1、第 44 卷第 6 期 2023 年 6 月安徽医学Anhui Medical Journal左向右分流型先天性心脏病肺动脉高压患儿血清 miR-210 和miR-451 的表达及诊断价值马阳 庄艳华 玉山江 尼亚孜 马玉 李秋霞摘 要 目的探讨左向右分流型先天性心脏病（CHD）肺动脉高压（PAH）患儿血清微小核糖核酸（miR）-210和miR-451的表达及诊断价值。方法选取2020年1月至2022年1月乌鲁木齐市第一人民医院收治的114例CHD患儿，根据指南对PAH的诊断，将其分为CHD组（n=53）和CHD-PAH组（n=61）。收集并比较两组患儿一般资料、生化检查、肺动脉压参数以及外周
2、血miR-210和miR-451表达水平。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-210和miR-451在CHD-PAH中的诊断价值，Pearson相关分析miR-210、miR-451与尿素氮、不对称二甲基精氨酸和平均肺动脉压的相关性，多元logistic回归分析CHD-PAH的危险因素。结果CHD-PAH组患儿外周血miR-210和miR-451表达水平分别为（1.360.57）和（3.521.23），低于CHD组，差异均有统计学意义（P0.05）。ROC曲线分析结果显示，miR-210、miR-451和二者联合诊断的曲线下面积分别为0.737、0.725和0.840。Pearson相
3、关显示，CHD-PAH患儿外周血miR-210和miR-451水平与BNP、ADMA和mPAP呈负相关（P0.05）。多元logistic回归分析显示，miR-2101.12、miR-4512.52和PVR升高是CHD-PAH发病的危险因素。结论CHD-PAH患儿外周血miR-210和miR-451降低，miR-210和miR-451联合检测对CHD-PAH具有较高的诊断价值，miR-2101.12、miR-4512.52和PVR升高是CHD-PAH发病的危险因素。关键词 miR-210；miR-451；左向右分流型先天性心脏病；肺动脉高压doi:10.3969/j.issn.1000-039
4、9.2023.06.022先天性心脏病（congenital heart disease，CHD）是常见的出生缺陷，在我国发病率约为 2.91，肺动脉高压（pulmonaryarterial hypertension，PAH）是左向右分流型 CHD 常见和致命的副作用之一，我国约 47.5%的先心病患儿患有 PAH2。CHD-PAH 早期没有典型的临床体征，因此寻找特异性诊断和治疗标志物至关重要。微小核糖核酸（MicroRNA，miR）是一类高度保守的内源性非蛋白编码 RNA 分子，在心血管疾病的发生发展中起着重要作用3。miR-210 是新发现的对心血管疾病具有多重保护作用的 miRNA，可
5、通过调节细胞凋亡保护心肌细胞免受缺血及再灌注损伤4。miR-451 可影响肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞的功能，在 PHA 患儿和缺氧诱导的 PAH 大鼠模型中均明显下降5。本研究旨在评估 miR-210 和 miR-451 在 CHD-PAH 患儿血清中的表达及其临床意义，为疾病的诊断和治疗寻找新的靶点和理论基础。1资料与方法1.1一般资料选取 2020 年 1 月至 2022 年 1 月乌鲁木齐市第一人民医院收治的 114 例左向右分流型CHD 患儿，根据指南6中对 PAH 的诊断，将其分为CHD 组（n=53）和 CHD-PAH 组（n=61）。纳入标准：年龄14 岁者；经常规检查、心脏听诊
6、和超声心动图确诊为左向右分流型 CHD7者；临床资料完整者。排除标准：其他病因引起的 PAH 者；合并恶性肿瘤或严重免疫系统疾病者；肝、肾等其他重要器官功能障碍者。所有患儿均接受超声心动图检查以确定左向右分流型 CHD 的类型，包括室间隔缺损（ventricular septal defect，VSD）、动脉导管未闭（patent ductus arteriosus，PDA）和房间隔缺损（atrial septal defect，ASD）。本研究经医院伦理委员会批准（伦理号：XJ20191137），患儿父母均在参与研究前获得书面知情同意。1.2实验方法1.2.1数据收集通过电子病例收集患儿性别
7、、年龄等一般临床资料，收集所有患儿清晨空腹静脉血，离心后取上层血清在-80冷冻保存。采用 DXC800 全自动生化分析仪（Beckman Coulter）测定血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglycerides，TG）、谷草转作者单位：830000 新疆乌鲁木齐 乌鲁木齐市第一人民医院内科（马阳，玉山江尼亚孜）832000 新疆石河子 石河子市人民医院神经内科（庄艳华）831300 新疆五家渠 五家渠市兵团第六师总医院检验科（马玉）830000 新疆乌鲁木齐 新疆生产建设兵团总医院手麻科（李秋霞）本文引用格式：马阳，庄艳华，玉山江 尼亚孜，等.左向右分
