1、收稿日期 2021-09-07；修回日期 2021-11-03基金项目四川省科学技术厅中央引导地方科技发展项目（2021ZYD0083）；四川省科技计划项目（2022NSFC0716）；西南医科大学应用基础重点项目（2021ZKZD010）作者简介郭梦瑶（1994-），女，硕士，医师，E-mail:通信作者聂敏海，E-mail:；刘旭倩，E-mail：。*共同通信作者c2023年版权归上海口腔医学编辑部所有上调 Decorin 对口腔鳞癌荷瘤裸鼠 EGFR、C-Myc、p21 表达的影响郭梦瑶1，2，李凯玉1，2，聂敏海1，2*，刘旭倩1，2*（1.西南医科大学附属口腔医院牙周黏膜病科，四川泸
2、州646000；2.西南医科大学口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室，西南医科大学口腔医学研究所，四川泸州646000）摘要目的：探讨饰胶蛋白聚糖基因（decorin，DCN）过表达对口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）裸鼠荷瘤中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、骨髓细胞瘤病毒癌基因（cellular-myelocytomatosis viraloncogene，C-Myc）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（cyclin dependent kinase inhibitor，p21）表达水平的
3、影响。方法：通过脂质体转染法上调人口腔鳞癌细胞（HSC-3）中DCN基因的表达，使用裸鼠作为OSCC疾病模型构建载体，建立OSCC裸鼠荷瘤模型。H-E法确定各组裸鼠荷瘤组织的病理分级，免疫组织化学染色检测DCN过表达后各组裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21蛋白的表达差异，RT-qPCR及Western印迹定量检测DCN过表达后各组裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21在转录水平和蛋白水平上的表达差异，明确DCN过表达对OSCC裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21表达的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果：H-E染色结果显示，OSCC动物疾病模型构建成功
4、。重量分析结果显示，质粒组裸鼠荷瘤组织轻于空载组和未转染组（P0.05）。IHC结果显示，DCN、EGFR、C-Myc和p21蛋白在各组裸鼠荷瘤组织中均有表达，质粒组中DCN、EGFR和C-Myc蛋白的表达水平差异有统计学意义（P0.05）。RT-qPCR和Western印迹结果显示，DCN、EGFR、C-Myc和p21在各组裸鼠荷瘤组织中均有不同程度表达（P0.05）。结论：上调DCN可抑制OSCC裸鼠荷瘤的生长。在OSCC裸鼠荷瘤组织中，DCN过表达下调EGFR及C-Myc的表达，上调p21的表达。DCN可能通过以上机制调节OSCC的发生、发展，发挥抑癌作用。关键词饰胶蛋白聚糖；口腔鳞癌；
5、表皮生长因子受体；骨髓细胞瘤病毒癌基因；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂中图分类号 R739.8文献标志码 ADOI:10.19439/j.sjos.2023.01.008Effect of up-regulation of Decorin on expression of EGFR,C-Myc and p21 in nude mice with oral squamous cellcarcinomaGUO Meng-yao1,2,LI Kai-yu1,2,NIE Min-hai1,2,LIU Xu-qian1,2.(1.Department of Periodontal Mucosal Dis-
6、eases,the Affiliated Stomatological Hospital of Southwest Medical University.Luzhou 646000;2.Oral&Maxillofacial Re-construction and Regeneration of Luzhou Key Laboratory,Institute of Stomatology,Southwest Medical University.Luzhou646000,Sichuan Province,China)Abstract PURPOSE:To explore the effect o
7、f overexpression of DCN（decorin）gene on the expression of epidermalgrowth factor receptor(EGFR),cellular-myelocytomatosis viral oncogene(C-Myc)and cyclin dependent kinase inhibitor(p21)in tumor-bearing nude mice with oral squamous cell carcinoma（OSCC）.METHODS:The expression of DCN genein human oral
8、squamous cell carcinoma(HSC-3)was up-regulated by liposome transfection.Nude mice were used as thecarrier of OSCC.H-E staining was used to determine the pathological grade of tumor-bearing tissues in each group.Im-munohistochemistry was used to detect the expression of EGFR,C-Myc and p21 protein in
