1、药物制剂与药品质量控制香砂养胃丸气相色谱指纹图谱及多成分的含量测定毛颐晴仝立卿朱颖张庆刘雯婷曹玉(南京市食品药品监督检验院南京)摘 要 目的 建立香砂养胃丸气相色谱指纹图谱及多成分含量测定的方法 方法 采用气相色谱法建立香砂养胃丸指纹图谱并进行峰归属同时测定柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮的含量结果 批香砂养胃丸样品的指纹图谱相似度.共匹配出共有峰 个指认出化合物 个 柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮在测定范围内(.、.、.、.、.、.、.、.)呈良好呈线性关系平均加样回收率分别为.、.、.、.、.、.、.、.分别为.、.、.
2、、.、.、.、.、.种成分的浓度分别为.、.、.、.、.、.、.、.结论 所建立的气相色谱指纹图谱及多成分含量测定方法可用于香砂养胃丸的质量控制和评价关键词 香砂养胃丸 气相色谱法指纹图谱含量测定中图分类号.文献标识码 文章编号()./.开放科学(资源服务)标识码()()().(.).香砂养胃丸为国家基本药物始载于明代万病回春由木香、砂仁、陈皮、枳实、厚朴、香附等 味收稿日期 修回日期 基金 项 目 江 苏 省 市 场 监 督 管 理 局 科 技 项 目()作者简介 毛颐晴()女浙江湖州人主任中药师学士研究方向:中药制剂质量分析:电话:.通信作者 曹玉()男江苏南京人副主任中药师硕士研究方向:
3、药物分析 电话:.药材制成具有温中和胃之功效临床上广泛用于胃阳不足、湿阻气滞所致的胃痛 其中白术、木香、砂仁为君药豆蔻、藿香、陈皮、厚朴、香附为臣药茯苓、枳实、半夏为佐药香砂养胃丸现有水丸、浓缩丸、大蜜丸 种剂型水丸、浓缩丸收载于中华人民共和国药典 年版一部部分厂家的大蜜丸制剂遵循国家食品药品监督管理局国家药品标准()现行标准以显微、薄层鉴别及橙皮苷、厚朴酚与和厚朴酚的含量作为质量评价方法文献报道多集中在非挥发性成分的高效液相色谱指纹图谱研究和木香、砂医药导报 年 月第 卷第 期仁、枳实单味药所含成分的定量研究方中木香、砂仁、豆蔻、广藿香、香附等均含有挥发性成分砂仁、豆蔻挥发油中含桉油精、乙酸
4、龙脑酯、樟脑、龙脑和柠檬烯等砂仁中乙酸龙脑酯含量较高豆蔻中桉油精含量较高具抗菌抑菌、镇痛消炎活性和保护胃黏膜的功能 柠檬烯也是陈皮、枳实挥发油的主要成分 广藿香挥发油的主要成分百秋李醇和广藿香酮具有抗菌、抗炎、免疫调节活性 香附挥发油的主要药效成分 香附酮可通过破坏脑内微管纤维而减轻炎症 中药指纹图谱能综合反映和控制制剂整体质量故而建立气相色谱()指纹图谱同时根据“君、臣、佐、使”中医配伍理论结合中药质量标志物的确认原则选定上述柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮和 香附酮等 种成分为目标进行定量研究旨在对香砂养胃丸中挥发性成分进行全面评价为质量控制提供依据 仪器与试药.