8、流型先天性心脏病肺动脉高压患儿血清miR-210和miR-451的表达及诊断价值 J.安徽医学，2023，44（6）：718-721.DOI：10.3969/j.issn.1000-0399.2023.06.022718第 44 卷第 6 期 2023 年6 月安徽医学Anhui Medical Journal氨酶（spartate aminotransferase，AST）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（serum creatinine，SCr）水平。采用酶联免疫吸附试验（enzyme
9、linked immunosorbent assay，ELISA）检测脑钠肽（brain natriuretic peptide，BNP）和不对 称 二 甲 基 精 氨 酸（asymmetric dimethylarginine，ADMA）水平。试剂盒均购自武汉 MSK 生物技术有限公司，操作严格按照试剂盒说明书进行。所有患儿均在基础麻醉下进行右心导管检查（right heart catheterization，RHC），测量平均肺动脉压（mean pulmonary artery pressure，mPAP）和肺毛细血管楔压（pulmonary capillary wedge pressur
10、e，PCWP），计算肺血管阻力（pulmonary vascular resistance，PVR）。PAH 诊 断 标 准6为PCWP15 mmHg，PVR3 WU，mPAP25 mmHg。1.2.2血清 miR-210 和 miR-451 表达检测使用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测血清 miR-210 和 miR-451 水平。收集患儿空腹静脉血，离心得上清液。向血清中加入 TRIzol 试剂提取总 RNA，通过紫外分光光度计检测 RNA 的纯度和浓度。严格按照试剂盒的说明，使用荧光定
11、量 PCR MasterMix（SYBR Green）对总 RNA进行逆转录。然后用 Prime Script RT Master Mix 试剂盒（Takara Bio）进行 PCR 扩增。扩增系统：10 LSYBR qPCR 混合物，0.8 L 正向和反向引物，2 L cDNA 产物，0.4 L 50 倍 ROX 参照染料，用双蒸水补至 20 L。PCR 反应条件：95预变性 35 s，94变性 30 s，60退火 40 s，72延伸 30 s，共 40 个循环。引物由 Sangon生物工程有限公司开发并合成，引物序列见表 1，GAPDH 作为内部参照，通过 2-Ct计算 miR-210 和
12、miR-451 的相对表达水平。1.3统计学方法应用 SPSS 24.0 软件对数据进行统计分析，符合正态分布的计量资料以-xs 表示，两组间均数比较采用 t 检验。偏态分布计量资料以 M（P25，P75）表示，使用 Mann-Whitney U 检验。计数资料以百分比表示，采用 2检验。使用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析 miR-210和 miR-451 在 CHD-PAH 中的诊断价值。使用 Pearson 相关分析 miR-210 和 miR-451 与 BNP、ADMA 和mPAP 的相关性，多元 logistic
13、回归分析进一步确定与CHD-PAH 相关的危险因素。以 P 3WU 对毛细血管前肺动脉高压的诊断具有重要意义20。综上所述，CHD-PAH 患儿外周血 miR-210、miR-451 降低，miR-210 和 miR-451 联合检测对 CHD-PAH具有较高的诊断价值，miR-2101.12、miR-4512.52 和 PVR 升高是 CHD-PAH 的危险因素。但本研究为单中心临床研究，样本量相对较小，还需要进一步的体内和体外研究。参考文献1 高漫辰,张凤文,潘湘斌.中国心血管健康与疾病报告2019 先天性心脏病部分解读J.中国胸心血管外科临床杂志,2021,28(4):384-387.2
14、 孙晔,杨蕊华.炎症因子与先天性心脏病患儿肺动脉高压关系的研究进展J.医学综述,2022,28(5):894-898.3 王婷霞.微小RNA在肺动脉高压发病中的作用研究进展J.国际儿科学杂志,2018,45(5):345-348.4 冯莉莉,王朝华,李贺,等.扩张型心肌病血清miR-210、2-MG及TGF-1水平的表达及其临床意义J.现代生物医学进展,2022,22(4):688-692,717.5 郭海旭,雷桅.microRNA在肺动脉高压进展中作用及机制的研究进展J.山东医药,2020,60(14):109-112.6 中华医学会小儿外科分会心脏学组,国家儿童医学中心心血管专科联盟.儿童
