1、第 1 期第 53 卷作者简介：李英（1974.12），女，山西长治人，硕士研究生，山西振东五和医养堂股份有限公司功能食品研发总监，研究方向：功能食品研究与开发。E-mail：。五红汤对小鼠抗氧化作用的初步研究李英1，张永杰2，岳林涛2，李欣2，魏贺敏11.山西振东五和医养堂股份有限公司，山西 长治 047100；2.山西振东制药股份有限公司，山西 长治 047100摘要：文章主要研究五红汤的抗氧化、缓解焦虑、补气补血功效。采用小鼠分组，按相应剂量灌胃五红汤饲养 30 d 的研究方法。通过灌胃 50%乙醇溶液建立氧化损伤模型，与灌胃五红汤后还原性谷胱甘肽（GSH）含量、蛋白质羰基（PCO）含量
2、对比，验证五红汤的抗氧化能力；幽闭小鼠建立焦虑模型，对比糖水偏好、强迫游泳时间及出凝血时间，验证五红汤的抗焦虑功效及补气补血作用。因此得到实验结果如下：（1）GSH 含量：五红汤可提高小鼠体内的 GSH 含量；（2）糖水偏好：五红汤有升高小鼠糖水偏好的趋势；（3）强迫游泳时间：五红汤可缩短小鼠抑郁后行为绝望的时间；（4）出血时间、凝血时间测定：五红汤可缩短小鼠出凝血时间；（5）PCO 含量：五红汤可降低 PCO 含量。最终可得到以下实验结论：五红汤可提高小鼠抗氧化、缓解焦虑和补气养血能力。关键词：五红汤；抗氧化；缓解焦虑；补气养血doi：10.3969/j.issn.1001-6678.202
3、3.01.0231实验材料1.1受试药物五红汤样品，山西振东五和医养堂股份有限公司，批号：20200526。用法用量：一日一次，一次一袋（30 g/袋）。1.2建模药物无水乙醇：购自天津市永大化学试剂有限公司。1.3主要实验试剂、仪器PBS（金克隆，20191018）；还原型谷胱甘肽（GSH）含量检测试剂盒（索莱宝，20200426）；小鼠蛋白质羰基（PCO）酶联免疫分析（晶抗，202005）。台式低速离心机、高速离心机（安徽中科中佳，HC-1518、HC-2518）；漩涡混合仪（常州市万丰仪器制造有限公司，XH-T）；玻璃点样毛细管（华西医科大 学 仪 器 厂，0.5 mm/100mm）;酶
4、 标 仪(伯 腾，EPOCH)；电子天平（上海菁海仪器有限公司，JA5002N）；电热恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司，DZKW-4）。1.4实验动物选用 KM 小鼠 134 只，SPF 级，雌性，体重1720 g，购自西安交通大学医学部动物实验中心，许可证编号：SCXK（陕）2018-001，批号：20200521，质量合格证编号 NO.628。适应性饲养一周，期间自由饮水和采食，保持光照和通风充足；清洁、恒温环境，饲养环境平均温度为 25，平均湿度为 37%；1520 次/h 全新风。光照：自然光照。2剂量设计选择及主要实验指标设计依据2.1剂量设计原则五红汤：每日服用量为：30 g/
5、60 kg=0.5g/kg。转换成小鼠的等效剂量（中剂量）为：0.5 g/kg10 倍=5g/kg，则低剂量为 2.5 g/kg，高剂量为 7.5 g/kg，小鼠低、中、高剂量分别相当于临床服用量的 5 倍、10倍、15 倍。符合中药药效学试验剂量设计的一般常规。2.2造模方式2.2.1氧化损伤模型末次灌胃后，3 个剂量组和模型组禁 16 h（过夜），一次性灌胃给予 50%乙醇 0.4 mL/只，6 h 后取材（空白组不做处理，直接取材）13。2.2.2焦虑模型小鼠于行为房适应一周，自由进水、进食。小鼠置于束缚管中（离心管提前烫出透气孔，分散于整个管身，盖子中心有一小孔，小鼠尾巴穿过盖子 D
