1、综述与专论118 2023.110 引言随着社会的发展，养鸡场的规模越来越大，养鸡场的疫病防控也越来越艰难。禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）是正黏病毒科（Orthomyxoviri-dae）、A型流感病毒属（Influenzavirus A）的一种病毒，根据AIV的致病性分为2种，一种是高致病性禽流感病毒（HPAIV）和一种是低致病性禽流感病毒（MPAIV）1，本试验主要目标是针对高致病性禽流感（HPAIV）进行流行病学调查。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）是副黏病毒科腮腺炎病毒属（Rubulavir-us）的一种病毒，鸡、火
2、鸡、珠鸡及野鸭都有易感性，以鸡最易感染2，主要是针对规模化养鸡场进行的调查。马立克氏病（Mareks disease，MD）是由疱疹病毒引起的淋巴组织增生性疾病，vMDV常可引起内脏器官、皮肤、和肌肉的肿瘤，而另外一些vMDV和mMDV可能引起主要外周神经和性腺的病变3，主要是针对规模化养鸡场进行鸡马立克氏病的病毒进行流行病学调查。禽白血病（Avian leukosis，AL）是鸡白血病/肉瘤病毒群的病毒收稿日期：2023-08-24基金项目：2022年度信阳市重要动物疫病检疫检测专项作者简介：郑伟（1989-），汉族，本科，助理兽医师，研究方向：预防兽医学。郑伟，朱永华规模化鸡场主要病毒性疾
3、病流行病学调查J现代畜牧科技，2023，102（11）：118-120doi：10.19369/ki.2095-9737.2023.11.032ZHENG Wei，ZHU YonghuaEpidemiological Investigation of Major Viral Diseases in Large-scale Chicken FarmsJModern Animal Husbandry Science&Technology，2023，102（11）：118-120规模化鸡场主要病毒性疾病流行病学调查郑伟1，朱永华2（1.河南省信阳市农业综合行政执法支队，河南 信阳 464000；2.
4、河南省信阳市农业科学研究院，河南 信阳 464000）摘要：为了解规模化养鸡场常见病毒性疾病的流行情况，从豫南和鄂北的11个大型养鸡场采集病料160份，其中咽拭子110份，病料（肺、肝、肾混料）55份及血清样本330份。分别进行禽流感AIV、新城疫NDV、马立克氏病MDV和白血病ALV的疫苗免疫抗体和病原学调查。结果表明，规模化养禽场禽流感AIV和新城疫NDV的疫苗免疫抗体的保护率较高，总体趋势是种禽场商品场散养场，采集的病料咽拭子实时荧光RT-PCR检测，未检出禽流感和新城疫阳性样品，病料（肺、肝肾混料）接种鸡胚，进行病毒分离实验，检出马立克病毒样品7份，白血病10份，表明规模养鸡场仍存在马
5、立克氏病和白血病隐形感染的风险。关键词：规模化养鸡场；常见病毒病；流行病学调查中图分类号：S858.31文献标识码：Bdoi：10.19369/ki.2095-9737.2023.11.032Epidemiological Investigation of Major Viral Diseases in Large-scale Chicken FarmsZHENG Wei1，ZHU Yonghua2（1.Agricultural Comprehensive Administrative Law Enforcement Detachment，Xinyang City，Xinyang Henan
6、464000，China；2.Research Institute of Agricultural Sciences，Xinyang City，Xinyang Henan 464000，China）Abstract：In order to understand the prevalence of common viral diseases in large-scale chicken farms，160 disease samples were collected from 11 large-scale chicken farms in southern Henan Province and
7、northern Hubei Province，including 110 throat swabs，55 disease samples（lung，liver，kidney mix）and 330 serum samplesThe immune antibodies and etiology of avian influenza AIV，Newcastle disease NDV，Mareks disease MDV and leukemia ALV were investigated respectivelyThe results show that：The protection rate
8、 of avian influenza AIV and Newcastle disease NDV vaccine was relatively high in large-scale poultry farmsThe overall trend was breeding farmscommercial farmsfree-range farmsThe samples collected were tested by real-time fluorescent RT-PCR with throat swabs，and no positive samples of avian influenza