9、tumor-bearing tissues of eachgroup after DCN overexpression.RT-qPCR and Western blot were used to quantitatively detect the expression of EGFR,上海口腔医学2023年2月 第32卷第1期Shanghai Journal of Stomatology Vol32 No1 February,202340C-Myc and p21 in tumor-bearing tissues of each group after DCN overexpression,a
10、nd to determine the effects of DCNoverexpression on the expression of EGFR,C-Myc and p21 in tumor-bearing tissues of OSCC nude mice.SPSS 20.0 soft-ware package was used for statistical analysis.RESULTS:H-E staining showed that the animal model of OSCC was suc-cessfully constructed.The tumor-bearing
11、tissues of nude mice in the plasmid group were significantly lighter than those inthe empty vector group and non-transfected group(P0.05).IHC results showed that DCN,EGFR,C-Myc and p21 proteinswere expressed in the tumor-bearing tissues of nude mice in each group,the expression of DCN,EGFR and C-Myc
12、 pro-teins in the plasmid group was significantly different from the other groups(P0.05).RT-qPCR and Western blot results showed that DCN,EGFR,C-Myc andp21 were expressed in diffrent degrees in tumor-bearing tissues of nude mice（P0.05）.CONCLUSIONS:DCN can in-hibit the growth of tumor in OSCC nude mi
13、ce.In tumor-bearing tissues of nude mice with OSCC,overexpression of DCNcan down-regulate the expression of EGFR and C-Myc,and up-regulate the expression of p21.DCN may play an inhibito-ry role in the occurrence and development of OSCC.Key words Decorin;Oral squamous cell carcinoma;Epidermal growth
14、factor receptor;Cellular-myelocytomatosis viraloncogene;Cyclin dependent kinase inhibitorShanghai J Stomatol,2023,32(1):40-46.口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是来源于上皮组织的肿瘤，也是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，占口腔恶性肿瘤的80%以上1。OSCC早期通常无明显症状，易被忽略，部分患者会出现红色、白色或红白相间的病损。临床上OSCC多呈现为菜花状或疣状外观，也可形成深、大溃疡，癌症晚期可出现疼痛、口腔异味、开口受限、吞咽
15、咀嚼困难、出血和体重下降等症状。目前，OSCC早期以手术治疗为主，癌症后期，单纯手术治疗效果不佳，需联合放、化疗，且某些特殊部位（如舌后部、磨牙后区、口底和软腭）因淋巴结转移率较高，术后5年生存率较低，约为20%40%2。虽然近年来OSCC的治疗方法不断完善，但由于其早期症状不明显，不易做到早发现、早诊断，且由于OSCC在早期易发生淋巴结转移，故易复发，所以对OSCC的研究需追本溯源，明确其发病及调节机制。饰胶蛋白聚糖（decorin，DCN）又称核心蛋白聚糖，因其修饰胶原纤维的特性而得名。DCN是细胞外基质的重要组成部分，是富含亮氨酸小分子蛋白多糖（small leucine-rich pr
16、oteoglycans，SLRP）家族中最具特征性的家族成员。研究3表明，DCN有抗纤维化、抗癌、抗炎和调节血管生成等作用。目前以DCN为靶点的靶向药物治疗已成为癌症治疗研究领域的一大热点，已证实DCN可直接或间接调控癌细胞增殖、凋亡、侵袭、转移和血管生成等过程来发挥抑癌作用3-5。表皮生长因子受体（epidermal growth factor re-ceptor，EGFR）属于型受体酪氨酸激酶（receptorstyrosine kinase，RTKs）家族，是一种跨膜糖蛋白6。研究7-9表明，在多种肿瘤中均可发现EGFR表达升高现象。具体调节机制为EGFR与配体结合，激活下游PI3K/AKT、Ras/Raf、JAK2/STAT3等信号通路，最终调节肿瘤细胞的增殖、侵袭及凋亡等过程10-12。研究13-14提示，在癌症的早期诊断、肿瘤恶性程度判定、术后复发及预后评估方面，EGFR表达水平的检测有一定的指导意义。骨 髓 细 胞 瘤 病 毒 癌 基 因（cellular-myelocy-tomatosis viral oncogene，C-Myc）是原癌基因Myc家族中的一员。研究15
