1、2023 年 1 月中国普通外科杂志Vol.32 No.1第 32 卷 第 1 期China Journal of General SurgeryJan.2023 版权归中国普通外科杂志所有http:/长链非编码RNA GAS8-AS1与微小RNA 135b在肝细胞癌中的表达及临床意义王昀，郜茜（青海大学附属医院 消化内科，青海 西宁 810000）摘 要 背景和目的：大量研究表明，长链非编码 RNA（lncRNA）与微小 RNA（miRNA）及其靶基因之间内源性竞争的调控模式与恶性肿瘤的发生发展密切相关。笔者团队前期通过软件预测发现，lncRNA GAS8-AS1 和 miR-135b 之间
2、存在结合位点，但两者在肝细胞癌（HCC）中是否存在竞争关系及其作用尚不清楚。因此，本研究探讨lncRNA GAS8-AS1和miR-135b在HCC组织中的表达及其临床意义。方法：收集2017年2月2019年2月在青海大学附属医院行手术切除的110例HCC患者的癌组织及癌旁组织标本，通过 qRT-PCR 检测 lncRNA GAS8-AS1 和 miR-135b 的表达，分析两者与患者临床病理特征及预后的关系。结果：lncRNA GAS8-AS1 在 HCC 组织中的表达明显低于癌旁组织，而 miR-135b 在 HCC 组织中的表达明显高于癌旁组织（均P0.05）。两者的表达水平均与HCC患
3、者的Edmondson分期、TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况有关（均 P0.05）。lncRNA GAS8-AS1 低表达患者与 miR-135b 高表达患者的 3 年总生存率分别明显低于 lncRNA GAS8-AS1 高表达患者与 miR-135b 低表达患者（均 P0.05）。lncRNA GAS8-AS1 低表达、miR-135b 高表达以及高 Edmondson 分级、高 TNM 分期、有乙肝病史是影响 HCC 患者预后的独立危险因素（均P0.05）。结论：在 HCC 组织中 lncRNA GAS8-AS1 低表达，miR-135b 高表达，两者表达水平的消长可能与 HCC 的发
4、生发展以及患者的预后密切相关。关键词 癌，肝细胞；RNA，长链非编码；微RNAs；预后中图分类号：R735.7Expressions of long noncoding GAS8-AS1 and microRNA 135b in hepatocellular carcinoma and their clinical significanceWANG Yun,GAO Qian(Department of Gastroenterology,Qinghai University Affiliated Hospital,Xining 810000,China)Abstract Background a
5、nd Aims:Many studies have demonstrated that the regulation mode of endogenous competition between the long noncoding RNAs(lncRNAs)and the microRNAs(miRNAs),as well as their target genes,is closely related to the occurrence and development of malignant tumors.The authors 基础研究 doi:10.7659/j.issn.1005-
6、6947.2023.01.007China Journal of General Surgery,2023,32(1):87-93.http:/dx.doi.org/10.7659/j.issn.1005-6947.2023.01.007收稿日期：2022-05-20；修订日期：2022-12-28。作者简介：王昀，青海大学附属医院副主任医师，主要从事消化道肿瘤方面的研究。通信作者：郜茜，Email:Q87中国普通外科杂志第 32 卷 版权归中国普通外科杂志所有http:/team has previously found a binding site between lncRNA GAS8-
7、AS1 and miR-135b through software prediction.However,it is unclear whether there is competition between them in hepatocellular carcinoma(HCC)and their actions.Therefore,this study aims to investigate the expressions of lncRNA GAS8-AS1 and miR-135b in HCC tissue and their clinical significance.Method
8、s:The specimens of cancer and adjacent tissues from 110 patients with HCC undergoing surgical resection in Qinghai University Affiliated Hospital from February 2017 to February 2019 were collected.qRT-PCR was used to detect the expressions of lncRNA GAS8-AS1 and miR-135b,and their associations with
