1、麦冬多糖对急性心肌缺血性损伤的作用研究摘要 目的 研究麦冬多糖对大鼠急性心肌缺血的保护作用，以及对人脐静脉内皮细胞的凋亡和氧化损伤的作用，初步探讨对麦冬多糖对心血管的保护作用进行生物体外(in vitro)和生物体内(in vivo)的药理作用研究。方法 1. 异丙肾上腺素（ISO）诱导制备急性心肌损伤大鼠模型，观察急性心肌缺血大鼠导联心电图及心肌受损的变化；。生化、ELISA法检测大鼠心肌酶谱、及大鼠血清NO、ET-1及IMA含量；光、电镜观察心肌受损情况；生化试剂盒检测试剂盒法检测各组大鼠丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量； real-time PCR检测大鼠心肌组织中ET-1
2、、eNOS的表达水平。2. 体外培养人脐静脉内皮细胞，H2O2诱导造成氧化损伤模型；MTT法检测HUVEC细胞抑制率并检测细胞内NO含量以及SOD、MDA活力；流式细胞仪检测细胞内活性氧水平及细胞凋亡。结果 麦冬多糖能显著性抑制ISO所造成的S-T段抬高；能显著增加SOD的水平并降低MDA含量，；能明显增加NO含量和降低ET-1及IMA含量；能增加心肌组织eNOS基因表达和减少ET-1基因表达；降低心指数；心肌病理形态学分析和透射电镜超微结构观察还表明，,麦冬多糖可以减轻急性心肌缺血大鼠的心肌损伤；同时麦冬多糖能增加心肌组织eNOS基因表达和减少ET-1基因表达；能降低细胞生长抑制率和细胞凋亡
3、率并降低细胞活性氧水平；减少细胞氧化损伤。结论 麦冬多糖可一定程度的减少急性心肌缺血导致的心肌损伤，对双氧水引起的细胞氧化损伤有一定的保护作用。关键词 麦冬多糖；急性心肌缺血；细胞氧化损伤Effects of polysaccharide of Ophiopogon Japonicu on acute myocardial ischemiaAbstract: Objective In this study, we explore the protective effects of polysaccharide of Ophiopogon Japonicu(OJP1) on acute myoc
4、ardial ischemia of rats in vivo and.besides, we research human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) damaged by oxidative stress in vitro, and investigate the protective effect on cardiovascular. Methods 1. To study on myocardial ischema rats: SD rats(30) were randomly divided into normal control
5、group(NC), model control group(MC),OJP1(100 mg/kg、300 mg/kg)and inderal(10 mg/kg). Acute myocardial ischemia of rats were produced by isoprenaline, a and electrocardiogram (ECG) were recorded. ELISA methods were used to detect NO、NOS、ET-1、IMA levels in serum. The morphology of heart tissue was obser
6、ved under optical microscope and electron microscope; malondialdehyde (MDA) and super oxide dismutase (SOD) in cardiac tissue of rats were tested by biochemical reagent kit. The expression of ET-1 and eNOS in cardiac tissue were examined by fluorescence quantitative PCR. 2. Human umbilical vein endo
7、thelial cell were isolated and cultured in vitro, and the model of oxidative injury was induced by hydrogen peroxide (H2O2). The inhibitory rate of cell growth was measured by MTT method. NO content, SOD and MDA activities were also determined by biochemical Method; ReactiveOxygenSpecies (ROS) and a
8、poptosis were anlysised by flow cytometer. Results: OJP1canrestraintheraise ofS-Tsegment causedbyisoprenaline(ISO) significantly. SOD levels in heart tissue were increased while MDA levels in heart were decreased. OJP1canincreaseNOcontent, but reduceET-1andIMAcontent. characteristic ultrastructurala