9、 and Newcastle disease were detected7 samples of Marek virus and 10 samples of leukemia were detected，indicating that the risk of Mareks disease and leukemia stealthy infection still exists in large-scale chicken farmsKeywords：large-scale chicken farm，common virus disease，epidemiological investigati
10、on综述与专论1192023.11引起的家禽类的多种肿瘤性疾病，常给家禽生产带来巨大的损失，临床上以淋巴白血病最为常见，其次是成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病4-7为防控疫病，提高养鸡场的生产效益，控制和净化规模化鸡场常见病毒性疾病是当前规模化养鸡场发展的关键。禽流感尤以低致病性的常见，新城疫又是非典型的多发，而马立克氏病和白血病尤其防不胜防，时不时在养鸡场流行，禽流感和新城疫又是规模化养鸡场疫病净化的必检病。为了解规模化养鸡场4种病毒性疾病的流行情况，对豫南和鄂北11个大型养鸡场进行流行病学调查。1 材料1.1 试验对象待检血清330份，咽喉拭子110份，病料55份，采自豫南和鄂北的11个
11、大型养鸡场。1.2 检测试剂禽流感和新城疫的血凝抑制HI实验的试剂来自河南农业大学禽病研究所，禽流感AIV-H5亚型实时荧光RT-PCR检测试剂盒来自洛阳莱普生信息科技有限公司，新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒均来自深圳康百得生物科技有限公司。病毒分离试验由河南农大禽病研究所进行。2 方法2.1 血清学调查 2023年34月共采集淮滨、固始、平桥、桐柏、小林、广水、应山等11个场的330份血清进行禽流感和新城疫HI实验，该实验分别是按高致病性禽流感诊断技术（GB/T189362003）和出口家禽新城疫病毒检验方法（SN/T07641999）规定的方法进行和结果判定分析不同养鸡场不同疫病
12、的免疫状况。2.1.1 材料准备96孔V型微量反应板80个，微量移液器2把，消毒好的滴头6盒，阿氏（Alsevers）液1瓶，鸡红细胞悬液1瓶，pH值为7.2、浓度0.01 moL/L PBS液1瓶，高致病性禽流感血凝素分型抗原1瓶，标准分型阳性血清及阴性血清各1瓶，新城疫抗原、标准阳性血清和阴性血清各1瓶。2.1.2 血凝试验 在96孔微量反应板的112孔中都加入0.025 mL PBS液 然后换滴头吸取0.025 mL病毒混悬液加入到第1孔中混匀，再从第1孔内吸取0.025 mL病毒混悬液加入到第2孔中，吹打混匀后再吸取0.025 mL加入到第3孔，如此进行对比稀释到第11孔，再从第11孔
13、吸取0.025 mL弃掉，换滴头再在每孔加入0.025 mL PBS液，然后每孔再加入0.025 mL 1%的3只SPF鸡红细胞混悬液，在震荡器上混匀，放在室温2025 下静置40 min后观察结果，对照孔的红细胞会呈明显的钮扣状沉淀到孔底，然后将微量反应板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流动，完全凝滞不流动的抗原最高稀释倍数就是一个血凝单位。2.1.3 配制4单位（HAU）抗原 以完全血凝的最高稀释倍数为终点滴度，终点滴度的稀释倍数除以4即是含有4单位（HAU）抗原的稀释倍数，比如血凝终点滴度为1256，则4单位（HAU）抗原稀释倍数就是164（256除以4）。2.1.4 血凝抑制实验 在96孔
14、V型微量反应板的111孔均加入0.025 mL PBS液，在第12孔中加入0.05 mL PBS液，换滴头再吸入0.025 mL血清加入第1孔中，充分吹打混匀后吸取0.025 mL加入到第2孔，依次对比稀释到第10孔，然后从第10孔中吸取0.025 mL混液弃掉，换滴头，再从第1孔到11孔中都加入4单位（HAU）病毒混悬液0.025 mL，静置在室温20 环境下，30 min换新滴头，每孔再加入体积数为1%的健康鸡红细胞混悬液0.025 mL，放在振荡器上轻轻混匀，静置在室温20 环境下40 min，如果环境温度太高可置于恒温箱中反应。对照孔红细胞会呈钮扣状沉淀于孔底。2.1.5 结果判定 用
15、完全抑制4单位（HAU）的血清最高稀释倍数作为HI抗体滴度，实验是在阴性对照滴度不大于2Log2，阳性对照误差不超过1个滴度，实验才算成立。当HI抗体滴度小于或等于3 Log2为阴性，HI抗体滴度是4Log2视为可疑需要重复实验，当HI滴度大于或等于5Log2视为阳性。2.2 病原学调查2023年34月共采集淮滨、固始、平桥、桐柏、小林、广水、应山等11个场的咽拭子做实时荧光RT-PCR检测，结果判定不同养殖场的禽流感和新城疫地隐形感染情况。55份病料进行病毒分离培养，来分析不同养殖场的马立克氏病和白血病的感染情况。3 结果3.1 血清学调查结果对采集的330份血清学样本分别按高致病性禽流感诊
