1、贵州医药2 0 2 3年8 月第47 卷第8 期:1179论著HIV-1免疫印迹试验不确定/阴性样本病毒载量检测结果分析李梅1袁薇1.2杨敬源1刘勇?（1.贵州医科大学，贵州贵阳550 0 2 5；2.贵州省临床检验中心，贵州贵阳550 0 0 2）摘，要目的分析HIV-1核酸定量试验对HIV-1抗体不确定/阴性结果的诊断价值，为及时诊断HIV感染提供参考依据。方法收集贵州省2 个市（州）2 0 2 1年1月一5月HIV初筛抗体有反应性样本进行免疫印迹试验（WB)，WB检测结果为HIV-1抗体不确定/阴性的样本进行VL试验，并对不确定样本随访追踪，随访追踪到WB结果依旧为不确定的样本再次进行V
2、L检测，同时对TMT试剂WB结果呈阴性、VL5000 copies/mL样本采用麦克莱金HIV抗体确诊检测试剂进行试验，将结果纳入统计分析。结果1440 例初筛有反应性样本经WB诊断HIV-1抗体阳性1142 例、阴性159 例、不确定139 例。男性WB抗体阳性确证率高于女性,2 5岁以下人群阳性确诊率低于其他年龄人群，阴性率显著高于年龄人群。139例不确定样本经VL检测后VL5000copies/mL有36例、VL 50 0 0.c o p-ies/mL样本在50 岁及以上男性占比较高。WB不确定样本p24是主要带型。159 例WB阴性样本经VL检测有6例（3.8%）VL5000copie
3、s/mL、未检出153例（96.2%）。139例WB不确定样本追踪到2 2 例，最终10 例转阳，6例转阴，6 例结合VL检测值综合判定为阴性，VL和WB二者诊断结果具有一致性。结论WB出现抗体不确定/阴性时应立即联合HIV-1核酸定量检测，避免WB检测技术窗口期造成漏诊。关键词免疫印迹试验；病毒载量；抗体不确定/阴性Analysis of viral load test results of HIV-1 western blotting tests in uncertain/negative samplesLi Mei,Yuan Weil.2,Yang Jingyuan,Liu Yong:1
4、.Guizhou Medical University,Guiyang 550025,Guizhou,China;2.Guizhou Clinical Laboratory Center.Guiyang 550002,Guizhou,China.Abstract Objective To analyze the diagnostic value of HIV-i nucleic acid quantitative test(VL)in the uncer-tain/negative results of HIV-1 antibody,and provide a reference basis
5、for the detection of HIV infection.MethodsThe reactive samples of HIV primary screening antibody in two cities and prefectures of Guizhou Province from Jan-uary to May 202i were collected for western blot test(WB).The samples with uncertain/negative WB test resultswere subjected to VL test,and the u
6、ncertain samples were followed up.The samples with uncertain WB results werefollowed up for VL test again,and at the same time,samples with negative WB result of TMT reagent and VL5ooo copies/ml were tested with microgen HIV antibody diagnostic test reagent,and the results were included in sta-tisti
7、cal analysis.Result 1440 primary screening reactive samples were diagnosed as HIV-1 antibody positive in 1142cases,negative in 159 cases and uncertain in 139 cases by WB.The positive confirmation rate of WB antibody in menwas higher than that in women,the positive confirmation rate of people under t
8、he age of 25 was lower than that inother age groups,and the negative rate was significantly higher than that in age groups.After VL detection of 139uncertain samples,there were 36 cases with VL5000 copies/ml,1 case with VL 5000 copies/ml were mainly found in men aged 50 and over.WB uncertain sample