9、lterationsindicate that OJP1canreducethedamageofacutemyocardialischemia of rats. Italsoshowsapoptosis were analysised by flowcytometer. Results: OJP1canrestraintheraise ofS-Tsegmentcausedbyisoprenaline(ISO)significantly.SOD levels in heart tissue were increased while MDA levels in heart were decreas
10、ed.OJP1canincreaseNOcontent, while reduceET-1andIMAcontent.Myocar-dialpathologicalmorphologyanalysesandcharacteristicultrastructuralalterationsindicate that OJP1canreducethedamageofacutemyocardialischemia of rats . Italsoshowsthat OJP1 canincreasetheexpressionofeNOS mRNA, andreducetheexpressionofET-
11、1, mRNA myocardialtissue. The cell activity was significantly decreased by treated H2O2. OJP1 can increase the cell viability and reducegrowthinhibitoryratein a dose-dependent manner. The activity of SOD and NO was increased obviously, and the content of MDA and ROS were markedly reduced，and reduce
12、H202 induced apoptosis. TheresultsrevealthatOJP1 can alsorelievethedamageofcellularoxidation. Conclusion OJP1 has significant protective effects on isoprenaline caused ratsmyocardial-schemia damage and on human umbilical vein endothelial cell damage induced by oxidative stress.Keywords: Ophiopogon J
13、aponicus ;Acute Myocardial Ischemia; damaged by oxidative stress.心血管疾病是危害人类健康最普遍、最严重的疾病，患病率为各疾病之首，病死率仅位于恶性肿瘤之后。而目前国内外通过如硝酸酷类、钙通道阻滞剂和-受体阻断药等传统抗心肌缺血药物治疗，以及冠脉造影（GAG）、冠脉支架植入（PCI）、冠脉旁路移植（CABG）等手术治疗和介入治疗，使心血管疾病死亡率呈现逐年下降趋势1-3，但这些治疗方法通常只能局部恢复缺血心肌的血流灌注，而不能修复或逆转已坏死的心肌组织，且也可造成心肌细胞的再次损伤4，因此这些方法并不能根本解决缺血缺氧对心肌细胞的
14、损伤。国内外的研究表明，麦冬的主要化学成分为多糖、甾体皂苷、高异黄酮类、氨基酸，-谷甾醇、多羟基脂肪酸和酚酸类化合物等，有增加机体耐缺氧能力；抗心律失常；降血糖，促进使胰岛细胞的恢复；提高机体免疫功能5等作用。而麦冬多糖作为麦冬的主要成分之一，药效也主要集中在免疫活性、降血糖、抗心肌缺血、抗过敏6-7等方面。本实验一方面研究ISO 诱导大鼠急性心肌损伤；另一方面，研究H2O2氧化损伤人脐静脉内皮细胞，对麦冬多糖进行生物体外(in vitro)和生物体内(in vivo)的药理作用探究。体内(in vivo)的药理作用探究。 材料与方法1 实验动物与细胞 人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）由本实验
15、室保存；SPF级近交系Sprague-Dawley（SD）大鼠30只，雌雄各半，体重200 g20 g；动物室环境：室温：20 -23 ，相对湿度：45 %-60 %；自由取食、进水，12 h光照周期2 主要试剂与仪器 麦冬多糖由本实验室提取；1640培养液和胎牛血清购自美国Gibco公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、异丙肾上腺素（ISO）购自sigma公司；青霉素-链霉素溶液（100X）、胰酶细胞消化液、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、一氧化氮试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒和活性氧（ROS）试剂盒均购自碧云天生物技术研究所；Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒
16、购自南京凯基生物科技发展有限公司；逆转录试剂盒购自大连宝生物；其余试剂均为国产分析纯；二氧化碳培养箱3111：美国Thermo公司；低温离心机：德国Eppendorf 公司； Varioskan Flash 多功能酶标仪：Thermo scientific；倒置相差显微镜:：Nikon eclipse 50i 812187；流式细胞仪：FACS Arial，美国BD公司；722分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；透射电子显微镜：日本HEMiC公司。3 方法 3.1 动物分组及造模 大鼠随机分为5组，每组6只，雌雄各半，分笼饲养。正常组与模型组大鼠每日以等量生理盐水（2 mL）灌胃，其他灌胃药
