中华人民共和国进出境动物检疫规程手册，并结合了起草单位多年的检验检疫经验。本标准的附录A是标准的附录。本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人:王玉玲、朱世强。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。中华人民共和国出入境检验检疫行业标准s N/T 1 0 9 0-2 0 0 2布氏杆菌病试管凝集试验操作规程P r o c e d u r e o f t u b e a g g l
3、 u t i n a t i o n t e s t f o r b r u c e l l o s i s范围本标准规定了布氏杆菌病试管凝集试验的操作技术要求。本标准适用于羊种、牛种和猪种布氏杆菌感染家畜的检疫。2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在 本标准中引用而 构成为本标准的条文。本 标准出版时，所示版 本均为有效。所有标准都被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 6 6 8 2-1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法试荆和材料3.1 试剂3.1.，试验用蒸馏水为 G B/T 6 6 8 2中的三级水。3.1.2 稀释液;0.5%石炭酸生理盐水
4、(含。.5%石炭酸,0.8 5/氯化钠溶液)。检验羊血清时用含。.5%石 炭酸的1 0%盐溶液(含0.5%石炭酸,1 0%氯化钠溶液)。3.1.3 标准抗原:按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液作 1，2 0(工作浓度)稀释。3.1.4 标准阳性血清 冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3.1.5 标准阴性血清:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3.2材料3.2.1 试管架。3.2.2 玻璃试管:规格为1 3 mmX1 0 0 m m,圆底，洁净。3.2.3 微量移液器。3-2-4 可调连续加样器。3.3 被检血清3.3.1 按常规方法采血分离血清。血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无
5、溶血和无腐败气味。3.3.2 运送和保存血清样品 防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。若 3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。操作方法4.，确定被检血清的稀释度 牛、马、骆驼稀释用 1:5 0,1，1 0 0,1，2 0 0,1，4 0 0(4个稀释度);猪、山羊、绵羊和狗用 1;2 5,1:5 0,1:1 0 0,1:2 0 0(4 个稀释度)。_-中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0 0 2-0 3-1 5批准2 0 0 2-0 9-0 1 实施 IS N/T 1 0 9 0-2 0 0 2 大规模检疫时也可用2 个稀释度，即牛、马、骆驼用1，5 0,1，1 0 0，猪、山
6、 羊、绵羊和狗用1，2 5,1:5 0,为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。4.2 稀释被检血清4.2.1 猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释4.2.1.1 每份被检血清用4 支试管，标记检验编号后第I 管加1.1 5 m L稀释液，第2-4 管各加人0.5 m L 稀释液。4.2-1.2 取被检血清。1 mL，加人第 1 管，充分混匀后吸弃 0.2 5 m L,4.2.1.3 从第1 管中吸 取。.5 m L 加人到第2 管，混合均匀 后，再从第 2 管吸取。.5 m L至第3 管，如此倍比稀释至第 4 管，从第 4 管弃去。.5 m L，稀释完毕。4.2.1.4 从第 1 至第 4 管的血清稀
7、释度分别为1，1 2.5,1，2 5,1，5 0,1，1 0 0,4.2.2 牛、马和骆驼血清的稀释 牛、马和骆驼血清的稀释方法与 3.2.1基本一致，差异是第 1管加 1.2 m L稀释液和 5 0 p L被检血清。4.3 加抗原 将 0.5 m L抗原(1:2 0)加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，猪、羊或狗的血清稀释则依次变为 1:2 5,1:5 0,1:1 0 0,1，2 0 0，牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为 1，5 0,1，1 0 0,1 2 0 0,1:4 0 0。各反应管反应总量为 1 mL o4.4 设立对照 每次试验都应设立下列对照。4.4.1 阴性血清对照 阴性血
8、清的稀释和加抗原的方法与被检血清同。4.4.2 阳性血清对照 阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴 度，加抗原的方法与被检血清同。4.4.3 抗原对照 在 0.5 mL稀释液中，加 0.5 m L抗原(1，2 0 ,4.5 配制比浊管 每次试验均须配制比浊管，作为判定凝集反应程度的依据，先将抗原(1:2 0)用等量稀释液作一倍稀释，然后按表 1 配制比浊管。表 1 比浊管的配制试管号12345 抗原稀释液 1，4 0。.5%石炭酸生理盐水 清亮度/%凝 集 度 标 记1.0 0 0 00.7 50.2 5 25 +0.5 00.5 0 5 0+;.0，2 5 0.7 5 7 5+0 1.0 0
9、1 0 0+注:+十完全凝集，菌体1 0 0%下沉，上层液体 1 0 0%清亮;+十几乎完全凝集，上层液体7 5 清亮;+凝 集很显著，液体5 0 环清亮;+有沉淀，掖体 2 5%清亮 一无沉淀 液体不清亮感作所有试验管充分震荡后，置 3 7 C 温箱感作 2 0 h o判定确定每份被检血清效价比 照比 浊管 判读，出 现+以上 凝集现 象的最 高血清稀释度为血清凝集价。S N/T 1 0 9 0-2 0 0 25.2 结果判定 当阴 性血清 对照和 抗原对照不出现凝集(一)，阳性血清的凝集价达到 其标准效价士1 个滴度，则证明试验成立，可以判定。否则，试验应重做。5.2.1 牛、马和 骆驼于
10、1:1 0。血清 稀释 度，猪、山 羊、绵羊和狗于1:5 0 血清稀释度出现“+”以 上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应。5.2.2 需要采用国际凝集单位表示试验结果时，可按照附录 A中的换算公式换算成国际凝集单位。S N/T 1 0 9 0-2 0 0 2 附录A(标准的附录)国际凝集单位国际凝集单位与血清效价的换算见式(All,1 0 0 0 X X Xo 二”二 二 (A1)式中:Y 国际凝集单 位，I U/m L;X被检血清效价(凝集价)，X o 国际标准血清的效价。注:国际标准血清是由WT O生物制品标准化专家委员会制定的，并规定国际标准血清每安瓶含有 1 0 0 0 个 I U
11、凝 集素抗体。公式中国际标准血清的效价是用所使用的试管凝集方法及抗原测定的.例如，按所使用方法测定国际标准血清的最终效价为 1/8 0 0(5 0 0 0 凝集)，而某一被检血清的最终凝集效价为1/4 0 0(5 0 写凝集)，代人式(A1)中。1 0 0 0 义4 0080 0=5 0 0(I U/mL)即该被检血清的效价用国际凝集单位表示为5 0 0I U/mL,用本标准方法和指定单位生产的布氏杆菌凝集抗原测定国际标准血清时，其效价正好为 1/1。，因此本标准方法测定的被检血清的效价的倒数即为其国际单位数。例如本标准方法测定的被检血清最终效价为 1/5 0，则用国际凝集单位表示为 5 0 I U/mL,
