1、第 51 卷第 9 期2023 年 5 月广 州 化 工Guangzhou Chemical IndustryVol.51 No.9May.2023HPLC 同时测定 2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐和2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐王 莉,曾浩洋(邵阳市食品药品检验所,湖南 邵阳 422000)摘 要:建立了同时测定 2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐和 2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐的高效液相色谱方法。样品经用甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液(含亚硫酸氢钠 2 g/L)(1 1)作为流动相,采用 C18色谱柱进行分离,以甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液(13 87)为流动相进行洗脱,检
2、测波长 240 nm,流速 1.0 mL/min,柱温 30,结果表明两种染发剂色谱峰分离良好,两种染发剂标准曲线线性系数为 0.999,低、中、高三种水平的加标回收率为 98.6%105.5%,相对标准偏差为 0.9%2.3%。该方法简便快速,可用于两种染料的同时测定。关键词:化妆品;染料;高效液相色谱法中图分类号:TQ658.3+4 文献标志码:A文章编号:1001-9677(2023)09-0091-03 第一作者:王莉(1987-),女,研究生,主管药师,主要从事药品及化妆品检测。通讯作者:曾浩洋(1986-),男,研究生,工程师,主要从事药品检测。Determination of 2
3、,4-diaminophenoxy Ethyl Alcohol Hydrochloride and2-amino-4-hydroxyethyl Amino Anisyl Ether Sulfateby HPLCWANG Li,ZENG Hao-yang(Shaoyang Institute For Food and Drug Control,Hunan Shaoyang 422000,China)Abstract:A high performance liquid chromatograph method for the simultaneous determination of 2,4-di
4、aminophenoxy ethyl alcohol hydrochloride and 2-amino-4-hydroxyethyl amino anisyl ether sulfate was established.Thesample was extracted and separated with methanol-5 mmol/l ammonium acetate solution(containing 2 g/L sodiumbisulfite)(1 1),then separated with C18column and eluted with methanol-5 mmol/L
5、 ammonium acetate solution(13 87)as mobile phase,under the conditions of detection wavelength of 240 nm,flow rate of 1.0 mL/min and columntemperature of 30.The result showed that the chromatographic peaks of two hair dyes were well separated,the linearcoefficients of the standard curves of the two h
6、air dyes were 0.999,the recoveries of the low,middle and high levels were98.6%105.5%,and the relative standard deviation was 0.9%2.3%.The method was simple and rapid,and couldbe used for simultaneous determination of two dyes.Key words:cosmetics;dyes;HPLC随着人们生活水平的不断提高,染发已成为现在流行的新时尚,染发类化妆品在我国属于特殊用途化妆
7、品。染发剂的危害主要来自染发原料,如果长期使用,会对人体健康造成一种或多种急慢性伤害1-4,因此,加强对染发剂的日常管理与监督具有重要意义。染发产品中有 75 种染发剂是中国 化妆品安全技术规范(2015 年版)中允许使用的,对于它们的使用浓度、限制使用条件等都做了明确的规定,并推荐使用了相应的检测方法用来监管 32 种染发剂成分。研究文献也报道了部分染发剂的含量测定方法5-6,但尚未覆盖染发剂准用列表中收录的全部染发剂。在日常监管中发现有厂家添加了某种在32 种考察范围之外的染发剂,而与结构、性质相近的物质混用。2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐和 2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐二者在紫外吸
8、收特性上相似,且在色谱上很难分离,容易混淆导致实验结果出现偏差。本文通过优化色谱方法建立了同时测定2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐和2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐的高效液相色谱方法。以期为再出现类似争议时,为监管部门市场监督提供技术依据,更好地保障消费者的健康。1 实 验1.1 仪器与试剂亚硫酸氢钠(AR)、乙酸铵(GR),上海阿拉丁生化科技股份有限公司;甲醇(色谱纯),默克公司;所用水均为超纯水(电阻率不小于 18.3 M cm);2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐、2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐,北京曼哈格生物科技有限公司电子天平,梅特勒-托利多;离心机,湘仪离心机;涡旋混合仪,方科仪器
9、有限公司;高效液相色谱仪,美国赛默飞。1.2 溶液的制备提取溶液:甲醇-5 mmol/L 乙酸铵(含亚硫酸氢钠 2 g/L)(1 1)。对照品溶液:精密称取2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐和 2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐对照品适量,分别置于 10 mL量瓶中,加提取溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准储备92 广 州 化 工2023 年 5 月溶液(标准储备溶液质量浓度约为 1 g/L)标准储备溶液保存于0 4 冰箱中,应于 3 天内使用。样品溶液:参考 化妆品安全技术规范(2015 年版)及文献7,称取样品0.5 g 于10 mL 具塞比色管中,加入提取溶液 3 mL,涡旋混合均匀,用提
