1、第 51 卷第 9 期2023 年 5 月广 州 化 工Guangzhou Chemical IndustryVol.51 No.9May.2023滇重楼化学成分研究()徐宏盼1,聂 伟2,陆礼和2,黄晓娟1,王红波1,万近福1,2(1 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室,云南 昆明 650500;2 云南省药物研究所,云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室,云南 昆明 650111)摘 要:采用硅胶柱色谱、凝胶色谱及高压制备色谱等方法对滇重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.根茎部位进行分离纯化
2、。共分离得到 10 个化合物,分别是棕榈酸(1),pinnatasterone(2),胸苷(3),20-hydroxyecdysone(4),腺嘌呤核苷(5),偏诺皂苷元-3-O-L-鼠李吡喃糖(12)-L-阿拉伯呋喃糖(14)-D-葡萄吡喃糖苷(6),bis(2-ethylhexyl)benzene-1,2-dicarboxylate(7),薯蓣皂苷(8),2-O-D-fructofuranosyl-D-allopyranose(9),n-tritetracontan-5-ol(10)。其中,化合物 9 为首次从该植物中分离得到,化合物 7,10 为首次从该植物属中分离得到。关键词:滇重楼;
3、化学成分;结构鉴定;n-tritetracontan-5-ol中图分类号:R284.2 文献标志码:A文章编号:1001-9677(2023)09-0063-03 第一作者:徐宏盼(1997-),女,硕士研究生,研究方向为天然药物化学。通讯作者:万近福(1965-),男,正高级工程师,研究方向为天然药物化学。Study on Chemical Constituents of Paris PolyphyllaSmith Var.yunnanensis()XU Hong-pan1,NIE Wei2,LU Li-he2,HUANG Xiao-juan1,WANG Hong-bo1,WAN Jin-f
4、u1,2(1 School of Pharmaceutical Science and Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products,KunmingMedical University,Yunnan Kunming 650500;2 Yunnan Institute of Materia Medica,Key Laboratory of TCM andEthnic Medicine Innovation and Manufacturing Enterprises in Yunnan Province,Yunnan Kunm
5、ing 650111,China)Abstract:To investigate the chemical constituents in the Rhizoma of Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.),ten compounds were separated and purified by silica gel,Sephadex LH-20 and preparative HPLC.Thestructures were identified.Ten flavonoids glyceride were isolated and id
6、entified as palmitic(1),pinnatasterone(2),Thymidine(3),20-hydroxyecdysone(4),adenosine(5),pennogenin-3-O-L-rhamnopyranosyl-(12)-L-arabinofuranosyl-(14)-D-glucopyranoside(6),bis(2-ethylhexyl)benzene-1,2-dicarboxylate(7),dioscin(8),2-O-D-fructofuranosyl-D-allopyranose(9),n-tritetracontan-5-ol(10).Comp
7、ound 9 was isolated fromthis plant for the first time and compounds 7 and 10 were isolated from Paris plants for the first time.Key words:Paris polyphylla Smith var.Yunnanensis;chemical constituent;structural elucidation;n-tritetracontan-5-ol滇重楼为百合科重楼属植物云南重楼 Paris polyphylla Smithvar.Yunnanensis(Fra