17、物均用等量生理盐水配制。低麦冬多糖组按100 mg/kg体重灌胃，高麦冬多糖组按300 mg/kg体重灌胃，普萘洛尔组按10 mg/kg体重灌胃。于灌胃的第13天、14天灌胃30 min后按ISO 4 mg/kg的剂量进行腹腔注射，正常组给予等量的生理盐水进行腹腔注射。3.2 细胞分组及造模 取对数生长期的HUVEC细胞铺板，待细胞铺满70%80%更换无血清的1640培养液，分为6组。24h后，除正常对照组加入1640外，各组加入含10%FBS,1%青链霉素的1640配制的终浓度为1000mol/L的H2O2后，继续培养4h用于各项指标的检测。 3.3 动物标本的采集及处理 末次腹腔注射ISO
18、后24小时，Medlab监测心电图（标准导联)，大鼠心电图ST段位移的测定及计算心脏指数测定；水合氯醛麻醉后，眶静脉取血，3000 rpm/min离心10 min后收集血清于-20 保存；取血后，快速取心脏标本，称重，取左心室，沿垂直其长轴切成三部分，固定于戊二醛中。 3.4 各项指标检测及观察 3.4.1全自动生化分析仪雅培C8000检测心肌四项酶谱；酶联免疫吸附测定法（ELISA）测血清NO、ET-1及IMA的含量；3.4.2取心肌组织左心室上三分之一部分心肌组织做常规石蜡切片，苏木素伊红染色后光镜下观察病理形态学变化，并制成超薄切片，于透视透射电镜下观察心肌超微结构；3.4.3荧光定量P
19、CR检测心肌组织eNOS、ET1基因表达情况1、 针对大鼠eNOS、ET1及内参-actin由大连Takara公司设计引物2、Trizol法提取总RNA, ND2000测RNA浓度，按照逆转录试剂盒操作步骤将RNA逆转录为cDNA.3、 PCR反应 3.4.4比色法测定动物大鼠心肌组织内及细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、和丙二醛（MDA），具体方法按照试剂盒要求进行； 3.4.5 MTT法筛选双氧水氧化损伤的最适浓度及检测细胞增值率； 3.4.6按ROS试剂盒及细胞凋亡试剂盒说明，流式细胞仪检测细胞ROS含量及凋亡率 3.5 统计学处理 计量资料用均数标准差（meanSD）表示, 应用SPSS
20、16.0统计软件分析, 实验组间均数比较采用单因素方差分析（oneway analysis of variance,ANOVA)，并用Dunnett T3 法进行比较；统计结果P 0. 05为差异有统计学意义。4 结果1. 麦冬多糖对心肌缺血大鼠心电图ST段、心指数、心肌酶谱四项指标的影响 模型组大鼠心电图ST段偏移、心指数及心肌酶谱四项指标均显著高于正常组，低、高剂量麦冬多糖组及普萘洛尔组ST段偏移及心肌酶谱四项指标均显著低于模型组，而OPJ1-100组、普萘洛尔组心指数也有显著性差异，但OPJ1-300心指数无显著性差异。表1. . OJP1对心肌缺血大鼠ST偏移及心指数、血清酶学的影响（
21、，n=6）Table1. Effect of the OJP1 on ST segment elevation and relative heart weight and serum marker enzymes of myocardial ischema rats（，n=6）GroupsAST(U/L)CK（U/L)CK-MB(U/L)LDH(U/L）ST segment elevation(mv)relative heart weight(mg/g)NC 96.410.6 792.5118.1920.2111.41061.2140.10.0220.010*3.670.31MC161.814
22、.4#1949.6131.4#2119.2119.9#1872.0151.2#0.0780.009 4.180.23#OJP1-100124.612.9*1410.0110.2*1695.082.2*1334.0150.2*0.0260.005* 3.840.20*OJP1-300 149.017.11353.8118.4*1512.0131.6*1365.0146.2*0.0180.005*3.980.25Inderal120.813.2*1024.6116.6*1579.8101.1*1322.096.1*0.0290.009* 3.560.20*GroupsAST(U/L) CK（U/L
23、)CK-MB(U/L)LDH(U/L）ST偏移值(mv)ST segment elevation(mv) 心指数(mg/g)relative heart weight(mg/g) NC 96.410.6 792.5118.1920.2111.41061.2140.10.0220.010*3.670.31MC161.814.4#1949.6131.4#2119.2119.9#1872.0151.2#0.0780.009 4.180.23#OJP1-100124.612.9*1410.0110.2*1695.082.2*1334.0150.2*0.0260.005* 3.840.20*OJP1-3
24、00 149.017.11353.8118.4*1512.0131.6*1365.0146.2*0.0180.005*3.980.25Inderal120.813.2*1024.6116.6*1579.8101.1*1322.096.1*0.0290.009* 3.560.20*注：#P0.01（与正常组比较）；*P0.01（与模型组比较） NC：注：#P0.01（与正常组比较）；*P0.01（与模型组比较）NC，正常组； MC，：模型组； OJPI-100，：麦冬多糖100mg/kg组；OJP1-300，：麦冬多糖300mg/kg组； Inderal：，普萘洛尔10mg/kg组Note: #