6、小第 53 卷第 1 期2023 年 2 月工业微生物Industrial MicrobiologyVol.53 No.1Feb.202373-第 1 期第 53 卷工业微生物孔）连续束缚 21 d，每天 4 h，期间禁食、禁水，空白组小鼠正常进水、进食2。3五红汤功效实验研究3.1分组及给药根据实验要求，将小鼠分为 5 组，即空白组、模型组、高剂量组、中剂量组和低剂量组，给药后 30天开始检测各项指标。3.2检测操作3.2.1抗氧化检测小鼠末次给药后过夜禁食 16 h，50%乙醇一次性灌胃 0.4mL/只，6 h 后取肝脏检测 GSH 和 PCO 含量。3.2.2凝血时间和出血时间小鼠尾尖
7、3 cm 处剪断，拭去第 1 滴血后于清洁载玻片两端各滴一滴直径 510 mm 的血液，每隔 30 s 用干燥针头挑动血液 1 次，至能挑起纤维蛋白丝为止，即为凝血时间。鼠尾剪断后，血液自行溢出开始计时，每 30 s 用滤纸吸去血滴 1 次，直至血液自然停止，即为出血时间45。3.2.3糖水偏好检测用 50 mL 离心管制成测试饮(糖)水瓶，每管装25 mL 1%蔗糖溶液或者纯水，小鼠自由进(糖)水进食 4 h。在预适应 48 h 和正式检测 48 h 后的 24 h 时间点都进行纯水和糖水的位置交换。在 024 h、2448 h 和 048 h 三个时间段统计分析小鼠的糖水偏好程度2。通过称
8、量水瓶前后质量，计算糖水、纯水、液体总消耗量和糖水偏好百分比：糖水偏好百分比=糖水消耗/（糖水消耗+纯水消耗）100%3.2.4强迫游泳检测小鼠束缚 21 d 后适应 1 d，第 2 天进行强迫游泳实验。在高 30 cm、直径 20cm 的烧杯中装入 25 左右的水，水平面的高度距烧杯底部 15 cm。记录小鼠 6 min 内后 4 min“行为绝望”时间（即维持自身不下沉、仅露出鼻孔保持呼吸、四肢偶尔划动以保持身体漂浮不动）2。4数据处理实验数据以均值标准差(S)表示，采用SPSS22.0 统计软件进行数据处理，计量资料采用方差分析及 LSD-t 检验。5实验结果5.1五红汤对小鼠抗氧化作用
9、的影响表 1抗氧化指标测定与空白组比，模型组 GSH、PCO 含量差异性显著，P0.01，氧化损伤建模成功；与模型组比，各剂量组均有显著性差异，P0.01。由此可见，五红汤对小鼠脂质过氧化具有一定的调节作用。5.2凝血时间和出血时间在出血时间测定中，与空白组比，中、高剂量组有显著性差异，P0.01；在凝血时间测定中，与空白组比，低剂量组 P0.05，中、高剂量组 P0.01，差异性显著，表示五红汤可以缩短小鼠的出凝血时间。表 2凝血时间和出血时间5.3糖水偏好实验在 3 个时间段中，空白组糖水偏好百分比高于模型组，抑郁小鼠糖水偏好降低。024 h：低剂量组高于模型组，2448h：三个剂量组高于
10、模型组，048 h：低剂量组高于模型组，表示五红汤可以升高小鼠糖水偏好百分比。表 3糖水偏好实验（不同时间段百分比）组别GSH/U mg-1PCO/pg mL-1模型组1 151.832 0135.508 6*505.036 717.041 73*正常组2 166.595 795.883 4434.373 311.155 00低剂量组1 484.912 2250.585 6*469.70338.5192 3*中剂量组1 398.268 4155.595 5*467.84 3311.155 00*高剂量组1 450.917 4210.623 0*482.720 06.443 23*注：与模型组比
11、较，*为，*为 P0.01。组别凝血时间出血时间正常组113.000 016.346 312.908 31.341 8低剂量组94.000 019.339 111.418 01.035 6*中剂量组51.500 013.881 6*7.230 01.916 2*高剂量组43.333 37.580 7*9.688 32.103 3*注：与模型组比较，*为，P0.05，*为，P0.01。组别024h2448h048h模型组0.570 10.026 70.538 50.023 40.550 60.018 9空白组0.601 60.090 50.550 80.090 40.574 10.085 3低剂