5、仪器 气相色谱仪(美国 公 司)()检 测 器、电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司感量:.、.)色谱柱:毛细管色谱柱(.美国 公司).试药环己烷为分析纯水为纯化水 柠檬烯(批号:含量:.)、桉油精(批号:含量:.)、樟脑(批号:含量:.)、龙脑(批号:含量:.)、乙酸龙脑酯(批号:含量:.)、百 秋 李 醇(批 号:含 量:.)、广藿香酮(批号:)、香附酮(批号:含量:.)、芳樟醇(批号:含 量:.)、榄 香 烯(批 号:含量:.)、木香烃内酯(批号:含量:.)、去氢木香内酯(批号:含量:.)对照品均购自中国食品药品检定研究院桉叶醇(上海诗丹德标准技术服务有限公司批号:含量:.)苍术酮(批号:
6、)样品:批香砂养胃丸市售样品来源于 个厂家包含水丸 个厂家共 批浓缩丸 个厂家共 批大蜜丸 个厂家共 批见表 方法与结果.色谱柱的选择及提取方法的考察由于待测成分较多且包括部分未知成分分别选用、不同极性的色谱柱进行实验结果以 毛细管柱的色谱结果最为理想挥发性成分的提取方式一般包括挥发油提取法和脂溶性溶剂直接提取法以环己烷为溶剂考察了直接超声提取和挥发油提取 种方式结果选用挥发油提取法对样品进行提取可以达到富集待测成分的目的挥发油提取时间考察了、结果表明 可以提取完全表 香砂养胃丸大蜜丸、浓缩丸、水丸样品信息.剂型编号厂家批号大蜜丸浓缩丸水丸编号厂家批号.色谱条件 毛细管柱(.)采用恒流模式流速
7、:.进样口温度:检测器温度:程序升温:初始温度 以 的速率升温至 保持 再以 的升温速率升至 保持 以 升温至 保持 分 流进样分流比为 .溶液的制备.对照品溶液的制备精密称取柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮对照品适量加入环己烷制成每毫升分别含.、.、.、.、.、.、.、.的混合对照品溶液 另精密称取芳樟醇、榄香烯、苍术酮、桉叶醇、木香烃内酯、去氢木香内酯对照品适量加环己烷分别制成每毫升含.、.、.、.、.、.的对照品溶液.供试品溶液的制备 取本品水丸和浓缩丸研细大蜜丸剪碎混匀 水丸、大蜜丸取约 浓缩丸取约 按挥发油提取法自挥发油提取器上端加入环己烷 加热提取
8、 分取环己烷液用无水硫酸钠脱水置 量瓶中用少量环己烷洗涤无水硫酸钠合并环己烷液置 量瓶加环己烷稀释至刻度摇匀即得.单味药材溶液的制备 取砂仁、豆蔻、广藿香、香附、陈皮、枳实、半夏、白术、厚朴、木香、生姜共 味药材各 按“.节”方法制备单味药材溶液.方法学考察.精密度实验取同一份供试品溶液()按“.节”色谱条件连续进样 次以乙酸龙脑酯峰为参照峰计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间的相对标准偏差()结果相对峰面积.相对保留时间.表明仪器精密度良好.稳定性实验 取同一份供试品溶液()分别于、按“.节”色谱条件测定以乙酸龙脑酯峰为参照峰计算各共有峰的相对峰面积、相对保留时间的 值结果相对峰面积.相对
9、保留时间.表明该方法重复性良好.重复性实验 取香砂养胃丸样品()份各 按“.节”处理按“.节”测定以乙酸龙脑酯峰为参照峰计算各共有峰的相对峰面积、相对保留时间的 值结果相对峰面积相对保留时间.表明该方法重复性良好.指纹图谱的质量评价.对照指纹图谱的建立及共有峰的标定取香砂养胃丸样品 批按“.节”制备供试品溶液并进样测定记录 之后的色谱图通过“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(版)”进行分析样品()的色谱图设为参照图谱选用中位数、多点校正和全谱峰匹配生成对照指纹图谱的方法时间窗宽度设置为.分别得到浓缩丸和水(大蜜)丸的对照指纹图谱共标定 个色谱峰见图 .柠檬烯.桉油精.芳樟醇.樟脑.龙脑.乙酸龙脑
