1、I C S6 7.0 5 0C C SX0 4中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 3 5 72 0 2 1 出口保健食品中多类非法添加物的测定液相色谱-质谱/质谱法D e t e r m i n a t i o n o f m u l t i-g r o u p s o f i l l e g a l a d d i t i v e s i n h e a l t h f o o d s f o r e x p o r tL C-M S/M S M e t h o d2 0 2 1-1 1-2 2发布2 0 2 2-0 6-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布以正式出版文本为准
2、以正式出版文本为准前 言本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:上海海关动植物与食品检验检疫技术中心、厦门海关技术中心、南京海关动植物与食品检测中心、合肥海关技术中心、厦门医学院、中华人民共和国鲅鱼圈海关。本文件主要起草人:李优、伊雄海、徐敦明、盛永刚、时逸吟、曾静、赵善贞、宋蓉蓉、柳菡、韩芳、邓晓军、丁涛、林天闻。S N/T5 3 5 72 0 2 1以正式出版文本为准以正式出版文本为准出
3、口保健食品中多类非法添加物的测定液相色谱-质谱/质谱法1 范围 本文件规定了保健食品中5 1种非法添加物的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于片剂、口服液、胶囊剂、煎膏剂和丸剂类型保健食品中阿普唑仑、氨基他达拉非、异戊巴比妥、巴比妥、比沙可啶、溴替唑仑、咖啡因、头孢氨苄、氯氮卓、氯美扎酮、氢溴酸西酞普兰、氯巴占、氯硝西泮、盐酸可乐定、氯帕胺、地洛西泮、地西泮、麻黄碱、艾司唑仑、芬氟拉明、氟硝安定、氟西泮、格列齐特、格列吡嗪、氢氯噻嗪、异克舒令、劳拉西泮、盐酸氯卡色林、甲苯喹唑酮、马来酸咪达唑仑、去甲基他达拉非、硝西泮、奥沙西泮、氧烯洛尔、青霉素钾、酒石酸苯二甲吗啉、苯乙双胍、盐酸苯甲吗啉
4、、苯巴比妥、盐酸酚妥拉明、保泰松、吡罗昔康、普伐他汀钠、瑞格列奈、沙格列汀、司可巴比妥、西布曲明、马来酸噻吗洛尔、甲苯磺丁脲、三唑仑、盐酸唑拉西泮的测定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法提要 片剂、口服液、胶囊剂、煎膏剂和丸剂试样中的非法添加物用甲醇提取,经基质分散固相萃取(Q u E C h E R S)净化,用液
5、相色谱-质谱/质谱仪测定,基质匹配外标法定量。5 试剂材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为G B/T 6 6 8 2规定的一级水。5.1 试剂5.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。5.1.2 乙腈(CH3C N):色谱纯。5.1.3 甲酸(CH2O2):色谱纯。5.1.4 无水硫酸镁(M g S O4):研磨后在5 0 0 马弗炉内烘5 h,2 0 0 时取出装瓶,贮于干燥器中,冷却后备用。1S N/T5 3 5 72 0 2 1以正式出版文本为准5.1.5 氯化钠(N a C l)。5.1.6 柠檬酸钠(N a3C6H5O7)。5.1.7 柠檬酸氢二钠(N a2C6H6O7)。5.