9、clinicopathologic features and the prognosis of patients were analyzed.Results:The expression of lncRNA GAS8-AS1 in HCC tissue was significantly lower,while the expression of miR-135b was significantly higher in HCC tissue than in paracancerous tissue(both P0.05).Their expression levels were all rel
10、ated to the Edmondson stage,TNM stage,degree of differentiation and lymph node metastasis in HCC patients(all P0.05).The 3-year overall survival rate of patients with low expression of lncRNA GAS8-AS1 or high expression of miR-135b was significantly lower than that of patients with high expression o
11、f lncRNA GAS8-AS1 or low expression of miR-135b,respectively(both P0.05).Low expression of lncRNA GAS8-AS1 and high expression of miR-135b together with high Edmondson grade,advanced TNM stage,and history of hepatitis B were independent risk factors for the prognosis of HCC patients(all P3 cm 处）。根据
12、Edmondson 病理分级：级 52 例，级 58 例；根据 TNM 分期：期 48 例，期 62 例。所有组织在采集后立88第 1 期王昀，等：长链非编码RNA GAS8-AS1与微小RNA 135b在肝细胞癌中的表达及临床意义 版权归中国普通外科杂志所有http:/刻进行速冻，之后置于-80 的冰箱中保存。1.2 纳入标准和排除标准纳入标准：患者术前均未进行放化疗、介入、射频消融术及免疫治疗；HE 染色常规病理检查均为原发性 HCC，且未合并其他恶性肿瘤；经名病理医师确认为 HCC；有完整的临床资料，术后有随访数据。排除标准：肝转移癌；合并心、肾等其他重要器官功能不全；合并有自身免疫性疾
13、病；临床资料及术后随访数据缺失。1.3 试剂与仪器RNA 提取和分离试剂盒（Ambion，美国）；反转录试剂盒（Takara，中国）；NanoDrop 2000 超微量分光光度计（Thermo，美国）；荧光定量 PCR 检测系统（BioRad，美国）。1.4 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验严格按操作说明书，用 Trizol 试剂提取 HCC组织及癌旁组织的总 RNA，并通过 NanoDrop 2000测 定 RNA 的 质 量 和 浓 度。用 反 转 录 试 剂 盒（Takara，中国）进行反转录，反应体系为：cDNA产 物 2 L，2SYBR Premix Ex Taq TM 8
14、L，上下游引物各1 L，50ROX Reference Dye 0.4 L，RNaseFree H2O 7.6 L。反应条件为：95 1 min、95 10 s、58 45 s、72 30 s，共 40 个循环。lncRNA GAS8-AS1 和 miR-135b 的表达水平以 2-CT表示。实验所用引物序列如表 1 所示。1.5 随访术后经门诊、电话及住院等方式对患者进行随访，随访截止时间为 2022 年 2 月，随访终点为随访时间终止或患者死亡。1.6 统计学处理本研究经 SPSS 23.0 软件对数据进行统计分析，计量资料用均数标准差（x s）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料用
15、例数（百分率）n（%）表示，组间比较采用2检验。生存分析用 Kaplan-Meier 法，Cox 比例风险模型分析影响患者预后的危险因素。P55 岁 的 患 者 有 61 例（55.45%），55 岁的患者有 49 例（44.55%）；男性患者 63 例（57.27%），女性患者 47 例（42.73%）；肿瘤直径5 cm 的患者 60 例（54.56%），5 cm 的患者 50 例（45.44%）；有 乙 肝 病 史 的 患 者 65 例（59.09%），无 乙 肝 病 史 的 患 者 45 例（40.91%）；术前甲胎蛋白20 ng/mL 的患者 57 例（51.82%），20 ng/mL
16、 的患者 53 例（48.18%）（表 2）。2.2 lncRNA GAS8-AS1和miR-135b在HCC组织及癌旁组织中的表达情况与癌旁组织比较，HCC 组织中 lncRNA GAS8-AS1 的表达水平明显降低（0.470.03 vs.1.030.8，P0.05）；而 miR-135b 在 HCC 组织中的表达水平明显 高 于 癌 旁 组 织（3.170.29 vs.1.120.16，P5555性别男女肿瘤直径（cm）55乙肝病史是否术前甲胎蛋白（ng/mL）2020数值61（55.45）49（44.55）63（57.27）47（42.73）60（54.56）50（45.44）65（59.09）45（40.91）57（51.82）53（48.18）89中国普通外科杂志第 32 卷 版权归中国普通外科杂志所有http:/2.3 lncRNA GAS8-AS1 和 miR-135b 表达水平与患者临床病理参数的关系本研究根据 lncRNA GAS8-AS1、miR-135b 表达水平的均值，将患者分为高表达组和低表达组。结 果 发 现，lncRNA GAS8-AS1 高 表 达 组