8、nch.)Hand.-Mazz.的干燥根茎,是 中国药典 2020 年版重楼的基原植物之一,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊功效,传统用法主要用于疔疮痈肿、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌扑伤痛、惊风抽搐1。药用历史久远,在 滇南本草 中以重楼命名,以根茎入药。滇重楼主产于西南地区,尤以云南为道地。重楼属植物繁殖率低,加之长期滥采滥挖,野生重楼资源严重枯竭2,随着张婉莹等3开发的重楼栽培技术,近些年开始了人工种植,人工种植技术日益成熟,云南种植面积已超过 10 万亩,资源问题得到解决,为重楼的深入研究、开发奠定了坚实的基础。目前根据报道的药理学研究发现,重楼在抗肿瘤、抑菌消炎、抗病毒、止血、止痛镇静、免
9、疫调节、保护心血管、肝肾保护等方面具有很好的活性4。重楼药材由于疗效确切,药用价值高,已广泛应用于“宫血宁胶囊”、“热毒清片”、“抗病毒颗粒”和“季德胜蛇药片”等常用中成药。化学成分研究发现,重楼中主要含有甾体类、黄酮类、多糖类和氨基酸类化学成分以及多种微量元素5。为更加全面的认识滇重楼根茎的化学成分,充分开发重楼资源。本研究针对重楼提取物大孔树脂划段 40%乙醇段进行研究,从中分离得到10 个化合物,分别是棕榈酸(1),pinnatasterone(2),胸苷(3),20-hydroxyecdysone(4),adenosine(5),偏诺皂苷元-3-O-L-鼠李吡喃糖(12)-L-阿拉伯呋
10、喃糖(14)-D-葡萄吡喃糖苷(6),bis(2-ethylhexyl)benzene-1,2-dicarboxylate(7),薯蓣皂苷(8),2-O-D-fructofuranosyl-D-allopyranose(9),n-tritetracontan-5-ol(10)。其中,化合物2-O-D-fructofuranosyl-D-allopyranose(9)为首次从滇重楼64 广 州 化 工2023 年 5 月植物中分离得到,化合物 bis(2-ethylhexyl)benzene-1,2-dicarboxylate(7)和化合物 n-tritetracontan-5-ol(10)为首
11、次从重楼属植物中分离得到。1 仪器与材料TQ-SH 型多功能提取罐,温州市神华轻工机械有限公司;100 KG/H WZ-单效外循环蒸发器,浙江金安制药机械有限公司;Bruker AVANCE NEO 600 MHz 核磁共振仪,德国 Bruker 公司;小型旋转蒸发仪,Heidolph;LC-2010A 制备液相色谱仪,日本岛津公司;Middle Chromatogram Isolated Gel,北京英莱克科技有 限 公 司;柱 色 谱 硅 胶,青 岛 海 洋 化 工 有 限 公 司;Sephadex LH-20,美国 GE 公司;薄层色谱硅胶 G 板和 GF254板,青岛海洋化工有限公司;
12、工业乙醇,耿马华临酒精有限公司;色谱乙腈,Merck;乙酸乙酯,珠海谦信新材料有限公司;甲醇,云南沪西大为焦化有限公司;二氯甲烷,广西田东锦亿科技有限公司;石油醚,淄博市临淄天德精细化工研究所;所有工业溶剂均为重蒸后使用。实验用滇重楼根茎由云南白药丽江种植基地提供,经云南省药物研究所苏钛高级工程师鉴定为百合科重楼属植物云南重楼 Paris polyphylla Smith var.Yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.的干燥根茎。药材标本保存于云南省药物研究所天然药物化学研究室 304。2 提取与分离取粉碎的滇重楼 20 kg,用 70%乙醇热回流提取三次,溶剂倍数(1
13、60 L,120 L,120 L),提取时间(3 h,2 h,2 h),提取液浓缩后上 HPD-100 大孔吸附树脂(水、40%乙醇、90%乙醇)洗脱,40%乙醇、90%乙醇洗脱液分别浓缩后进行干燥。取该柱层析 40%乙醇段浸膏约 1 kg,加乙醇溶解进行硅胶拌样。经硅胶柱层析(乙酸乙酯-乙醇,16 11 1)洗脱,得到7 个组分(A1 A7)。A1 经硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯,22 1 1 1)洗脱,得到五个流份(A1B1、A1B2、A1B3、A1B4、A1B5),其中,A1B1 甲醇重结晶,得到化合物 1(43 mg);A2 上 MCI 柱层析,用甲醇-水(6 9465 35)洗脱得到
