1、2023年1月6日 博康www.zj- 1 细菌内毒素限量检查讲义 透析用水、透析液 讲 解 董光宴 1、试验条件必备 2、标准要求 3、供试品溶液的制备 4、限量检查 湛江博康海洋生物有限公司 2023年1月6日 博康www.zj- 2 一、试验条件必备 1、经过培训合格的实验人员；2、实验室条件；3、必备的实验材料。2023年1月6日 博康www.zj- 3 3 必备的实验材料 3.1 必备材料 鲎试剂盒：具有国家批准文号，并依法检验合格。如：湛江博康海洋生物有限公司，卫药准字（88）SJ-04。2023年1月6日 博康www.zj- 4 试剂名称 用 途 1 鲎试剂 反应主剂鲎试剂与 2
2、 内毒素工作品 阳性对照 3 检查用水 样本溶解鲎试剂与样本溶解 4 酸性调节剂 调节透析液的PH值【组成成份】每盒试剂组成 每盒试剂配套试验耗材：无热原试管5ml6支；无热原试管2ml6支；无热原吸嘴 0.25ml15支。2023年1月6日 博康www.zj- 5 实验室要求洁净，无尘埃流通，室内温度要求2025为宜。必要时应在超净工作台操作。2023年1月6日 博康www.zj- 6 恒温箱。旋涡振荡器。其它器具：消毒棉球，剪刀和封口膜等。2023年1月6日 博康www.zj- 7 3.2 取样 取样器具必须符合2010年版中国药品检验标准操作规范310页细菌内毒素检查法“3 实验准备”规
3、定：无外源性内毒素。必要时可以用真空采血管（无添加剂）取样。2023年1月6日 博康www.zj- 8 二、复用设备及用水要求二、复用设备及用水要求 血液透析器复用操作规范5.1.2 水质要求：应定期检测复用用水细菌和内毒素的污染程度。应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检测。内毒素含量不得超过2EU/ml，干预限度为1EU/ml。当达到干预限度时，继续使用水处理系统是可以接受的，但应采取措施，防止系统污染进一步加重。2023年1月6日 博康www.zj- 9 5 5 复用设备及用水要求复用设备及用水要求 5.1.3 水质细菌学、内毒素检测时间：最初应每周检测1次，连续2次检
4、测结果符合要求后，细菌学检测应每月1次，内毒素检测应每3个月至少1次。2023年1月6日 博康www.zj- 10 三、供试品溶液的制备 透析用水需进行稀释。一般要求供试品溶液的PH值在6.08.0的范围内。对于透析液，需调节PH值，可使用酸性调节剂调节PH值。2023年1月6日 博康www.zj- 11 四四 限量检查限量检查 透析用水、透析液已有内毒素检验标准，可直接进行内毒素检查。2023年1月6日 12 博康www.zj- 1、试剂和样品 鲎试剂盒（生产单位：湛江博康海洋生物有限公司，灵敏度：0.125EU/ml）细菌内毒素检查用水 细菌内毒素工作标准品（10EU）透析用水 2023年
5、1月6日 13 博康www.zj- 2、限值的确定 内毒素限值L=1.0EU/ml。2023年1月6日 博康www.zj- 14 3、计算稀释倍数MVD=L/=1.0EU/ml/0.125EU/ml=8倍 2023年1月6日 博康www.zj- 15 4、操作方法 编号 名称 A 样品管 B 样品阳性对照 C 阳性对照 D 阴性对照 2023年1月6日 博康www.zj- 16 透析用水 8倍稀释液 0.2ml 图 示 4.1 供试品溶液的制备 1.4ml 2023年1月6日 博康www.zj- 17 4.2 阳性对照 检验鲎试剂活性及试验有效性。4.3 阴性对照 检验试验操作及环境是否对试验
6、有污染。0.25EU/ml 2023年1月6日 博康www.zj- 18 补充：内毒素标准品的正确开启方法 取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程应防止玻璃屑落入瓶内。正确正确（易折点）（易折点）错误错误 2023年1月6日 博康www.zj- 19 注意：1、只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上。2、只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品。2023年1月6日 博康www.zj- 20 0.25EU/ml 0.2ml 0.2ml 1.8ml 0.6
7、ml 图 示 1EU/ml 10EU/ml 2023年1月6日 博康www.zj- 21 4.4 供试品阳性对照 目的是为了验证透析用水中有内毒素可以被检测出来。0.25EU/ml0.25EU/ml/8 8倍倍 2023年1月6日 博康www.zj- 22 5 鲎试剂的准备 取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，放在试管架上，排成4列，每列2支。轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。2023年1月6日 博康www.zj- 23 6 加样 其中2支加入0.1ml的0.25EU/ml的内毒素标准溶液
8、作为阳性对照;2支加入0.1ml的透析用水8倍稀释液作为供试品管;2支加入0.1ml的透析用水8倍稀释液和0.1ml的0.25EU/ml的内毒素标准溶液作为供试品阳性对照;2支加入0.2ml的检查用水作为阴性对照。2023年1月6日 博康www.zj- 24 加样结束后，将鲎试剂用医用胶布封口，轻轻振动混匀，连同试管架放入37水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60分钟。2023年1月6日 博康www.zj- 25 7 结果判断 保温60分钟2分钟后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。2023年1月
9、6日 博康www.zj- 26 若溶液A的两个平行管均为阴性，判供试品符合规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；否则判供试品不符合规定。2023年1月6日 博康www.zj- 27 供试品 供试品阳性对照 阳性对照 阴性对照-+-结果是否有效 有效 结果判断 合格 8 结果记录 2023年1月6日 博康www.zj- 28 湛江博康海洋生物有限公司 讲 解 董光宴 通信地址：广东省湛江市麻章区瑞云南路188号 邮政编码：524094 联系电话：0759-2732555-603 13828262866 企业网址：www.zj- E-mail:
