1、作者简介:刘静兰,硕士,主管药师。研究方向:药物分析。E-m a i l:l a n j i n g l i u 0 6 2 21 6 3.c o m作者单位:3 6 1 0 1 2 福建厦门,厦门市食品药品质量检验研究院H P L C法测定醋酸奥曲肽中醋酸和三氟乙酸的含量刘静兰 摘 要 目的 建立高效液相色谱法同时测定醋酸奥曲肽原料药中醋酸和三氟乙酸的含量。方法 色谱柱为YMC-P a c k O D S-AQ(4.6 mm2 5 0 mm,5 m),流动相A为磷酸溶液(取磷酸7 m l加水稀释至1 0 0 0 m l,混匀,用氢氧化铵溶液调节p H至3.0,再加入甲醇1 0 m l,混匀)
2、,流动相B为甲醇,梯度洗脱,流速:1.0 m lm i n-1,检测波长:2 1 0 n m,柱温:2 5。结果 醋酸和三氟乙酸分别在1 0.0 9 21 0 0 9.2 0 0 gm l-1(r=1.0 0 0 0)、0.4 9 64 9.5 7 0 gm l-1(r=0.9 9 9 9)范围内线性关系良好,定量限分别为3 0.9、1 6.6 n g,检测限分别为1 0.9、7.0 n g,平均回收率分别为9 9.7 8%、9 9.5 6%(n=9),R S D分别为0.3 6%、0.4 1%。结论 该方法准确性高、专属性强、耐用性好,适用于测定醋酸奥曲肽中醋酸和三氟乙酸的含量。关键词 醋酸
3、奥曲肽;醋酸;三氟乙酸;高效液相色谱法 中图分类号 R 9 1 7 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 8-9 9 2 6(2 0 2 3)4-0 3 2 9-0 4 D O I 1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 8-9 9 2 6.2 0 2 3.0 4.0 1 2D e t e r m i n a t i o n o f A c e t i c A c i d a n d T r i f l u o r o a c e t i c A c i d i n O c t r e o t i d e A c e t a t e b y H P L CL I U J i n
4、 g-l a nX i a m e n I n s t i t u t e f o r F o o d a n d D r u g C o n t r o l,X i a m e n 3 6 1 0 1 2,C h i n a A b s t r a c t O b j e c t i v e T o e s t a b l i s h a n H P L C m e t h o d f o r s i m u l t a n e o u s d e t e r m i n a t i o n o f a c e t i c a c i d a n d t r i f l u o r o a
5、c e t i c a c i d i n o c t r e o t i d e a c e t a t e.M e t h o d s T h e H P L C g r a d i e n t e l u t i o n m e t h o d w a s u s e d o n a YMC-P a c k O D S-AQ c o l u m n(4.6 mm2 5 0 mm,5 m)w i t h p h o s p h a t e a c i d s o l u t i o n(7 m l o f p h o s p h a t e a c i d w a s d i l u t
6、e d w i t h w a t e r t o 1 0 0 0 m l,m i x e d,a n d p H w a s a d j u s t e d t o 3.0 w i t h a mm o n i u m h y d r o x i d e s o l u t i o n b e f o r e 1 0 m l o f m e t h a n o l w a s a d d e d a n d m i x e d)a s m o b i l e p h a s e A,a n d m e t h a n o l a s m o b i l e p h a s e B a t a
7、 f l o w r a t e o f 1.0 m lm i n-1.T h e d e t e c t i o n w a v e l e n g t h w a s 2 1 0 n m a n d t h e c o l u m n t e m p e r a t u r e w a s 2 5.R e s u l t s T h e l i n e a r r a n g e s o f a c e t i c a c i d a n d t r i f l u o r o a c e t i c a c i d w e r e 1 0.0 9 2-1 0 0 9.2 0 0 gm l
8、-1(r=1.0 0 0 0)a n d 0.4 9 6-4 9.5 7 0 gm l-1(r=0.9 9 9 9),r e s p e c t i v e l y.T h e l i m i t s o f q u a n t i t a t i o n w e r e 3 0.9 n g a n d 1 6.6 n g r e s p e c t i v e l y,w h i l e t h o s e o f d e t e c t i o n w e r e 1 0.9 a n d 7.0 n g,r e s p e c t i v e l y.T h e a v e r a g e
