1、2022 年 12 月第 30 卷 第 8 期中国实验动物学报ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICADecember 2022Vol.30 No.8徐聪,杨正标,王海苹,等.安儿宁颗粒在幼年大鼠临床前安全性评价研究 J.中国实验动物学报,2022,30(8):1050-1057.Xu C,Yang ZB,Wang HP,et al.Safety evaluation of oral administration of Anerning granules in young rats J.Acta Lab Anim Sci Sin,2022,30(8)
2、:1050-1057.Doi:10.3969/j.issn.1005-4847.2022.08.005基金项目国家科技重大专项(2011ZX0931-003),青海省重大科技专项(2020-SF-A3-2),浙江省医药卫生科技计划项目(2020KY105)。Funded by the National Science and Technology Major Project of China(2011ZX0931-003),Major Science and Technology Projects in Qinghai Province(2020-SF-A3-2),Medical Health
3、 Science and Technology Project of Zhejiang Provincial Health Commission(2020KY105).作者简介徐聪(1987),女,助理研究员,硕士,研究方向:药物毒理学。Email:xiaoxue-87 通信作者陈颖(1967),女,高级实验师,大专,研究方向:药物毒理学。Email:chenyinap 安儿宁颗粒在幼年大鼠临床前安全性评价研究徐聪1,2,杨正标1,2,王海苹3,李怀平3,郑高利1,2,宣尧仙1,2,陈颖1,2(1.杭州医学院安全性评价研究中心,杭州 310053;2.浙江省药物安全性评价技术研究重点实验室,杭
4、州医学院,杭州 310053;3.金诃藏药(山东)健康产业有限公司,济南 250104)【摘要】目的 研究安儿宁颗粒单次给药和 3 个月重复给药对幼年大鼠的毒性影响,评估安儿宁颗粒对临床儿童患者的长期使用安全性。方法 20 只幼年大鼠(3 4 周龄),按最大给药量法,单次给予安儿宁颗粒 240 g生药/kg 体重的剂量,观察大鼠的毒性反应和死亡情况;200 只幼年大鼠(3 4 周龄)按体重均衡随机分为溶媒对照组、唐古特乌头组、安儿宁颗粒低、中、高剂量组,每组 40 只,雌雄各半,分别灌胃给予纯水、唐古特乌头 5.5 g 生药/kg 体重、安儿宁颗粒 3、11、40 g 生药/kg 体重,每天
5、1 次,连续 91 d,于给药中期(给药 1.5 个月)、停药(给药3 个月)和恢复期结束(停药后4 周)分别抽样剖检大鼠40 只(每组10 只,雌雄各半)、80 只(每组20 只,雌雄各半)和 40 只(每组 10 只,雌雄各半),检测体重、摄食、血液学、血清生化学、凝血、尿液、眼科及组织病理学等相关指标。结果 幼年大鼠单次经口给予最大给药量的安儿宁颗粒,未见明显急性毒性;重复经口给予安儿宁颗粒 91 d,仅见高剂量雄鼠摄食量减少和体重增长减缓、唐古特乌头组和给药组雄鼠中性粒细胞和单核细胞数、血清白蛋白均可逆性升高,AST、Na+、Cl-可逆性下降,其余指标均未见显著毒性反应。结论 安儿宁颗
6、粒对幼年大鼠无显著毒性反应。相对安全剂量为 40 g 生药/kg 体重,未观察到有害作用(NOAEL)剂量为 11 g 生药/kg 体重。【关键词】安儿宁颗粒;儿科用药;幼年大鼠;毒性实验【中图分类号】Q95-33 【文献标识码】A 【文章编号】1005-4847(2022)08-1050-08Safety evaluation of oral administration of Anerning granules in young ratsXU Cong1,2,YANG Zhengbiao1,2,WANG Haiping3,LI Huaiping3,ZHENG Gaoli1,2,XUAN Y
7、aoxian1,2,CHEN Ying1,2(1.Center of Safety Evaluation,Hangzhou Medical College,Hangzhou 310053,China.2.Key Laboratory of Drug Safety Evaluation and Research of Zhejiang Province,Hangzhou Medical College,Hangzhou 310053.3.Arura Tibetan Medicine(Shandong)Health Industry Co.,Ltd,Jinan 250104)Correspondi
8、ng author:CHEN Ying.E-mail:chenyinap 【Abstract】Objective To study the toxicity of a single administration and 3-month repeated administration of Anerning(AEN)granules in juvenile SD rats,and evaluate the long-term safety in children.Methods 20 juvenile SD rats(3 4 weeks)were given the maximum admini