9、p24 was the main band type.Among159 WB negative samples,6 cases that account for 3.8%had VL5000 copies/ml and 153 cases that account for96.2%were not detected.In 139 cases of WB uncertain samples,22 cases were traced,and finally 10 cases turnedpositive,6 cases turned negative,and 6 cases were judged
10、 to be negative combined with VL test value.The diagnosticresults of VL and WB were consistent.Conclusion WB antibody is uncertain/negative,HIV-1 nucleic acid quantitativedetection should be combined immediately to avoid missed diagnosis caused by WB detection technology window.KeywordsWestern blot;
11、中图分类号：R512.91免疫印迹蛋白法（westernblot，WB)是诊断艾滋病感染的确证试验之二i，但由于急性期/早期HIV感染者处于窗口期其体内抗体滴度较低、晚期艾滋病患者消耗了大量抗体、老年人免疫失衡产生交叉性抗体等原因 2-3，容易出现抗体不确定的结果，导致WB不确定样本的感染者诊断被延迟。病毒载量（Viral Load，V L)试验具有高灵敏性和高特异性，检测结果窗口期短于WB,适用于初筛有反应性，WB抗体不确定/无特异性条带及流行病学史有意义的样本检测，其结果已经被作为HIV感染的诊断依据之二。本研究对HIV-1抗体不确定/阴性样本补充VL检测，为及时诊断HIV感染提供参考。报
12、告如下。1资料与方法1.1一般资料选择2 0 2 1年1月一5月贵州省2 个市（州）初筛实验室抗体筛查有反应性的血清样本，经贵州省临床检验中心艾滋病确证实验室进行WB,诊断为HIV-1抗体不确基金项目：贵州省卫健委科技基金项目（gzwjkj2020-1-198）通信作者，E-Viral load;文献标识码：AAntibody uncertainty/negative文章编号：10 0 0-7 44X（2 0 2 3)0 8-117 9-0 3定样本进行HIV-1核酸定量实验检测，并收集样本个案信息，包括年龄，性别等。本研究通过贵州省临床检验中心伦理委员会批准（编号：2 0 2 10 0 1）
13、。1.2研究方法1.2.1HIV-1抗体补充试验免疫印迹蛋白法（WB)：仪器为瑞士TeCan免疫印迹仪、德国CYblot蛋白印迹仪、英国BeeBlot48全自动免疫印迹仪。试剂盒来源于上海英曼泰（I M T）生物技术有限公司和德国麦克莱金公司生产的人类免疫缺陷病毒（HIV1十2 型）抗体确证试剂。1.2.2HIV-1VL检测使用StreamSP96全自动核酸提取仪和ABI7500扩增仪，人类免疫缺陷病毒（HIV1十2 型）核酸提取试剂和扩增试剂均来源于中山大学达安基因股份有限公司。1.2.3结果判定实验结果按照全国艾滋病检测技术规范（2 0 2 0 年修订版）和试剂盒说明书进行判定，实验过程严
14、格遵守标准操作程序进行，每批次VL试验均进行室内质量控制，定期参加国家临床检验中心室间质评，结果合格。（1)IMT试剂结果判定：阴性：无病毒特异性条带出现；阳性：有以下两个或更多的条带显著存在：gp160/gp120、g p 41、p24,其他的HIV-1蛋白条带可能出现也可能不出现；不.1180确定：既不符合阳性条带模式，又不符合阴性条带模式标准的任意条带。（2)麦克莱金试剂结果判定：阴性：无检测线临界值、gp120或/和gp105临界值；阳性：同种HIV类型的两个ENV检测线临界值（gp120+gp41或者gp105十gp36）、1个ENV检测线（仅gp41或者gp36）和至少1个GAG检
15、测线（p24、p 17)或1个POL检测线（p31、p 51)临界值；不确定：根据条带结果无法做出阴性或者阳性的判断。（3)VL最低检测线为2 50 copies/mL。V L 50 0 0 c o p-ies/mL即可判断为HIV感染、低于检测下限和未检出不能排除HIV感染。1.3统计学方法使用Excel2016对数据整理和输入，实验结果用SPSS20.0进行统计学分析。检验水准=0.05，单侧检验，定性资料使用x检验和Fisher确切概率法，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1WB检测结果分析1440 例HIV初筛有反应性的样本经过WB检测,HIV抗体阳性1142 例、阴性159 例
16、、不确定139 例。从性别分布来看，男性初筛阳性有9 53例，WB确诊阳性率8 5.4%（8 14/9 53）；女性初筛阳性48 7 例，WB阳性率为6 6.7%（32 5/48 7）。根据样本信息将年龄分为4组，从年龄分布来看，WB确证阳性的感染者年龄在48 7 岁之间，507 5岁之间检测出HIV感染人数最多，2 550 岁年龄组之间次之，小于2 5岁和大于7 5岁HIV感染者较少，分别只有53例和7 6 例。2 5岁年龄组WB确证阳性率为52.0%低于其他组，但阴性率确明显高于其余各年龄组，差异有统计学意义（x=25.9,P0.01)。见表1。表1不同性别、年龄段初筛阳性样本的WB确证情况性别初筛阳性数(n=1440),阳性数阳性率阴性数阴性率不确定数不确定(n=1142)（%）(n=159)（%）(n=139)率(%)男953女487年龄/岁2510225-5054550-7569576982.2139例HIV-1抗体不确定带型及VL值分布情况139例不确定样本带型以p24占50.4%（7 0/139）、p17占14.4%（2 0/139）、p 2 4+p 17 占12.2%（
