1、20中 国 食 物 与 营 养第29 卷中国食物与营养2023，29(2):20-25Food and Nutrition in China基金项目:河南省重点研发与推广专项(科技攻关)项目(项目编号:212102110197);海关总署科研项目(项目编号:2020HK227);郑州海关科研项目(项目编号:2021ZZHGKY02)。作者简介:张淑霞(1983)，女，硕士研究生，高级工程师，研究方向:食品理化检测。通信作者:邢荣花(1982)，女，硕士研究生，高级工程师，研究方向:食品理化检测。液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱非靶向筛查玉米粉和小麦粉中 35 种真菌毒素张淑霞，刘胜男，
2、祝伟霞，封琳，田亚，宋丽亚，邢荣花(郑州海关技术中心，郑州450000)摘要:目的:建立了液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术同时测定玉米粉和小麦粉中 35 种真菌毒素的方法。方法:样品经乙腈-水-甲酸(84:15:1)直接提取，以 0.1%(体积分数)甲酸-1 mmol/L 乙酸铵水-甲醇为流动相，采用 HSS C18SB 色谱柱(2.1 mm 100 mm，1.8 m)分离，在一级母离子全扫描加数据依赖的二级子离子扫描模式 Full MS/ddMS2(TopN)下进行采集，TraceFinder 对数据进行分析，建立了真菌毒素标准数据库，并构建了玉米粉和小麦粉中真菌毒素的非定向筛查
3、方法。结果:35 种化合物在各自浓度范围内线性良好(20.99)，检出限为 0.5 20 g/kg，在 2 个不同浓度水平进行加标试验，回收率为 60%120%，相对标准偏差为1.2%18.6%。采用建立的方法对市场上不同品牌的玉米粉和小麦粉进行检测，部分产品检出了不同种类和含量的真菌毒素。结论:该方法快速简便，可实现玉米粉和小麦粉中真菌毒素的准确定性和定量。关键词:液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap);粮食;真菌毒素;筛查随着检测技术的发展，真菌毒素的检测方法和手段越来越多。目前有关粮食及其制品中真菌毒素的检测主要有光谱法、酶联免疫法(ELI
4、SA)、胶体金快速检测法、高效液相色谱法(HPLC)1-5 等。本研究采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道离子阱质谱法建立小麦粉和玉米粉中 35 种典型真菌毒素的筛查方法，采集了标准物质化合物色谱信息，通过高分辨质谱正负离子切换 FullMS/ddMS2扫描方式分析，获得多种真菌毒素的保留时间、一级母离子和二级碎片离子精确质量数，建立了35 种真菌毒素标准数据库，并完成裂解途径解析与特征碎裂片段筛选;采用数据非依赖扫描，获取可追溯的样品质谱信息，建立非定向筛查方法。该方法具有前处理简单、检测时间短、灵敏度和准确度高的优势，适用于大批量粮食及其制品中多种真菌毒素的快速筛查。1材料与方法1.1主
5、要仪器与设备Milli-Q 超纯水净化系统，美国 Millipore 公司;Het-tich otofix 32A 离心机，德国 Hettich 公司;S10H 型超声波清洗器，德国 Elma 公司;Heidolph multi reax 多功能振荡器，德国 Heidolph 公司;液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(HPLC-Q-Exactive 配 Ultimate 3000 液相色谱)，美国 Thermo Fisher 公司。1.2试剂与材料甲醇、乙腈(色谱纯，德国 Merck 公司);甲酸(色谱纯，美国 ACS 恩科化学公司);乙酸铵(色谱纯，美国 ThermoFisher Scien
6、tific 公司);35 种真菌毒素混合标准储备液(浓度均为 10 mg/L，天津阿尔塔科技有限公司)(表 1)。玉米、小麦粉，购于当地农贸市场或超市。1.3方法称取2.0 g 样品于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 乙腈-水-甲酸(84:15:1)混合提取溶液，超声提取 10min，加入3 g 无水硫酸镁、1 g 氯化钠涡旋振荡 1 min，4 000 r/min 离心5 min，移取4 mL 上层溶液至试管，在40水浴下氮气吹干，最后加入1 mL 甲醇-水-甲酸(30+70+0.1)超声溶解 1 min，涡旋振荡 1 min，过 0.22m 有机系微孔滤膜，供 HPLC-Q/Exa
7、ctive 测定。1.4基质匹配溶液的配制按照样品的前处理方法处理 2 种不同基质的空白样品，得空白基质溶液，取混合标准储备液，用空白基质溶液将其逐级稀释，得到混合标准曲线溶液。DOI:10.19870/ki.11-3716/ts.2023.02.002第2 期张淑霞等:液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱非靶向筛查玉米粉和小麦粉中 35 种真菌毒素21表135 种真菌毒素标准数据库信息中文名称英文名称CAS 号分子式离子化模式母离子精确质荷比保留时间碎片1碎片2碎片3黄曲霉毒素 B1Aflatoxin B11162-65-8C17H12O6M+H313.070 6613.41285.07
8、5 38269.044 01257.080 84黄曲霉毒素 B2Aflatoxin B27220-81-7C17H14O6M+H315.086 3113.24287.091 06259.059 78297.075 38黄曲霉毒素 G1Aflatoxin G11165-39-5C17H12O7M+H329.065 5812.75243.065 03311.054 75283.060 18黄曲霉毒素 G2Aflatoxin G27241-98-7C17H14O7M+H331.081 2312.61313.070 40285.075 47245.080 81杂色曲霉素Sterigmatocystin