9、stration dosage(240 g crude drug/kg).This was followed by an observation of toxicity reactions and death for 15 days.Juvenile SD rats(200)were divided into vehicle control,Aconitum tanguticum control,low-dose,middle-dose,and high-dose groups.Each group was composed of 40 rats(half male and half fema
10、le),each of which was given purified water,A.tanguticum(5.5 g crude drug/kg),and AEN(3,11,and 40 g crude drug/kg),all in a volume of 10 mL/kg,for 91 days.Food intake and body weight were measured,and hematology,中国实验动物学报 2022 年 12 月第 30 卷第 8 期 Acta Lab Anim Sci Sin,December 2022,Vol.30,No.8biochemist
11、ry,coagulation,urine,ophthalmologic,and histopathology examinations of 5,10 and 5 rats for each sex in each group were conducted mid-administration,upon drug withdrawal,and 4 weeks after withdrawal.Results No obvious toxic effects or deaths were recorded after the single administration of AEN.After
12、the 3-month repeated administration of AEN,male rats in the high-dose group had decreased body weights,decreased food intake,reversibly increased NEUT count,NEUT ratio,MONO count,MONO ratio,and ALB,and reversibly decreased AST,Na+,and Cl-.ConclusionsThere were no obvious toxicity reactions in young
13、rats given AEN granules.The relative safe dosage of AEN was 40 g crude drug/kg,and the no observed adverse effect level(NOAEL)is 11 g crude drug/kg.The clinical administration of AEN is safe.【Keywords】Anerning granule;pediatric drugs;juvenilerat;toxicity testConflicts of Interest:The authors declare
14、 no conflict of interest.安儿宁颗粒为经典藏医儿科用药“久协更卓”的现代剂型,处方由天竺黄、红花、人工牛黄、岩白菜、甘草、高山辣根菜、洪连、檀香、唐古特乌头九味藏药组成1。安儿宁颗粒具有清热祛风、化痰止咳功效,临床上主要用于治疗小儿风热感冒、咳嗽有痰、发热咽痛等上呼吸道感染2-3。处方中青藏高原特有药材唐古特乌头,为毛茛科乌头属,含有内酯型二帖生物碱,文献报道对小鼠具有一定的急性毒性4-5;另红花,为活血化瘀药材,可显著延长凝血酶原和凝血酶时间,可能具有潜在的安全风险6。安儿宁颗粒上市近 20 年,据 2018 2020 年国家药品不良反应数据库数据反馈显示7,安儿宁颗
15、粒使用患儿约为 1480 万,其中有 122 例报告发生腹泻或皮疹等不良反应。虽然其不良反应报告率 0.01%,但鉴于安儿宁颗粒正逐渐被联合用药用于其他小儿适应症8-13,且目前缺少安儿宁颗粒对幼龄动物的相关毒理学数据,本文特开展大剂量安儿宁颗粒在幼年大鼠的单次给药以及 3 个月重复给药的毒性研究,进一步评价其儿科用药安全性。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物240 只 3 4 周龄健康 SPF 级 SD 大鼠,雌雄各半,体重为 40 60 g,购自上海市西普尔-必凯实验动物有限公司【SCXK(沪)2018-0016】。饲养期间各组大鼠自由饮水(经 LAWS-2000 实验动物反渗
16、透纯水机处理纯水和摄食(钴 60 辐照的全价营养颗粒饲料),给药前大鼠禁食不禁水,温度 20.5 25.5,相对湿度 50%68%,每小时通风次数15 次,12 h 光照明暗交替,饲养于杭州医学院安全性评价研究中心屏障系统【SYXK(浙)2017-0010】。实验机构通过国家 GLP 认证和 AAALAC 认证,实验遵循 GLP 原则。本研究方案获得本机构实验动物伦理委员会的批准(GLP-A-003)。1.1.2 主要试剂与仪器安儿宁颗粒(清膏),黄棕色胶状物,3.1 g 生药/g 清膏,批号:20160201,金诃藏药股份有限公司提供;人工牛黄,批号:150731,青海九康中药饮片有限公司生产;临用前,按处方量比例 1 g 安儿宁颗粒清膏加 34.2 mg 人工牛黄,配制成“安儿宁颗粒”原液,用于高剂量组给药,中、低剂量组受试物取“原液”按比例用纯水配制成相应的给药浓度。唐古特乌头提取清膏(3.57 g 生药/g,金诃藏药股份有限公司,批号:20160201),棕褐色粘稠液体,用纯水配制成给药浓度。CA-1500 全自动血凝分析仪(Sysmex,日本);7100 全自动生化分析仪(H
