1、云南主栽蓝莓果实可滴定酸及抗氧化活性评价研究张瑜瑜，宋怀飞，刘佳妮，姚丽媛，华金珠（昆明学院农学与生命科学学院，昆明 650214）摘要：以云南主产区的 6 个品种蓝莓鲜果为研究对象，采用生理生化试验方法，比较不同品种蓝莓成熟果实提取液的可滴定酸、类黄酮、总酚、总花色苷含量及对其体外抗氧化活性进行评价。试验结果表明，6 个品种中，比洛克西的可滴定酸含量、类黄酮含量、总酚含量、总花色苷含量最高，分别比夏普蓝高 47.4%、111.81%、121.16%和 2556.50%；体外抗氧化活性评价结果显示，比洛克西对 DPPH 自由基的清除能力最强，当浓度为 0.8 mg/mL 时，清除能力为 56.
2、8%；对 ABTS+自由基的清除能力最好，浓度为 1.0 mg/mL时，清除能力为 88.7%；对 OH-自由基的清除能力最高，当浓度为 1.0 mg/mL时，清除能力为 90.4%；6 个品种蓝莓果实类黄酮、总酚、总花色苷含量与 DPPH 自由基、ABTS+自由基和 OH-自由基清除率间均存在正相关关系，且相关性均达到极显著水平（P0.01）。综上可知，比洛克西蓝莓果实可滴定酸含量较高，且抗氧化能力比其他5个品种强，品质优良，适宜进行综合加工和高值化利用。关键词：云南主产；蓝莓；可滴定酸；抗氧化活性中图分类号：S663.9文献标识码：A文章编号：2096-5877（2023）01-0124-
3、05Evaluation of Titratable Acid and Antioxidant Activity of Blueberry FruitsGrown in YunnanZHANG Yuyu,SONG Huaifei,LIU Jiani,YAO Liyuan,HUA Jinzhu(College of Agriculture and Life Sciences,Kunming University,Kunming 650214,China)Abstract：The contents of titratable acids,flavonoids,total phenols,and t
4、otal anthocyanins in the extracts of matureblueberry fruits from 6 varieties of fresh blueberry fruits in the main production areas of Yunnan Province were compared by physiological and biochemical methods,and their antioxidant activities in vitro were evaluated.The resultsshowed that Biloxi had the
5、 highest titratable acid content,flavonoids content,total phenol content and total anthocyanin content,which were 47.4%,111.81%,121.16%and 2556.50%higher than Sharpblue.The results of antioxidant activity evaluation in vitro showed that Biloxi had the strongest scavenging capacity for DPPH free radi
6、cal.When the concentration was 0.8 mg/mL,the scavenging capacity was 56.8%.The scavenging capacity of ABTS+wasthe best,and the scavenging capacity was 90.4%when the concentration was 1.0 mg/mL.The scavenging capacity ofOH-is the highest.The content of flavonoids,total phenols and total anthocyanins
7、in 6 varieties of blueberry fruitswere positively correlated with the clearance rates of DPPH free radical,ABTS+free radical and OH-free radical,and the correlation reached an extremely significant level(P0.01).In summary,Biloxi have higher titratable acidcontent,stronger antioxidant capacity than o
8、ther 5 varieties,and its suitable for comprehensive processing and highvalue utilization.Key words：Yunnan main production;Blueberry;Titratable acid;Antioxidant activity蓝莓（Vaccinium spp.）又名蓝浆果、越橘等，属杜鹃花科越橘属植物,为多年生落叶或常绿小灌木1。主要栽培于美国，又被称为美国蓝莓2。近年来，我国蓝莓产业发展极为迅速，栽培面积收稿日期：2020-02-12基金项目：云南省高校联合基金面上项目（2017FH
9、001-040）作者简介：张瑜瑜（1983-），女，副教授，硕士，主要从事园艺产品生理生态与产量品质形成的相关研究。和年产量迅速增长。我国蓝莓研究工作始于吉林农业大学郝瑞教授在 20 世纪 80 年代初对长白山地区的野生笃斯越橘资源的调查研究和品种引进3。蓝莓含有丰富的营养成分，其果实中含有大量生物活性物质，如多酚、类黄酮等，具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂等作用，其开发利用前景非常广阔4。近年来，由于其保健营养功效，蓝莓日益受到消费者青睐，增加栽培面积及其培育新品种张瑜瑜等：云南主栽蓝莓果实可滴定酸及抗氧化活性评价研究东北农业科学2023，48（1）：124-128，135Journal of N