14、六个流 份(A2B1、A2B2、A2B3、A2B4、A2B5、A2B6),其 中,A2B6 再经 Sephadex LH-20 柱层析,得到化合物 2(113 mg);A3 经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇,13 11 1)洗脱,得到化合物 3(160 mg);A4 经甲醇重结晶得到化合物 4(54 mg);A5 经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇,11 11 1)洗脱,得到化合物 5(65 mg)和化合物 6(111 mg);A6 经过半制备 HPLC(乙腈-水,44 56),得到化合物 7(87 mg)和化合物 8(75 mg);A7 经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇,6.5 11.5 1)洗脱,得到五
15、个流份(A7B1、A7B2、A7B3、A7B4、A7B5),其中,A7B2 再经过 Sephadex LH-20 柱层析,得到化合物 9(160 mg),A7B4 再经甲醇重结晶得到化合物 10(85 mg)。3 结构鉴定化合物 1:白色片状结晶。1H-NMR(600 MHz,CD3OD):2.28,2.25,2.24,1.65,1.58,1.56,1.25,0.92,0.91,0.89。2.25 处信号峰为与羰基相连的-CH2-,1.25 1.65 为长链-CH2-的堆积峰,0.89 处为甲基峰,与-CH2-相连,分裂为三重峰;13C-NMR(150 MHz,CD3OD):13.4,22.5
16、,24.6,28.9,29.2,29.1,29.3,29.3,29.4,29.4,29.4,31.6,33.5,176.4。176.4 为羰基碳的信号,22-34(22.5,24.6,28.9,29.2,29.1,29.3,29.3,29.4,29.4,29.4,31.6,33.5)为脂肪链上的碳的信号,13.4 为甲基碳的信号。以上数据与文献6报道基本一致,故鉴定此化合物 1 为棕榈酸。化合物 2:白色针状结晶。1H-NMR(600 MHz,CD3OD):0.78(3H,s,18-CH3),0.78(3H,s,19-CH3),1.08(3H,s,27-CH3),1.05(3H,s,21-CH
17、3),1.09(3H,s,26-CH3),2.05(1H,t,J=8.5 Hz,H-17),2.29(1H,dd,J=4.8,12.9 Hz,H-5),3.04(1H,m,H-24),3.07(1H,brt,J=8.3 Hz,H-9),3.62(1H,brs,H-2),3.84(1H,brs,H-3),5.68(1H,d,J=1.8 Hz,H-7);13C-NMR(150 MHz,CD3OD):36.8(C-1),68.6(C-2),68.4(C-3),33.4(C-4),48.4(C-5),199.6(C-6),119.4(C-7),164.8(C-8),34.9(C-9),38.3(C-1
18、0),20.5(C-11),30.9(C-12),43.9(C-13),82.4(C-14),30.5(C-15),20.5(C-16),46.5(C-17),16.7(C-18),23.5(C-19),76.5(C-20),22.7(C-21),41.7(C-22),26.4(C-23),78.7(C-24),75.8(C-25),29.3(C-26),30.3(C-27)。以上数据与文献7报道基本一致,故鉴定化合物2 为 pinnatasterone。化合物 3:白色针状结晶。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6):11.2(1H,brs,NH),7.71(1H,s,H-6),6.
19、19(1H,t,J=6.8 Hz,H-1),3.58(2H,m,H-5),2.06(2H,m,H-2),1.79(3H,s,H-7);13C-NMR(150 MHz,DMSO-d6,):163.8(C-4),150.3(C-2),136.2(C-6),109.3(C-5),87.3(C-4),83.6(C-1),70.4(C-3),61.4(C-5),12.4(-CH3)。以上数据与文献8报道基本一致,故鉴定化合物 3 为胸苷。化合物 4:白色针状结晶。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6):0.77(3H,s,18-CH3),0.82(3H,s,19-CH3),1.04(3H,s,2
20、7-CH3),1.05(3H,s,21-CH3),1.07(3H,s,26-CH3),2.18(1H,dd,J=4.0,13.2 Hz,H-5),2.24(1H,t,J=8.4 Hz,H-17),3.01(1H,brt,J=8.4 Hz,H-9),3.12(1H,d,J=9.6 Hz,H-22),3.61(1H,brs,H-2),3.77(1H,brs,H-3),5.63(1H,d,J=2.0 Hz,H-7);13C-NMR(150 MHz,DMSO-d6):36.5(C-1),66.6(C-2),66.4(C-3),31.6(C-4),50.2(C-5),202.5(C-6),120.3(C