25、P0.01(compared with normal control)；*P0.01(compared with model control) ; NC，: normal control；MC，: model control；OJPI-100，: OJP1 100mg/kg treated group；OJPI-300，: OJP1 300mg/kg treated group；Inderal: ，Inderal 10mg/kg treated group2. 麦冬多糖对大鼠血清NO、ET-1、IMA的影响组别 GroupsET-1 (pg/ml) IMA (IU/mL)NO (mol/L)N
26、C1.1580.11796.124.4553.1108.292MC2.6380.193#177.0611.82#22.3376.490#OPJ1-1001.0910.145*133.286.42*35.76714.123*OPJ1-3001.6170.101*138.595.85*27.1983.96Inderal2.0560.100*159.505.6439.5366.586* 模型组大鼠ET-1、IMA含量显著高于正常组（P0.01）。不同剂量的麦冬多糖给药组及普萘洛尔组的ET-1、IMA含量与模型组相比都有不同程度的降低（P0.05）。模型组大鼠NO的含量显著降低（P0.01）。不同剂量
27、的麦冬多糖给药组与普萘洛尔组的NO含量与模型组相比都有不同程度的升高（P0.01）。表2. OJP1对心肌缺血大鼠血清ET-1、IMA、NO含量的影响（，n=6)Table2. Effect of the OJP1 on serumNO、IMA、ET-1in myocardial ischema rats（，n=6）GroupsET-1 (pg/ml)IMA (IU/mL)NO (mol/L)NC1.1580.11796.124.4553.1108.292MC2.6380.193#177.0611.82#22.3376.490#OPJ1-1001.0910.145*133.286.42*35.
28、76714.123*OPJ1-3001.6170.101*138.595.85*27.1983.96Inderal2.0560.100*159.505.6439.5366.586*注：#P0.01（与正常组比较）；*P0.01（与模型组比较）Note: #P0.01(compared with normal control)；*P0.01(compared with model control)表2 OJP1 对心肌缺血大鼠血清ET-1、IMA、NO含量的影响（，n=6)Table2. Effect of the OJP1 on serumNO、IMA、ET-1in myocardial is
29、chema rats（，n=6）3.麦冬多糖 OJP1 对心肌缺血大鼠MDA含量及SOD活力的影响 模型组大鼠心肌组织血清SOD活力显著低于正常组（P0.01），血清MDA含量显著增高。所有药物组治疗后的抗氧化指标均升高（P0.05或P0.01），其中低浓度麦冬多糖给药组含量最高。MDA含量均降低（P0.01），）。其中低剂量麦冬多糖给药组含量为最低。4.麦冬多糖对心肌组织eNOS、ET-1 mRNA表达的影响 模型组大鼠心肌组织ET-1的表达量显著高于正常组，eNOS表达显著降低。给药后， ET-1基因表达显著降低，eNOS基因表达显著升高，但OJP1-100组和OJP1-300组之间无显著
30、性差异。 表3. OJP1 对心肌缺血大鼠MDA含量及SOD活力的影响（，n=6)Table3. Effect of the OJP1 on antioxidant parameters in serum of myocardial ischema rats（，n=6）组别GroupsMDA (nmol/mgprot)SOD (U/mL) NC2.5660.38050.9412.089MC6.9451.372#29.9442.793#OPJ1-1004.9961.054*43.1702.091*OPJ1-3002.9711.443*42.2971.618*Inderal4.7901.676*4
31、8.8593.065*注：#P0.01（与正常组比较）；*P0.05, *P0.01（与模型组比较）Note: #P0.01(compared with normal control)；*P0.05, *P0.01(compared with model control) 图1. OJP对心肌缺血大鼠心肌组织eNOS、ET-1 mRNA表达的影响Fig1. Effect of the OJP1 on the expression of eNOS、ET-1 mRNA in myocardial ischema rats（，n=6）54.麦冬多糖对心肌组织eNOS、ET-1 mRNA表达的影响 模
32、型组大鼠心肌组织ET-1的表达量显著高于正常组，eNOS表达显著降低。给药后， ET-1基因表达显著降低，eNOS基因表达显著升高，但OJP1-100组和OJP1-300组之间无显著性差异。图1. OJP1对心肌缺血大鼠心肌组织eNOS、ET-1 mRNA表达的影响（，n=6）Fig1. Effect of the OJP1 on the expression of eNOS、ET-1 mRNA in myocardial ischema rats（，n=6）5. 麦冬多糖对心肌组织病理形态学及透射电镜超微结构的影响 透射电镜超微结构如图2所示：正常组大鼠心肌正常的肌纤维，肌丝致密，线粒体紧密