10、酯.榄香烯.苍术酮.桉叶醇.百秋李醇.广藿香酮.香附酮.木香烃内酯.去氢木香内酯图 香砂养胃丸(水丸、大蜜丸)指纹图谱.()医药导报 年 月第 卷第 期 .柠檬烯.桉油精.芳樟醇.樟脑.龙脑.乙酸龙脑酯.榄香烯.苍术酮.桉叶醇.百秋李醇.广藿香酮.香附酮.木香烃内酯.去氢木香内酯图 香砂养胃丸(浓缩丸)指纹图谱.().色谱峰归属分析取“.节”的各对照品溶液、供试品溶液和各单味药材溶液适量按“.节”色谱条件分别进样测定通过供试品色谱图与对照品比对以色谱峰保留时间为依据指认了色谱峰 个分别为 号峰(柠檬烯)、号峰(桉油精)、号峰(芳樟醇)、号峰(樟脑)、号峰(龙脑)、号峰(乙酸龙脑酯)、号峰(榄香
11、烯)、号峰(苍术酮)、号峰(桉叶醇)、号峰(百秋李醇)、号峰(广藿香酮)、号峰(香附酮)、号峰(木香烃内酯)、号峰(去氢木香内酯)通过供试品色谱图与各单味药材的 图谱比对以色谱峰保留时间为依据其中、号峰来源于生姜、号峰来源于豆蔻 号峰主要来源于陈皮、枳实、号峰来源于砂仁、号峰来源于白术、号峰来源于木香、号峰来源于广藿香、号峰来源于香附、号峰来源于厚朴 号峰来源于半夏 其中 号峰(乙酸龙脑酯)分离度良好色谱峰保留时间适中峰面积较大故以其作为参照峰().相似度评价将 批样品的 指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价软件进行相似度评价 结果 批样品与对照指纹图谱的相似度结果.不同剂型、不同生产企
12、业相似度结果差异较大部分企业产品相似度结果较低 见表 批次水丸中、批次大蜜丸中 批次浓缩丸中、的相似度均.反映样品中挥发性成分质量控制不理想 相似度受原料质量、储藏、生产工艺的影响较大其中 批次中厚朴酚与和厚朴酚的总量超过法定检验标准限度的近 倍指纹图谱中厚朴特征峰面积也大可能因企业为弥补药材挥发油提取过程中定量成分的损失采用增加药材投料量的方式砂仁、豆蔻、陈皮、枳实的主要挥发性成分为各种烯类、醇类沸点较低生产过程中粉碎干燥工艺影响较大、批次中砂仁、豆蔻、陈皮、枳实的特征峰面积过小或缺失除投料原因外制备工艺中可能存在灭菌干燥温度过高、时间过长的问题 批次相似度结果偏低的浓缩丸中广藿香和香附的特
13、征峰面积较小或缺失可能还和浓缩丸中挥发油提取工艺有关 企业 两批次样品、的相似度仅为.、多个挥发性药材的特征峰缺失提示该企业应重视挥发性药材的质量和储藏条件优化生产工艺.含量测定.系统适用性及专属性实验 取“.节”混合对照品溶液和供试品溶液按“.节”色谱条件进样记录色谱图供试品的 个色谱峰均能达到基线分离按处方要求制备缺砂仁、豆蔻的阴性对照样品缺 表 样品相似度结果.编号相似度.编号相似度.砂仁、豆蔻、生姜的阴性对照样品缺广藿香的阴性对照样品缺香附的阴性对照样品按“.节”制备阴性样 品 溶 液 取 阴 性 样 品 溶 液 及 空 白 溶 剂 按“.节”色谱条件进样注入气相色谱仪测定 结果表明:
14、阴性样品溶液中的其他成分对樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、桉油精、百秋李醇、广藿香酮、香附酮的测定无干扰说明该色谱系统专属性较好 香砂养胃丸处方中陈皮、枳实、砂仁、豆蔻、厚朴等多味药均含柠檬烯故未制备阴性对照样品.线性关系考察 分别精密量取上述混合对照品溶液.、.、.、.、.、.加环己烷稀释至 摇匀依“.节”测定以进样量()为横坐标、峰面积()为纵坐标进行线性回归 个成分的线性范围、回归方程和相关系数见表.精密度实验 取“.节”混合对照品溶液适量按“.节”色谱条件测定记录峰面积结果柠檬表 种成分的线性方程.成分线性范围/()回归方程相关系数/()柠檬烯.桉油精.樟脑.龙脑.乙酸龙脑酯.百秋李醇.广藿香