21、-7),165.3(C-8),33.2(C-9),37.7(C-10),20.3(C-11),30.4(C-12),46.7(C-13),82.6(C-14),30.4(C-15),20.3(C-16),48.6(C-17),17.0(C-18),23.7(C-19),75.6(C-20),21.3(C-21),76.4(C-22),26.4(C-23),41.3(C-24),68.3(C-25),29.3(C-26),30.3(C-27)。以上数据与文献9报道基本一致,故鉴定化合物 4 为 20-hydroxyecdysone。化合物 5:白色针状结晶。1H-NMR(600 MHz,DMSO
22、-d6):8.62(1H,s,H-2),8.35(1H,s,H-8),6.72(1H,d,J=5.8 Hz,H-1),5.07(1H,m,H-2),5.50(1H,t,J=5.5 Hz,H-3),4.77(1H,dd,J=5.5,2.7 Hz,H-4),4.31(1H,dd,J=12.4,2.7 Hz,H-5a),4.13(1H,dd,J=12.4,2.7 Hz,H-5b);13C-NMR(150 MHz,DMSO-d6):153.2(C-2),150.1(C-4),121.4(C-5),157.7(C-6),140.4(C-8),90.6(C-1),75.5(C-2),72.4(C-3),8
23、7.8(C-4),62.8(C-5)。与文献10报道的腺嘌呤核苷一致,故鉴定化合物 5 为腺嘌呤核苷。化合物 6:白色针状结晶。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6,):0.83(3H,d,J=6.5 Hz,CH3-27),0.84(3H,s,CH3-18),0.90(3H,d,J=7.0 Hz,CH3-21),1.06(3H,s,CH3-19),1.25(3H,d,J=3.0 Hz,Rha-CH3),3.40(1H,t,J=9.0 Hz,Rha-H-4),3.42(1H,t,J=8.0 Hz,Glc-H-2),3.53(1H,t,J=9.0 Hz,Glc-H-4),3.64(1H,t
24、,J=9.0 Hz,Glc-H-3),3.67(1H,dd,J=3.0,9.5 Hz,Rha-H-3),3.88(1H,dd,J=第 51 卷第 9 期徐宏盼,等:滇重楼化学成分研究()65 4.5,6.0 Hz,Ara-H-3),3.91(1H,dd,J=1.5,3.0 Hz,Rha-H-2),4.01(1H,dd,J=2.0,4.0 Hz,Ara-H-2),4.02(1H,dd,J=7.0,7.5 Hz,H-16),4.09(1H,m,Ara-H-4),4.14(1H,m,Rha-H-5),4.52(1H,d,J=8.0 Hz,Glc-H-1),5.04(1H,d,J=2.0 Hz,Ara
25、-H-1),5.24(1H,d,J=1.5 Hz,Rha-H-1),5.42(1H,d,J=5.0 Hz,H-6);13C-NMR(150 MHz,DMSO-d6):36.8(C-1),29.1(C-2),76.2(C-3),37.5(C-4),140.1(C-5),121.2(C-6),31.4(C-7),31.3(C-8),49.4(C-9),36.2(C-10),20.1(C-11),31.4(C-12),44.2(C-13),51.8(C-14),30.7(C-15),88.2(C-16),88.9(C-17),16.5(C-18),18.8(C-19),43.5(C-20),9.2(
26、C-21),108.8(C-22),31.3(C-23),28.2(C-24),29.6(C-25),65.7(C-26),17.1(C-27);98.1(Glc-1),76.2(Glc-2),76.2(Glc-3),75.8(Glc-4),75.3(Glc-5),60.0(Glc-6);100.0(Rha-1),70.3(Rha-2),70.4(Rha-3),71.8(Rha-4),67.8(Rha-5),17.8(Rha-6);107.6(Ara-1),81.3(Ara-2),76.6(Ara-3),84.6(Ara-4),61.2(Ara-5)。以上数据与文献11报道对照基本一致,故鉴定
27、化合物6 为偏诺皂苷元-3-O-L-鼠李吡喃糖(12)-L-阿拉伯呋喃糖(14)-D-葡萄吡喃糖苷。化合物 7:白色油状物。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6):7.74(2H,dd,J=7.2 Hz,4.0,H-3,6),7.52(2H,dd,J=7.2 Hz,4.0,H-4,5),4.24 4.18(4H,m,H-1,1),1.69(2H,m,H-2,2),1.34 1.24(16H,m,H-3,3,4,4,5,5,7,7),0.93(6H,t,J=7.2,H-6,6),0.91(6H,t,J=7.2 Hz,H-8,8);13C-NMR(150 MHz,DMSO-d6):167.