10、ortheast Agricultural SciencesDOI:10.16423/ki.1003-8701.2023.01.0261期张瑜瑜等：云南主栽蓝莓果实可滴定酸及抗氧化活性评价研究125成为必然趋势，云南省因其地貌复杂，自然资源丰富，兼具热带、亚热带、温带、寒带植物，多样的气候条件为蓝莓生长提供优质生长空间，是国内较为适宜蓝莓种植的地区之一5。目前，针对云南主栽蓝莓研究主要集中在栽培管理方面，对其生物活性物质及抗氧化性质的报道较为鲜见，本研究以云南主栽蓝莓鲜果为研究对象，对其可滴定酸、类黄酮、总酚、总花色苷含量进行测定，同时分析 DPPH、ABTS+、OH-自由基的清除能力，对其抗
11、氧化能力进行综合评价研究，旨在为指导云南蓝莓产业选择性的综合加工和高值化利用提供技术支持和理论依据。1材料与方法1.1试验材料试验材料采自云南澄江主产区，共选用6个蓝莓品种：夏普蓝、灿烂、密斯提、比洛克西、绿宝石、莱格西，且均采自同一地块，鲜果成熟后采样，每个品种重复3次，每次重复随机采样100粒，采集后放入冰盒带回试验室冷冻保存待用。分光光度计、1,1-二苯基苦基苯肼、甲醇、抗坏血酸、水杨酸、无水乙醇、FeSO4、Tris 碱、没食子酸、CH3COONa、EDTA2Na等。1.2试验方法1.2.1可滴定酸含量测定采用 NaOH-酚酞溶液滴定法测定6。可滴定酸含量以苹果酸（折算系数 0.067
12、）进行计算，重复3次。1.2.2抗氧化活性物质含量测定（1）类黄酮含量：采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法6测定，以芦丁标准曲线作为参照，准确称取0.5 mL 类黄酮提取液，溶于 10 mL 容量瓶中，加入0.3 mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀，避光静置 6 min，再加 0.3 mL 10%六水硫酸铝溶液，摇匀，避光静置 6 min，加入 4 mL 4%氢氧化钠溶液，用纯甲醇定容，摇匀静置10 min，在510 nm处测吸光值。（2）总酚含量：参考 Folin-Ciocalteus6法，吸取一定体积提取液于 10 mL 离心管中，先加入福林酚试剂 0.2 mL，摇匀，静置 4 min，加入 1 mL
13、10%碳酸钠溶液，再加入 ddH2O 定容至 8 mL，35 水浴 1 h，760 nm 处测吸光值，以标准没食子酸做标准曲线。（3）花色苷含量：参照 pH 示差法6并稍做修改，准确称取 0.5 mL 提取液于 10 mL 离心管中，加入 4.5 mL pH 4.5 乙酸钠盐酸缓冲液，静置 10 min，分别在520、700 nm处测吸光值。1.2.3不同品种蓝莓体外抗氧化活性测定（1）DPPH自由基清除能力测定DPPH 自由基清除能力根据 Gong 等7的方法稍做修改。取不同浓度的样品及维生素 C 溶液(浓度分别为 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL)各 1 mL,分 别 加
14、 入 1 mL 0.5 mmol/mL DPPH 溶 液、10 mL60%乙醇，混合均匀，在室温下静置 30 min,测定517 nm 吸光度，以维生素 C 为阳性对照。根据式(1)计算DPPH自由基清除率:DPPH自由基清除率()%=|AO(Ai Aj)AO 100（1）式中，Ai为样品组吸光度，Aj为样品本底吸光度（以等体积无水乙醇代替 DPPH 溶液），AO为空白对照组吸光度(以等体积蒸馏水代替样品溶液)。（2）ABTS+自由基清除能力的测定参考林恋竹等8的方法并适当修改。将等体积 7.4 mmol/mL 的 ABTS+自由基和 2.6 mmol/mL 的过硫酸钾溶液混合，室温避光下静置
15、 1216 h.制成 ABTS+储备液。用 pH 7.4 的磷酸缓冲液稀释储备液，使其在 734 nm 下的吸光度在(0.700.02)，制成 ABTS+工作液。取不同质量浓度的纯化样品以及维生素 C 溶液(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL)各 1mL，加入 ABTS+工作液 6 mL，混合均匀，室温下静置 6 min，测定 734 nm 下的吸光度，以维生素 C 为阳性对照。根据式(2)计算ABTS+自由基清除率：ABTS+自由基清除率()%=|Ao (Ai Aj)AO 100（2）式中，Ai为样品组吸光度；Aj为样品本底吸光度(以等体积蒸馏水代替 ABTS+工作液)：AO
16、为空白对照组吸光度(以等体积蒸馏水代替样品溶液)。（3）OH-自由基清除能力测定根据 Liu 等9的方法稍做修改。取不同浓度样品及维生素 C 溶液(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL)各 1 mL，加入 5 mmol/mL FeSO4溶液 2 mL，蒸馏水2 mL，5 mmol/mL 水杨酸-乙醇溶液 2 mL 以及 5mmol/mL H2O2溶液 2 mL，混合均匀，室温下放置30 min,测定 510 m 下的吸光度，以维生素 C 为阳性对照，按式(3)计算OH-自由基清除率:OH-自由基清除率()%=|Ao (Ai Aj)Ao 100（3）126东 北 农 业 科 学48卷式中，Ai为样品组吸光度，Aj为样品本底吸光度（以等体积蒸馏水代替 ABTS 工作液），AO为空白对照组吸光度（以等体积蒸馏水代替样品溶液）。1.2.4不同品种蓝莓体外抗氧化活性的 EC50和EC95比较利用线性方程分别计算 6 个品种蓝莓对 OH-自由基、DPPH 自由基、ABTS+自由基清除率的EC50、EC95。1.3数据处理采用 Excel 2013、SPSS 24.0软件进行数据处理分