15、酮.香附酮.烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮的峰面积 分别为.、.、.、.、.、.、.、.表明仪器精密度良好.稳定性实验 取同一批次供试品溶液()分别于制备后、按“.节”色谱条件测定记录峰面积结果柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮的峰面积 分别为.、.、.、.、.、.、.、.表明供试品溶液在室温放置 内稳定性良好.重复性实验取同一批次供试品()按“.节”方法处理 份按“.节”色谱条件测定计算柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮的含量结果含量的 分别为.、.、.、.、.、.、.、.表明该方法重复性良好.回
16、收率实验取已知含量的样品()约 共 份分别加入一定质量浓度的柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮对照品溶液适量按“.节”方法处理依“.节”色谱条件测定计算柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮的平均回收率分别为.、.、.、.、.、.、.、.分别为.、.、.、.、.、.、.、.批 样 品 含 量 测 定 取 批 次 样 品 按“.节”方法处理依“.节”色谱条件测定计算各成分含量结果柠檬烯、桉油精、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、百秋李醇、广藿香酮、香附酮质量浓度分别为.、.、.、.、.、.、.、.相似度结果低于.的 批次样品测定结果见表 医药导报
17、 年 月第 卷第 期表 批次样品含量测定结果 .编号柠檬烯桉油精樟脑龙脑乙酸龙脑酯百秋李醇广藿香酮香附酮.在上述 种测定成分中中华人民共和国药典 年版只对豆蔻中桉油精、砂仁中乙酸龙脑酯、广藿香中百秋李醇进行了限定要求含量不得低于.、.、.根据各药味在不同剂型中的处方量计算 批样品桉油精、乙酸龙脑酯、百秋李醇的实际转移率 结果桉油精平均转移率为.乙酸龙脑酯平 均 转 移 率 为.百 秋 李 醇 平 均 转 移 率 为.批次样品中桉油精转移率均低于 批次乙酸龙脑酯转移率低于 含量均处于较低水平 百秋李醇转移率 批次低于 批次高于批次间含量差异较大 其他 个成分的含量也存在显著性差异 讨论将水丸、大
18、蜜丸的指纹图谱和含量测定结果与浓缩丸进行比较发现浓缩丸的相似度低于水丸、大蜜丸这可能与生产工艺不同有关 种剂型中砂仁、豆蔻的特征峰乙酸龙脑酯和桉油精的含量均处于较低水平但浓缩丸高于水丸、大蜜丸 砂仁、豆蔻为果实类药材乙酸龙脑酯和桉油精主要存在于种子团中其粉碎程度越高粉末放置时间越长挥发油含量越低水丸、大蜜丸均为药材原粉入药浓缩丸中仅砂仁、豆蔻、部分半夏和木香为原粉入药而现行企业粉碎工艺中都是药材总混后进行粉碎水丸、大蜜丸需要打粉的药材更多造成粉碎时间更长粉碎时药材温度过高导致挥发性成分损失更多 浓缩丸中广藿香、香附、厚朴等特征峰强度明显低于水丸、大蜜丸因在浓缩丸工艺中这些药材为提取挥发油后药渣