6、2 溶液配制 0.1%甲酸-水溶液:移取1 m L甲酸至1 L容量瓶,用水定容至刻度。5.3 标准品 阿普唑仑、氨基他达拉非、异戊巴比妥、巴比妥、比沙可啶、溴替唑仑、咖啡因、头孢氨苄、氯氮卓、氯美扎酮、氢溴酸西酞普兰、氯巴占、氯硝西泮、盐酸可乐定、氯帕胺、地洛西泮、地西泮、麻黄碱、艾司唑仑、芬氟拉明、氟硝安定、氟西泮、格列齐特、格列吡嗪、氢氯噻嗪、异克舒令、劳拉西泮、盐酸氯卡色林、甲苯喹唑酮、马来酸咪达唑仑、去甲基他达拉非、硝西泮、奥沙西泮、氧烯洛尔、青霉素钾、酒石酸苯二甲吗啉、苯乙双胍、盐酸苯甲吗啉、苯巴比妥、盐酸酚妥拉明、保泰松、吡罗昔康、普伐他汀钠、瑞格列奈、沙格列汀、司可巴比妥、西布曲
7、明、马来酸噻吗洛尔、甲苯磺丁脲、三唑仑、盐酸唑拉西泮标准品,纯度均9 5%,详细信息见附录A。5.4 标准溶液配制5.4.1 标准储备液:精确称取上述标准品(5.3)1 m g(精确至0.1 m g)至1 0 m L容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,配制成1 0 0 g/m L的标准储备液,于-1 8 避光保存,有效期为6个月。5.4.2 混合标准中间溶液:准确移取混合标准储备液(5.4.1)1 m L至1 0 m L容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配制成1 0 g/m L的混合标准中间溶液,于-1 8 避光保存,有效期为6个月。5.4.3 混合标准工作溶液:准确移取混合标准储备液(5.4.1)1
8、 0 L至1 0 m L容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配制成1 0 0 n g/m L的混合标准工作溶液,现用现配。5.5 材料5.5.1 十八烷基硅烷键合硅胶(C1 8):4 0 m6 0 m。5.5.2 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶(P S A):4 0 m6 0 m。5.5.3 石墨化碳黑(G C B):4 0 m1 2 0 m。5.5.4 微孔滤膜:0.2 2 m,尼龙针式过滤器。6 仪器与设备6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源(E S I)。6.2 电子天平:感量为0.0 0 0 1 g。6.3 离心机:最大转速为4 0 0 0 r/m i n、1 0 0 0 0 r/m
9、i n。6.4 旋涡混匀器。7 试样制备与保存7.1 片剂、丸剂 取代表性样品,片剂和丸剂用粉碎机捣碎并混合混匀;分成两份,分别装入洁净的容器中,密封并标识,将试样置于-1 8 以下保存。2S N/T5 3 5 72 0 2 1以正式出版文本为准7.2 胶囊剂7.2.1 硬胶囊 取代表性样品,连胶囊壳一起用粉碎机捣碎并混合混匀,分成两份,分别装入洁净的容器中,密封并标识,将试样置于-1 8 以下保存。7.2.2 软胶囊 取代表性样品,将胶囊壳与内容物分离,胶囊壳用粉碎机捣碎,与内容物一起混合混匀,分成两份,分别装入洁净的容器中,密封并标识,将试样置于-1 8 以下保存。7.3 煎膏剂、口服液
10、取代表性样品混匀,分成两份,分别装入洁净的容器中,密封并标识,将试样置于-1 8 以下保存。8 分析步骤8.1 口服液称取0.5 g(精确至0.0 0 1 g)试样于1 0 m L容量瓶中,以甲醇定容至刻度,摇匀,过0.2 2 m尼龙滤膜,上机测定。若检测结果超过标准曲线线性范围,以甲醇稀释上机液浓度至线性范围内测定。8.2 片剂、胶囊剂、丸剂、煎膏剂8.2.1 提取 称取1 g(精确至0.0 0 1 g)试样于5 0 m L离心管中,加入1 0 m L甲醇,涡旋振荡2 m i n,超声3 0 m i n,加入4 g M g S O4、1 g N a C l、1 g N a3C6H5O7、0.