10、取溶液稀释至刻度,摇匀,冰浴超声提取 20 min,经 0.45 m 滤膜过滤,滤液于 2 h 内进行分析(如有必要,可取处理后的样品溶液适当稀释至所需的质量浓度)。1.3 液相条件色谱柱:Acclaim C18(250 mm 4.6 mm,5 m);流动相:甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液洗脱(13 87);检测波长:240 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:10 L;柱温:30。2 色谱条件的建立2.1 波长的选择图 1 两种染发剂的光谱图Fig.1 Spectra of two hair dyes 对两种染料进行波长全扫描,两种染料光谱图很接近,选择波长为 240 nm。见光谱
11、图 1。2.2 色谱柱的选择考察了 Supelco Amide C16和 Acclaim C18(250 mm4.6 mm,5 m)两种色谱柱。结果表明,采用前一种色谱柱 2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐和 2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐无法达到基线分离;故采用第二种更为通用的色谱柱进行优化,两种染料能达到基线分离,且峰型良好,故选择 Acclaim C18(250 mm4.6 mm,5 m)色谱柱进行实验。2.3 流动相的选择考察了甲醇-磷酸盐溶液(pH 6.0)(安全技术规范 2015 年版)、甲醇-0.1%(V/V)磷酸溶液、甲醇-0.1%(V/V)甲酸溶液、甲醇-5 mmol/L 乙
12、酸铵溶液 4 种流动相系统。结果表明,采用第一种流动相,两种染料无法达到基线分离;第二种和第三种流动相两种染料出峰过早;采用第四种流动相,两种染料分离效果好,且出峰时间适中,故选择甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液作为流动相。2.4 提取溶剂的选择考察了参考相关文献 7-10报道,考察了甲醇-1%(V/V)甲酸溶液(1 1)、甲醇-1%(V/V)乙酸溶液(1 1)、甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液(1 1)、甲醇-1%(V/V)磷酸溶液(1 1)4 种提取溶剂,结果表明,采用四种提取溶剂提取效率无显著性差异。因文献报道部分染料稳定性较差,故考察了未添加亚硫酸氢钠与添加了亚硫酸氢钠的两种染料标
13、准溶液的稳定性。见表 1,结果表明两种染料都不稳定,故加入亚硫酸氢钠作为抗氧剂。考虑到流动相为甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液,故选择甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液(含亚硫酸氢钠 2 g/L)(1 1)作为提取溶剂。表 1 未添加亚硫酸氢钠与添加亚硫酸氢钠的稳定性结果Table 1 Stability results without and with sodium bisulfite组分标准溶液含量/%0 h1 h4 h10 h未添加抗氧剂2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐1009962462-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐100975632添加抗氧剂2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐10010
14、099992-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐1001009998 注:假设 0 h 的含量为 100%。3 结 果3.1 线性与范围表 2 两种染料的线性关系Table 2 Linear relationship between two dyes2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐配置浓度/(mgL-1)峰面积相关系数R2配置浓度/(mgL-1)峰面积相关系数R28.022078.3020.053780.4440.107578.5680.2018023.36200.5044301.52401.0090125.430.9999.222320.5123.054361.5
15、646.109012.0492.2022419.63230.5053129.23461.00108486.500.999分别以两种染发剂的峰面积 Y 为纵坐标、待测组分的质量浓度 X 为横坐标,绘制基质空白标准工作曲线,经线性回归后求得相关系数,结果如表 2 所示。结果表明各待测组分在表 2 所列的质量浓度范围内呈线性关系。3.2 检出限按信噪比为 3(S/N=3)计算检出限,信噪比为 10(S/N=10)计算最低定量限,结果见表 3,质量浓度约为 8 mgL-1的2 种限用染料混合标准溶液色谱图见图 3。表 3 两种组分的检出限Table 3 Detection limits of two
16、components染发剂检出浓度/(mgL-1)定量浓度/(mgL-1)检出限/(mgkg-1)定量限/(mgkg-1)2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐0.270.915.418.22-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐0.501.671033.4第 51 卷第 9 期王莉,等:HPLC 同时测定 2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐和 2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐93 图 3 两种染发剂的液相色谱图Fig.3 Liquid chromatograms of two hair dyes3.3 回收率与精密度取均未检出两种限用染料的基质样品,分别加入低、中、高 3 个水平的混合标准溶液,每个添加水平平行测定 6 份,按1.2 项下制备样品溶液,按 1.3 项下色谱条件进样分析,两种限用染料平均回收率为 98.7%105.5%,RSD 为 0.9%2.3%,结果见表 4。表 4 两种染料的回收率及标准偏差(RSD)Table 4 Recovery and standard deviation(RSD)of two dyes染发剂添加水平/(mgL-1)回收率/%RSD/%2,4-二氨基苯氧基乙