19、煎煮制成稠膏挥发油未采用包合直接和稠膏、细粉混匀入药挥发油提取与混匀过程中可能造成有效成分的丢失另外现行质量标准中水丸、大蜜丸有 香附酮的薄层鉴别而浓缩丸没有企业往往忽视对挥发性有效成分的控制同一剂型中不同企业样品相似度及含量测定的结果差异较大表明各企业从选材到生产工艺控制都存在差 别 水 丸 中 百 秋 李 醇 的 转 移 率.浓缩丸百秋李醇的转移率从未检出至.即使同一剂型差异也很显著 百秋李醇含量和广藿香药材叶的比例呈正相关不同茎叶比例的广藿香药材投料是造成制剂中百秋李醇的含量差异显著原因之一 批次水丸转移率高于 有 批次表明现行广藿香标准中百秋李醇的限度可能较低 未检测到百秋李醇的厂家存
20、在减量投料或次品投料或制备工艺不严谨的问题挥发油易受外界的影响指纹图谱及含量测定结果表明挥发性成分在香砂养胃丸中的控制并不理想传统生产工艺有待改善 生产工艺中企业可对粉碎至投料的间隔时间予以控制摸索合理的药材灭菌方式、制剂干燥的温度时间砂仁、豆蔻采用几乎不产热的万能粉碎机单独打粉再和其他药材粉末混和浓缩丸提取的挥发油采用包合的方式以保证挥发油类物质在香砂养胃丸中的量值传递 本研究建立了香砂养胃丸的 指纹图谱同时对 种挥发性成分进行含量测定为香砂养胃丸挥发性成分的鉴别和质量控制提供了可靠的技术支持能更加全面地对香砂养胃丸的质量进行评价参考文献 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:中
21、国医药科技出版社:.国家药典委员会.中华人民共和国药典临床用药须知:中药成方制剂卷.北京:中国医药科技出版社:.王艳慧周琳琳雷敬卫等.香砂养胃丸(浓缩丸)不同极性部位 指纹图谱研究.药物分析杂志():.程雅婷王晓云王学涛等.香砂养胃丸(水丸)的特征图谱研究.食品与药品():.程雅婷王晓云王艳博等.香砂养胃丸中枳实质量标准的改进.中国现代中药():.程雅婷王晓云王学涛等.法测定香砂养胃丸中木香烃内酯及去氢木香内酯含量.中国药师():.刘中和姚卫波.气相色谱法测定香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量.质量安全与检验检测():.陈树东邓婕陈智安等.气相色谱质谱联用法比较分析不同产地砂仁挥发油成分
22、.上海中医药杂志():.朱缨谈如蓝吴芝园等.豆蔻果实挥发油成分研究.亚太传统医药():.侯明槠常聪陈林霖等.桉油精的药理作用研究进展.中国现代应用药学():.许姗姗许浚张笑敏等.常用中药陈皮、枳实和枳壳的研究进展及质量标志物的预测分析.中草药():.朱丽云柳小莉郑琴等.陈皮挥发油质量标志物预测及 定量分析.中国中药杂志():.荆文光郭晓晗李楚等.基于质量源于生产的广藿香质量标志物的确立.中草药():.王凤霞钱琪李葆林等.香附化学成分和药理作用研究进展及质量标志物()预测分析.中草药():.梁洁祁金丽杨川川等.三七姜高效液相色谱指纹图谱建立及 种成分含量测定.医药导报():.熊鑫黄传奇程璐等.高效液相色谱指纹图谱联合一测多评法评价白虎汤质量.医药导报():.蔡晓翠丁曼李俊等.比那甫西颗粒的指纹图谱及含量测定方法研究.医药导报():.彭新航肖凌费毅琴等.基于指纹图谱及多成分含量测定快速筛查苍术混伪品.医药导报():.陈方园张云静赵冰等.华佗救心丸 特征图谱及 个成分的含量测定.药物分析杂志():.孟萌李凤丽吴娇.双香退热口服液 指纹图谱分析及 种指标成分含量测定.中国现代应用药学():.刘昌孝陈士林肖小河等.中药质量标志物():中药产品质量控制的新概念.中草药():.杨江燕李兆奎李玲燕.砂仁临方炮制乙酸龙脑酯含量的比较研究.浙江中医药():.医药导报 年 月第 卷第 期