16、断技术（GB/T189362003）和出口家禽新城疫病毒检验方法（SN/T07641999）规定的方法进行检测和判定，禽流感H5和新城疫的疫苗免疫抗体均超过国家规定的标准大于70%。总体趋势：种鸡场商品场散养场，见表1。表1 血清学调查结果 样品类别养殖场类别样品 总数AIV 阳性数AIV 保护率（%）NDV 阳性数NDV 保护率（%）种禽场12012010011898.3商品场12010587.510385.8散养场906875.66572.2合计33029388.828686.7综述与专论120 2023.113.2 病原学调查（1）对110份咽拭子进行禽流感AIV-H5亚型实时荧光RT-
17、PCR检测试剂盒和新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测，实验前20 min从-20 冰箱中取出试剂盒相应试剂以平衡至室温2025，并使试剂完全溶解，做好实验前准备工作，严格按照操作程序操作，实验在阳性对照的Ct值30有明显指数增长的，呈现典型的S型曲线，阴性对照的Ct值38或无Ct值的，线型为直线或轻微斜线的，无明显增长期或平台期的情况下成立。样本结果判定：样本检测的结果Ct值35有明显指数增长的为阳性，说明样本中检测出该病毒，样本检测结果Ct值38或无Ct值的，说明样品中未检出该病毒，样本检测结果的Ct值在3538范围内的，样本可疑，应对样本进行重复检测，如果重复实验Ct值仍旧在3538范围的
18、，有明显指数增长，则判为阳性，否则判为阴性。结果110份咽拭子检测均为阴性，阳性率为0，说明未检出禽流感和新城疫病毒。（2）对采集的55份病料分别进行马立克氏病和白血病鸡胚接种，病毒培养分离。结果每个场都有不同程度的感染，感染情况见表2。表2 感染情况 样品类别养殖场类别样品 数份MDV 阳性数MDV 阳性率（%）ALV 阳性数ALV 阳性率（%）种禽场2015210商品场20420525散养场15533.3533.3合计551018.21221.84 讨论与分析（1）对采集的330份血清学样本分别按高致病性禽流感诊断技术（GB/T189362003）和出口家禽新城疫病毒检验方法（SN/T07
19、641999）规定的方法进行检测和判定，11个规模场的禽流感和新城疫的的疫苗免疫抗体都比较好，免疫保护率均超过国家规定的标准，总体趋势是种禽场商品场散养场，说明规模养殖场对这2种病毒性疫病的防疫都很重视，免疫效果也比较好，这可能是田间并未检出高致病性禽流感和新城疫的野毒感染的主要原因。（2）从马立克氏病和白血病的野毒感染调查结果看，种禽场的感染率分别为5%和10%，商品场为20%和25%，散养场为33.3%和33.3%，说明无论是种禽场还是商品场都有野毒感染，只是感染的比例不同而已，本次检测的11个养鸡场采集的样品均为临床健康鸡群，也说明田间马立克氏病和白血病野毒感染的概率还是很大的，特别是A
20、LV-J亚群的感染较严重，马立克氏病的防制重要是抓好疫苗防疫关和检测关，禽白血病经常以垂直传播为主，目前还没有有效的疫苗，只能严格控制禽白血病的源头，加强种禽的检疫检测实行种源的净化。（3）禽流感、新城疫、马立克氏病、白血病4种疫病是规模养殖场常见的疫病，也是规模养殖场重点防制的疾病，更是规模养殖场动物疫病净化的必检病，从疫苗免疫效果和田间生产中看禽流感和新城疫在规模养殖场中防疫效果还是比较理想的，尤其是种鸡场和商品蛋鸡场。但是散养场的防疫还是要引起警醒的，曾在临床上看到数例感染发病导致损失惨重。马立克氏病和白血病的防制，一直是规模养鸡场头疼的事，目前还没有很好的防治办法，只有检疫淘汰，对于种
21、鸡场来讲尚且可以操作，但是如果感染率高的情况下，损失也是很大的。而对于商品场和散养场可操作性不大，几乎没有人愿意做检疫，每年都能见到多例因因马立克氏病和白血病发病损失惨重，甚至破产的。（4）本次流调的不足是病料的样本数不大，有一定的局限性，不足之处请指正。5 结论 禽流感、新城疫在规模养殖场的防疫效果比较理想，达到了重要疫病防控的要求和目的，马立克氏病和白血病的田间感染还是很严重的，需要引起业界的重视，马立克氏病的感染可能跟免疫不到位有关，一些孵化场对免疫不够重视，免疫剂量不足，疫苗选择有误（液氮苗保存不当），造成免疫失败。白血病的危害还是很严重的，可能与一些种鸡场净化不严格，或者不做净化有关
22、，希望能给引起有关部门的重视，严格检疫检测。参考文献1吴志明，刘莲芝，李桂喜动物疫病知识防控宝典M北京：中国农业出版社，2006：45-472蔡宝祥家畜传染病学M4版北京：中国农业出版社，2001：304-3053高福 刘文军禽病学M9版北京：北京农业大学出版社，1991：302-3054Smith L P，Petheridge L，Nair V，et alAvian leukosis virus subgroup-associated myelocytoma in a hobby chickenJVeterinary Record，2017：veterc-2017-104 6265Zhang
23、 X，Yan Y，lei X，et al，Circular RNA alterations are involved in resistance to avian leukosis virus subgroup-J-induced tumor formation in chickensJOncotarget，2017，8（21）：34 961-34 9706Wang X，Zhou D，Wang G，et alA novel multi-variant epitope en-semble vaccine against avian leukosis virus subgroup J JVaccine，2017，35（48）：6 685-6 6907陈溥言兽医传染病学M5版北京：中国农业出版社，2006：377-381编辑：韩若