12、量组0.585 80.075 60.653 40.079 80.612 50.066 4中剂量组0.487 30.025 50.575 10.125 90.523 10.060 9高剂量组0.514 40.025 20.600 10.076 80.554 20.047 4注：与模型组比较，*为，P0.05，*为，P0.01。74-第 1 期第 53 卷李英等：五红汤对小鼠抗氧化作用的初步研究5.4强迫游泳检测针对于小鼠强迫游泳检测观察记录行为绝望时间，模型组与空白组比较，有显著性差异，P0.01，表示小鼠建立幽闭抑郁模型成功，模型组与 3 个剂量组相比，中、高剂量组有差异性，P0.05，低剂量
13、组有显著性差异，P0.01，表示五红汤可缩短小鼠抑郁后行为绝望时间。表 4行为绝望时间6结论本次研究结果显示，五红汤各项检测实验结果中均有组别出现差异性数据。实验采用大量摄入乙醇的方式使小鼠体内氧化系统和抗氧化系统失衡，引发组织发生氧化损伤，通过检测灌胃五红汤小鼠的肝组织，发现其体内 GSH 含量升高、PCO 活性降低，证明五红汤可以提高小鼠的抗氧化能力。凝血时间和出血时间研究结果表明五红汤可提高补气摄血能力。糖水偏好实验是根据动物对甜味的偏好而设计的一种检测方法，当小鼠出现抑郁行为时，其对糖水的偏嗜度降低，实验结果表明五红汤有提高抑郁小鼠糖水偏好的趋势；小鼠强迫游泳实验是典型的行为绝望，实验
14、过程中小鼠总不动时间反映动物的抗争行为、因绝望引起抑郁情绪的程度，检测结果显示五红汤可以缩短抑郁小鼠行为绝望时间。综上所述，五红汤具有提高抗氧化能力、缓解抑郁、补气养血的作用。参考文献1 药监局修订发布抗氧化等 9 个保健食品功能评价方法J.中国食品学报,2012,12(5):81.2 孙楠楠,沙龙泽,许琪.C57BL/6J 小鼠慢性束缚应激抑郁症模型的建立 J.中国医学科学院学报,2015,37(1):8-11.3 汤杰,陈运娇,陈洪章,等.桉叶多酚对大鼠乙醇急性氧化损伤保护作用的研究 J.现代食品科技,2015,31(5):1-5,115.4 黄月芳,楼招欢.天麻钩藤颗粒对偏头痛模型小鼠的
15、活血、抗炎、镇痛作用观察 J.浙江中医杂志,2013,48(12):908-909.5 曲香芝,崔弘,陈正爱.不同炮制法的淫羊藿提取物对小鼠出血和凝血时间的影响 J.时珍国医国药,2007(1):118-119.AbstractThis experiment mainly studies the effects of Wuhong decoction on antioxidation,relieving anxiety,tonifying qi and blood.The mice were grouped and fed for 30 days according to the corres
16、ponding dose of gavage and Wuhong decoction.The oxidativedamage model was established by gavage 50%ethanol solution,and the content of reducing glutathione(GSH)and protein carbonylgroup(PCO)content after gavage of Wuhong decoction were compared to verify the antioxidant capacity of Wuhong decoction.Theanxiety model of claustrophobic mice was established,and the anti anxiety effect and the effect of supplementing qi and blood ofWuhong decoction were verified by comparing the sugar preference,forc