33、包包在线在线粒体嵴上，有完整的肌纤维膜。模型组大鼠心肌肌纤维疏松，肌丝溶解严重，线粒体肿胀，空泡变，线粒体嵴紊乱。各麦冬多糖给药组及普萘洛尔组大鼠心肌肌纤维稍疏松，肌丝轻度溶解，线粒体轻微肿胀，线粒体嵴正常，连续。说明麦冬多糖给药组大鼠心肌组织超微结构病变轻微，麦冬多糖能改善心肌缺血大鼠心肌的病理改变。图2. OJP1对心肌缺血大鼠心肌细胞超微结构的影响Fig2. The ultrastructure of cardiomyocytes from the left ventricular anterior free wall at the level 心肌组织经HE染色后，光镜下可见：正常组大
34、鼠可见心肌肌纤维排列整齐，条纹正常，分支清楚，与邻近肌纤维有连续性（A1），胞核明显，染色质清楚；模型组大鼠可见心肌肌纤维紊乱和断裂，部分心肌扭曲，呈波浪形，肌纤维间距增宽(B1)，肌纤维溶解，广泛被破坏，间质水肿，有大量的炎性细胞浸润；而低、高剂量麦冬多糖给药组大鼠可见心肌肌纤维破坏程度较小，肌丝排列较整齐且较紧密，与邻近肌纤维有连续性（C1、 D1），有少量的炎性细胞浸润；普萘洛尔组大鼠可见心肌肌纤维温和的破坏，与邻近肌纤维也存在连续性（E1），未见炎性细胞浸润，但轻度水肿。图3. OJP1对心肌缺血大鼠心肌组织形态学的影响（HE染色400）Fig3. H & E stained sect
35、ions of progressive changes in cardiac myofibres in the left ventricular inner myocardium following the administration of myocardial ischema ratsA1：正常组； B1：模型组；C1：麦冬多糖100 mg/kg组；D1：麦冬多糖300 mg/kg组；E1：普萘洛尔10 mg/kg组Note: A1，normal control；B1，model control；C1，OJP1 100mg/kg treated group；D1，OJP1 300mg/kg
36、 treated group；E1，Inderal 10mg/kg treated group7.麦冬多糖对氧化损伤HUVEC细胞增值的影响 H2O2组的OD值为（0.690.14），显著低于正常组（1.510.16）。各浓度的麦冬多糖均能保护H2O2对HUVEC的氧化损伤作用，麦冬多糖的浓度为0，25，50，100，200 g/mL时抑制率分别为55.957.20，54.356.64，48.208.07，44.227.31，42.583.10，抑制率均有下降。图4.不同浓度麦冬多糖对H2O2损伤HUVEC细胞增殖的影响（，n=6）Fig4. Effects of different dose
37、s of OJP1 protected the HUVEC cells from H2O2 induced cell death （，n=6）86.麦冬多糖对氧化损伤HUVEC细胞内SOD活力和MDA、NO含量的影响如表4所示。与正常对照组相比，HUVEC细胞经1 000 mol/L的H2O2损伤后，细胞内SOD活性显著降低（P0.01），MDA含量显著增高（P0.01），提示细胞氧化损伤严重。与H2O2损伤组相比，不同浓度的麦冬多糖干预后细胞内SOD的含量均显著提高（P0.01）。从图可见，不同浓度的麦冬多糖均能使SOD含量较造模组有一定提高。麦冬多糖干预后细胞内MDA的含量显著降低（P0.
38、05），随着麦冬多糖浓度的降低，MDA的含量逐渐减少。然而麦冬多糖25 g/ml 、50 g/ml、200 g/ml干预组的MDA含量水平下降，但H2O2损伤组相比则无统计学意义。H2O2损伤组NO的含量为（58.360.80）显著低于正常组（122.951.58）（P0.01）。与H2O2损伤组相比，不同浓度的麦冬多糖干预后细胞内NO的含量均显著提高（P0.05或P0.01）。从图可见，随着麦冬多糖浓度的降低，NO的含量逐渐升高，与增值作用的结果一致。表4.麦冬多糖对H2O2损伤HUVEC细胞SOD、MDA与NO的影响Table4. Effects of OJP1 on SOD and MD
39、A and NO of HUVEC cells from H2O2 -induced（，n=6）GroupSOD (U/g)MDA(mol/g)NO(mol/l)NC37.992.171.190.14122.951.58MC12.530.69#1.780.08#58.360.80#OJP1-2562.553.30*1.730.2138.360.59*OJP1-5020.901.70*1.690.1974.732.83*JP1-10031.541.30*1.240.11*72.730.71*OJP1-20028.881.75*1.630.1671.611.34*表4.麦冬多糖对H2O2损伤HUV
40、EC细胞SOD、MDA与NO的影响（，n=6）Table4. Effects of OJP1 on SOD and MDA and NO of HUVEC cells from H2O2 -induced（，n=6）GroupSOD (U/g)MDA(mol/g)NO(mol/l)NC37.992.171.190.14122.951.58MC12.530.69#1.780.08#58.360.80#OJP1-2562.553.30*1.730.2138.360.59*OJP1-5020.901.70*1.690.1974.732.83*JP1-10031.541.30*1.240.11*72.