28、9(s,2COO),132.4(s,C-1,2),128.9(d,C-3,6),130.8(d,C-4,5),68.3(t,C-1,1),38.8(d,C-2,2),30.5(t,C-3,3),28.8(t,C-4,4),23.1(t,C-5,5),14.2(q,C-6,6),23.9(t,C-7,7),11.1(q,C-8,8)。以上数据与文献12报道基本一致,故鉴定该化合 7 为 bis(2-ethylhexyl)benzene-1,2-dicarboxylate。化合物 8:白色针状结晶。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6):0.82(3H,s,18-CH3),0.97(3H,
29、d,J=4.8 Hz,27-CH3),1.05(3H,s,19-CH3),1.04(3H,d,J=6.8 Hz,21-CH3),1.61(3H,d,J=6.0 Hz,Rha6-CH3),1.74(3H,d,J=6.0 Hz,Rha6-CH3),4.83(1H,m,3-H),4.93(1H,d,J=6.3 Hz,Glc1(-H),5.80(1H,brs,1-H),6.37(1H,brs,1-H);13C-NMR(150 MHz,DMSO-d6):37.3(C-1),30.2(C-2),78.0(C-3),39.1(C-4),140.4(C-5),121.7(C-6),32.4(C-7),31.7
30、(C-8),50.2(C-9),37.1(C-10),21.2(C-11),39.7(C-12),40.5 C-13),56.6(C-14),32.3(C-15),81.1(C-16),63.1(C-17),16.4(C-18),19.3(C-19),42.0(C-20),15.4(C-21),109.1(C-22),31.6(C-23),29.4(C-24),30.5(C-25),67.1(C-26),17.2(C-2);3-OGlc:100.2(C-1),78.6(C-2),77.2(C-3),78.1(C-4),77.7(C-5),61.1(C-6);2-Rha 102.0(C-1),7
31、2.4(C-2),72.6(C-3),73.6(C-4),69.5(C-5),18.7(C-6);4-Rha:102.7(C-1),72.5(C-2),726(C-3),74.0(C-4),70.4(C-5),18.4(C-1)。以上数据与文献13报道的数据一致,故鉴定化合物 8 为薯蓣皂苷。化合物 9:白色方状结晶。1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6):5.21(1H,d,J=10.6 Hz,H-1),5.06(1H,d,J=10.6 Hz,H-1),5.14(1H,d,J=3.7 Hz,H-1),4.82(1H,dd,J=5.3,11.9 Hz,H-6),4.43(1H,dd,J
32、=2.0,11.9 Hz,H-6),4.76(1H,d,J=10.2 Hz,H-6),4.53(1H,d,J=10.2 Hz,H-6);13C-NMR(DMSO-d6,150 MHz):62.2(t,C-1),104.2(s,C-2),77.0(d,C-3),74.4(d,C-4),82.7(d,C-5),62.3(t,C-6),91.9(d,C-1),71.8(d,C-2),72.8(2,d,C-3,5),69.9(d,C-4),60.4(t,C-6)。以上数据与文献14报道基本一致,故鉴定化合物 9 为 2-O-D-fructofuranosyl-D-allopyranose。化合物 10
33、:白色粉末。1H-NMR(600 MHz,CD3OD):3.48(brm,J=6.5 Hz,1H,H-5),1.59(brs,2H,CH2),1.33(brs,4H,2CH2),1.28(brs,6H,3CH2),1.24(brs,72H,36CH2),0.88(t,J=5.5 Hz,3H,Me-1),0.86(t,J=6.0 Hz,3H,Me-43);13C-NMR(150 MHz,CD3OD):77.23(CH-5),33.38(CH2),33.38(CH3-43),32.09(CH2),29.88(33 CH2),29.77(CH2),29.74(CH2),29.51(CH2),23.0
34、5(CH2),22.84(CH2),16.99(CH3-1)。以上数据与文献15报道基本一致,故鉴定化合物 10 为 n-tritetracontan-5-ol。4 结 论由于重楼属化学成分复杂,加强对滇重楼根茎部位化学成分研究具有重要意义。本研究通过硅胶、MCI、Sephadex LH-20 等柱层析,从滇重楼根茎部位分离得到 10 个化合物。其中,化合物 2-O-D-fructofuranosyl-D-allopyranose(9)为首次从滇重楼植物中分离得到,化合物 bis(2-ethylhexyl)benzene-1,2-dicarboxylate(7)和化合物 n-tritetrac
35、ontan-5-ol(10)为首次从重楼属植物中分离得到。此研究为重楼药材资源的开发提供了依据。参考文献1 王宇飞,江媛,杨成金,等.滇重楼化学成分、药理作用和临床应用研究进展J.中草药,2022,53(23):7633-7648.2 赵樱.重楼资源保护与种苗繁育技术研究现状J.科学技术创新,2017(20):192-193.3 张婉莹.重楼栽培技术J.云南农业,2015(5):23-24.4 卢伟,牟雄军,杨光义,等.中药重楼药理活性研究进展J.中国药师,2017,20(5):896-899.5Kang LP,Yu K,Zhao Y,et al.Characterization of ste
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