9、 r e c o v e r i e s(n=9)w e r e 9 9.7 8%a n d 9 9.5 6%,a n d t h e R S D s w e r e 0.3 6%a n d 0.4 1%,r e s p e c t i v e-l y.C o n c l u s i o n T h i s m e t h o d i s a c c u r a t e,s p e c i f i c a n d d u r a b l e,w h i c h c a n b e u s e d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f a c e t
10、 i c a c i d a n d t r i f l u o r o a c e t i c a c i d i n o c t r e o t i d e a c e t a t e.K e y w o r d s o c t r e o t i d e a c e t a t e;a c e t i c a c i d;t r i f l u o r o a c e t i c a c i d;H P L C 醋酸奥曲肽是一种人工合成的八肽类长效生长抑素类似物1,其临床应用广泛,是治疗肢端肥大症的一线药物2,对肝硬化、急性胰腺炎、上消化道出血等多种疾病和肿瘤疗效确切,安全性和耐受性良好
11、3。查阅相关文献4-7,工业上生产醋酸奥曲肽原料药 主 要 采 用9-芴 甲 氧 羰 基(9-f l u o r e n y l m e t h y l-o x y c a r b o n y l,F m o c)固相合成策略的方法8,在合成过程中均采用了三氟乙酸和醋酸。残留溶剂的控制是一项衡量药品质量安全的重要指标。目前,醋酸奥曲肽的质量标准在 中国药典2 0 2 0年版9、U S P 2 0 2 31 0、E P 1 1.01 1以及B P 2 0 2 31 2均有收录。其中,各 国 药 典 对 醋 酸 的 含 量 均 有 具 体 规 定,仅U S P规定三氟乙酸的限量不得过0.2 5%。
12、因此,本试验进一步改进和优化 中国药典 方法,并进行方法学的研究,采用高效液相色谱法同时测定醋酸奥曲肽原料药中醋酸和三氟乙酸的含量。1 材料1.1 仪 器 W a t e r s e 2 6 9 5高 效 液 相 色 谱 仪,配P D A 2 9 9 8检测器(美国沃特世公司);X S-1 0 5分析天平(梅特勒-托利多有限公司);S 2 2 0 p H计(梅特勒-托利多有限公司)。923 解放军药学学报2 0 2 3年8月2 5日 第3 6卷 第4期 P h a r m J C h i n P L A,V o l.3 6,N o.4,A u g 2 5,2 0 2 3 1.2 试药 醋酸奥曲
13、肽原料药(A厂,批号:5 0-1 9-0 0 4 4-0 1、5 0-1 9-0 0 5 0-0 1、5 0-2 0-0 0 5 0-0 1、B厂,批 号:P P L I-O T 1 7 0 7 0 2、P P L I-O T 1 7 0 9 0 3、P P L I-O T 1 7 1 0 0 4);醋酸 奥 曲 肽 对 照 品(U S P,批 号:R 0 2 1 U 0,纯 度1 0 0.0%);醋酸(U S P,批号:R 0 3 8 A 0,纯度9 9.9%);三氟乙酸(a l a d d i n,批号:D 2 1 2 2 3 1 9,纯度9 9.5%);乙腈、甲醇为色谱纯(德国默克公司)
14、;磷酸、氢氧化铵和氢氧化钠为分析纯(国药集团化学试剂有限公司);水由M i l l i-Q系统制备的超纯水。2 方法与结果2.1 色 谱 条 件 色 谱 柱:YM C-P a c k O D S-A Q(4.6 mm 2 5 0 mm,5 m);流动相A:磷酸溶液(取磷酸7 m l加水稀释至1 0 0 0 m l,混匀,用氢氧化铵溶液调节p H至3.0,再加入甲醇1 0 m l,混匀),流动相B:甲醇;流速:1.0 m lm i n-1;检测波长:2 1 0 n m;柱温:2 5;进样体积:2 0 l,按表1进行梯度洗脱。表1 流动相梯度洗脱程序时间/m i n流动相A/%流动相B/%01 0
15、 0061 0 0073 07 01 43 07 01 51 0 002 51 0 002.2 溶液制备(1)供试品溶液 取醋酸奥曲肽2 0 m g,精密称定,置5 m l量瓶中,加流动相A溶解并稀释至刻度,摇匀。(2)醋酸对照品储备液 取流动相A适量置于1 0 0 m l量瓶中,精密量取醋 酸 对 照 品9 5 0 l(约1.0 g),立即加流动相A溶解并定量稀释制成每1 m l中约含1 0 m g的储备液。(3)三氟乙酸对照品储备液 取流动相A适量置于1 0 0 m l量 瓶 中,精 密 量 取 三 氟 乙 酸 对 照 品3 3 5 l(约0.5 g),立即加流动相A溶解并定量稀释至刻度,
16、摇匀。再精密量取5 m l至5 0 m l量瓶中,制成每1 m l中约含0.5 m g的储备液。(4)混合对照品溶液 精密量取醋酸和三氟乙酸对照品储备液各2.0 m l,置于1 0 0 m l量瓶中,加流动相A溶解并定量稀释至刻度,制成每1 m l中约含醋酸0.2 m g和三氟乙酸0.0 1 m g的溶液。(5)系统适用性溶液 精密量取醋酸和三氟乙酸对照品储备液各2 m l和5 m l,置于1 0 0 m l量瓶中,加流动相A溶解并定量稀释至刻度,制成每1 m l中约含醋酸0.2 m g和三氟乙酸0.0 2 5 m g的溶液。2.3 测定法 精密量取供试品溶液与对照品溶液各2 0 l,分别注入高效液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积分别计算,含醋酸应为5.0%1 2.0%,含三氟乙酸不得过0.2 5%。2.4 系统适用性试验 精密量取系统适用性溶液2 0 l,照2.1项下色谱条件,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,见图1。三氟乙酸和醋酸的拖尾因子分别为1.1 8和1.1 7,理论板数分别为1 0 1 2 7和1 2 5 8 4,分离度分别为7.9和5.6。1.三氟乙酸;2.醋酸。图1