41、730.71*OJP1-20028.881.75*1.630.1671.611.34*注：#P0.01（与正常组比较）；*P0.01（与模型组比较）Note: #P0.01(compared with normal control)；*P0.01(compared with model control)97. 麦冬多糖对氧化损伤HUVEC细胞内ROS含量的影响 如图53所示。与正常对照组相比，HUVEC细胞经1 000 mol/L的H2O2损伤后，细胞ROS含量显著增加（P0.01），提示细胞发生了氧化应激损伤。与H2O2损伤组相比，不同浓度的麦冬多糖干预后，ROS的含量均显著降低（P0.05
42、或P0.01）。从图可见，麦冬多糖浓度从200 g/ml降低到50 g/ml，ROS的含量逐渐减少。麦冬多糖浓度减低到到25 g/ml时期ROS的含量又稍微增高。表4.麦冬多糖对H2O2损伤HUVEC细胞SOD、MDA与NO的影响（，n=6）组别Group超氧化物歧化酶 (U/g)SOD (U/g)丙二醛(mol/g)MDA(mol/g)NO浓度（mol/l）NO(mol/l)NC37.992.171.190.14122.951.58MC12.530.69#1.780.08#58.360.80#OJP1-2562.553.30*1.730.2138.360.59*OJP1-5020.901.7
43、0*1.690.1974.732.83*OJP1-10031.541.30*1.240.11*72.730.71*OJP1-20028.881.75*1.630.1671.611.34*Table4. Effects of OJP1 on SOD and MDA and NO of HUVEC cells from H2O2 -induced（，n=6）9. 麦冬多糖对氧化损伤HUVEC细胞内ROS含量的影响 如图5所示。与正常对照组相比，HUVEC细胞经1 000 mol/L的H2O2损伤后，细胞ROS含量显著增加（P0.01），提示细胞发生了氧化应激损伤。与H2O2损伤组相比，不同浓度的麦
44、冬多糖干预后ROS的含量均显著降低（P0.05或P0.01）。从图可见，麦冬多糖浓度从200 g/ml降低到50 g/ml，ROS的含量逐渐减少。麦冬多糖浓度减低到25 g/ml时期ROS的含量又稍微增高。图53.麦冬多糖对H2O2损伤HUVEC细胞ROS的影响（，n=6）Fig5Fig3. Effects of OJP1 on ROS of HUVEC cells from H2O2 -induced（，n=6）108. 麦冬多糖对氧化损伤HUVEC细胞凋亡的影响Annexing -FITC/PI双染色的细胞在流式细胞仪上分为4个区域。其中Q1区为机械性损伤的细胞碎片，Q2区为中晚期凋亡细胞
45、和坏死细胞，Q3区为活细胞，Q4区为早期凋亡细胞，Q2+Q4所占百分比为细胞的总凋亡率。如图6所示。与正常对照组5%2%的总凋亡率相比，H2O2损伤组的总凋亡率为43%5%，说明H2O2损伤HUVEC引起细胞的凋亡。麦冬多糖从25g/ml到200g/ml干预组其细胞的总凋亡率分别为255%，242%，256%，264%。与H2O2损伤组相比均能抵抗H2O2引起的细胞凋亡，然而各药物组之间无明显的差别。 图64.流式细胞术检测HUVEC细胞凋亡 图4流式细胞术检测HUVEC细胞凋亡 Fig 64.Flow cytometric analysis of apoptosis.对照组5%2%的总凋亡率相比，H2O2损伤组的总凋亡率为43%5%，说明H2O2损伤HUVEC引起细胞的凋亡。麦冬多糖从25g/ml到200g/ml干预组其细胞的总凋亡率分别为255%，242%，256%，264%