11、5 g N a2C6H6O7,迅速剧烈振荡5 m i n,4 0 0 0 r/m i n离心 5 m i n,上清液待净化。8.2.2 净化 吸取1 m L上层清液至2 m L离心管中,加入5 0 m g P S A、1 5 0 m g M g S O4、7.5 m g G C B、5 0 m g C1 8,涡旋振荡2 m i n,1 0 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,吸取5 0 0 L上层清液,以甲醇定容至1 m L,过0.2 2 m尼龙滤膜,上机测定。若检测结果超过标准曲线线性范围,将样品以甲醇稀释浓度至线性范围内测定。8.3 空白样品溶液的制备 取不含非法添加物的样品,按
12、8.18.2步骤制备。8.4 空白基质液的制备8.4.1 口服液 称取0.5 g(精确至0.0 0 1 g)不含非法添加物的试样于5 m L容量瓶中,以甲醇定容至刻度,摇匀,过0.2 2 m尼龙滤膜待用。8.4.2 片剂、胶囊剂、丸剂、煎膏剂 称取1 g(精确至0.0 0 1 g)不含非法添加物样品于5 0 m L离心管中,按7.2.1提取,吸取1 m L上层清液至2 m L离心管中,准确加入5 0 m g P S A、1 5 0 m g M g S O4、7.5 m g G C B、5 0 m g C1 8,涡旋振荡3S N/T5 3 5 72 0 2 1以正式出版文本为准2 m i n,1
13、 0 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,吸取上层清液,过0.2 2 m尼龙滤膜待用。8.5 混合基质标准曲线溶液的配制8.5.1 7种非法添加物(苯巴比妥、巴比妥、氯美扎酮、异戊巴比妥、司可巴比妥、普伐他汀钠和格列齐特)分别准确吸取5 L、1 0 L、2 0 L、5 0 L、1 0 0 L、2 0 0 L混合标准中间溶液(5.4.2),用甲醇定容至1 m L,再以空白基质液(8.4)11稀释,配成浓度为2 5 n g/m L、5 0 n g/m L、1 0 0 n g/m L、2 5 0 n g/m L、5 0 0 n g/m L、1 g/m L,现用现配。8.5.2 4 4种非法
14、添加物(5 1种非法添加物除8.4.1的7种之外)分别准确吸取1 0 L、2 0 L、4 0 L、1 0 0 L、2 0 0 L、4 0 0 L混合标准工作溶液(5.4.3),用甲醇定容至1 m L,再以空白基质液(8.4)11稀释,配成浓度为0.5 n g/m L、1 n g/m L、2 n g/m L、5 n g/m L、1 0 n g/m L、2 0 n g/m L的混合基质标准曲线溶液,现用现配。8.6 测定8.6.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下:a)色谱柱:C 1 8,长1 5 0 mm,内径3.0 mm,粒径2.7 m,或相当者;b)流动相:A:0.1%甲酸-水溶液;B:乙腈,
15、梯度洗脱程序见表1;c)流速:0.3 0 m L/m i n;d)柱温:3 0;e)进样量:1 L。表1 流动相梯度洗脱程序时间(m i n)流动相A(%)0.1%甲酸-水溶液流动相B(%)乙腈0.09 550.59 551.59 01 02 0.001 0 02 5.001 0 03 0.09 558.6.2 质谱条件 质谱条件参见附录B。8.6.3 定性测定 在8.6.1、8.6.2节的仪器条件下,对混合基质标准曲线溶液和和样品溶液进样。样品溶液中色谱峰的保留时间与混合基质标准曲线溶液中的色谱峰的保留时间相差不超过2.5%,且在扣除背景后的样品质谱图中,所有定量离子对、定性离子对均出现,且
16、定性离子对的相对离子丰度的偏差不超过表2规定的范围,则可判断样品中存在对应的被测物。4S N/T5 3 5 72 0 2 1以正式出版文本为准表2 定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度5 0%2 0%5 0%1 0%2 0%1 0%允许的相对偏差2 0%2 5%3 0%5 0%8.6.4 定量测定 基质匹配外标法定量。样品溶液中目标物的响应值应在仪器测定的线性范围内。若检测结果超出线性范围,将样品以甲醇稀释浓度至线性范围内测定。在8.6.1、8.6.2节的色谱条件下非法添加标准品多反应检测(MRM)色谱图参见附录C中的图C.1、C.2、C.3。9 结果计算和表达 结果用色谱数据处理机或按(1)式计算试样中非法添加物的含量,计算结果需扣除空白值:X=cV1 0 0 0m1 0 0 01 0 0 0(1)式中:X 试样中非法添加物的含量,单位为毫克每千克(m g/k g);c 从标准工作曲线得到的非法添加物浓度,单位为微克每毫升(n g/m L);V 试样溶液定容体积,单位为毫升(m L);m 最终定容体积试样溶液所代表的试样质量,单位为克(g)。1 0 检出限和定量限1 0.1