9、10048-13-2C18H12O6M+H325.070 6616.48310.046 75281.044 01297.075 23赭曲霉毒素 AOchratoxin A303-47-9C20H18ClNO6M+H404.089 5416.04239.010 19358.083 60341.056 50赭曲霉毒素 BOchratoxin B4825-86-9C20H19NO6M+H370.128 5114.93205.049 51324.122 74223.060 13T-2 毒素T-2 toxin21259-20-1C24H34O9M+NH4484.254 1114.41305.138 12
10、245.117 02233.116 85T-2 三醇T-2 toxin triol97373-21-2C20H30O7M+Na405.188 3712.34303.120 27125.057 60340.259 34HT-2 毒素HT-2 toxin26934-87-2C22H32O8M+NH4442.243 5413.26263.127 59245.117 17233.117 51麦角醇Lysergol602-85-7C16H18N2OM+H255.149 198.07240.125 67197.107 60224.106 58麦角柯宁碱Ergocornine564-36-3C31H39N5
11、O5M+H562.302 4013.13544.292 20268.144 17223.122 91玉米赤霉烯酮Zearalenone17924-92-4C18H22O5M-H317.138 3516.10273.149 20175.038 85131.048 81-玉米赤霉烯醇-Zearalenol36455-72-8C18H24O5M-H319.154 0016.16301.145 05275.165 13160.015 30-玉米赤霉烯醇-Zearalenol71030-11-0C18H24O5M-H319.154 0016.00275.164 92301.144 93257.154 0
12、2玉米赤霉酮Zearalanone5975-78-0C18H24O5M-H319.154 0015.07275.165 07301.144 17205.086 17-玉米赤霉醇-Zearalanol26538-44-3C18H26O5M-H321.169 6515.91303.160 61277.180 57259.169 31-玉米赤霉醇-Zearalanol42422-68-4C18H26O5M-H321.169 6514.43277.180 54303.160 16259.169 62脱氧雪腐镰刀菌烯醇Deoxynivalenol51481-10-8C15H20O6M+H297.133
13、265.55249.111 83203.106 61261.112 0615-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇15-AcetylDeoxynivalenol88337-96-6C17H22O7M+NH4356.170 3810.33321.133 06261.111 76339.143 803-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇3-AcetylDeoxynivalenol50722-38-8C17H22O7M+H339.143 8310.35321.133 03261.111 97297.133 24伏马毒素 B1Fumonisin B1116355-83-0C34H59NO15M+H722.395 7514.
14、37704.386 20159.028 88546.364 00伏马毒素 B2Fumonisin B2116355-84-1C34H59NO14M+H706.400 8316.16336.325 60688.389 80354.336 40伏马毒素 B3Fumonisin B3136379-59-4C34H59NO14M+H706.400 8315.91336.325 70688.389 00159.028 70镰刀菌烯酮-XFusarenon X23255-69-8C17H22O8M+H355.138 747.38137.059 71247.096 16277.106 38蛇形菌素Diace
15、toxyscirpenol2270-40-8C19H26O7M+NH4384.201 6812.39349.164 52307.153 87247.132 69新茄病镰刀菌烯醇Neosolaniol36519-25-2C19H26O8M+NH4400.196 599.35305.138 24245.117 13121.064 83腾毒素Tentoxin28540-82-1C22H30N4O4M+H415.233 9814.13358.212 20330.180 85302.150 24疣孢青霉原Verruculogen12771-72-1C27H33N3O7M+Na534.221 0716.4
16、6512.237 98205.059 88169.122 80青梅震颤素 APenitrem A12627-35-9C37H44ClNO6M+H634.292 9916.54616.281 07279.158 66221.116 44青霉酸Penicillic Acid90-65-3C8H10O4M+H171.065 197.14125.059 80153.054 60112.052 22霉酚酸Mycophenolic Acid 24280-93-1C17H20O6M+H321.133 2614.51207.065 12177.054 55275.127 47娄地青霉素 Coquefortine C58735-64-1C22H23N5O2M+H390.192 4513.43322.129 36193.071 91198.127 62黄绿青霉素Citreoviridin25425-12-1C23H30O6M+H403.211 5216.39297.148 32315.158 87285.148 221.5分析条件1.5.1色谱条件35 种真菌毒素依据其化学性质在正、负离子模式下同时进行数