15、先天性心脏病相关性肺高压诊断与治疗指南J.中华小儿外科杂志,2022,43(11):966-980.7 GALIE N,HUMBERT M,VACHIERY J L,et al.2015 ESC/ERS Guidelines for the diagnosis and treatment of pulmonary hypertension:the joint task force for the diagnosis and treatment of pulmonary hypertension of the European Society of Cardiology(ESC)and the
16、European Respiratory Society(ERS):endorsed by:association for European Paediatric and Congenital Cardiology(AEPC),International Society for Heart and Lung Transplantation(ISHLT)J.Eur Respir J,2015,46(4):903-75.8 张卫芳,徐菲,陶泽颖,等.微小RNA在肺动脉高压PASMCs表型转化中的研究进展J.中国药理学通报,2022,38(4):506-511.9 潘婉,李伟,徐永君,等.先天性心脏
17、病患儿血清微小RNA-148b-3p 表达水平及临床意义J.陕西医学杂志,2022,51(3):334-337.10 JI D,QIAO Y,GUAN X,et al.Serum miR-204 and miR-451 expression and diagnostic value in patients with pulmonary artery hypertension triggered by congenital heart diseaseJ.Comput Math Methods Med,2022,2022:94-108.11 李淑芬,李乐雯,官碧琪,等.AECOPD合并肺动脉高压患
18、者动脉血气分析指标、BNP及 PCT、D-D变化J.湖南师范大学学报（医学版）,2022,19(3):105-108.12 NI G H,CHENG J F,LI Y J,et al.Effect of profilin-1 on the asymmetric dimethylarginine-induced vascular lesion-associated hypertensionJ.Kaohsiung J Med Sci,2022,38(2):149-156.13 HUANG H,WU F,YANG J,et al.Increasedplasma level of miR-210 as
19、 a potential diagnostic marker for chronic obstructive pulmonary disease induced pulmonary hypertensionJ.Clin Lab,2020,66(6):1147-1155.14 GHOLAMINEIAD A,ZARE N,DANA N,et al.A meta-analysis of microRNA expression profiling studies in heart failureJ.Heart Fail Rev,2021,26(4):997-1021.15 LV X W,HE Z F,
20、ZHU P P,et al.MiR-451-3p alleviates myocardial ischemia/reperfusion injury by inhibiting MAP1LC3B-mediated autophagyJ.Inflamm Res,2021,70(10-12):1089-1100.16 FENG L,YANG X,LIANG S,et al.Silica nanoparticles trigger the vascular endothelial dysfunction and prethrombotic state via miR-451 directly reg
21、ulating the IL6R signaling pathwayJ.Part Fibre Toxicol,2019,16(1):16-27.17 邸金,刘彩霞.先天性心脏病伴肺动脉高压患儿血清HIF-1和miR-210的动态变化及意义J.中国妇幼保健,2021,36(5):1066-1070.18 郭海旭,雷桅.microRNA在肺动脉高压进展中作用及机制的研究进展J.山东医药,2020,60(14):109-112.19 DENG J.Clinical application of pulmonary vascular resistance in patients with pulmonary arterial hypertensionJ.J Cardiothorac Surg,2021,16(1):3-11.20 RATWATTE S,ANDERSON J,STRANGE G,et al.Pulmonary arterial hypertension with below threshold pulmonary vascular resistanceJ.Eur Respir J,2020,56(1):190-204.（2022-12-19收稿）（本文编校：周雪春，张迪）721
