1、I C S6 7.0 5 0C C SX0 4中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T2 9 2 22 0 2 2代替 S N/T 2 9 2 22 0 1 1 出口保健食品中E P A、D H A和A A的测定气相色谱法D e t e r m i n a t i o n o f e i c o s a p e n t a e n o i c a c i d(E P A)、d o c o s a h e x a e n o i c a c i d(D H A)a n d A r a c h i d o n i c a c i d(A A)i n h e a l t h f o o d s
2、 f o r e x p o r tG a s c h r o m a t o g r a p h y2 0 2 2-0 3-1 4发布2 0 2 2-1 0-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准前 言本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。本文件代替S N/T 2 9 2 22 0 1 1 出口食品中E P A和DHA的测定 气相色谱法,与S N/T 2 9 2 22 0 1 1相比,主要技术变化如下:更改了标准名称;检测对象增加了顺式-5,8,1 1,1 4-二十碳四烯酸(AA)的测
3、定。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国广州海关。本文件主要起草人:陈捷、叶弘毅、孙灵慧、徐娟、王岚。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:2 0 1 1年首次发布为S N/T 2 9 2 22 0 1 1;本次为第一次修订。S N/T2 9 2 22 0 2 2以正式出版文本为准以正式出版文本为准出口保健食品中E P A、D H A和A A的测定气相色谱法1 范围本文件规定了出口保健食品中顺式-5,8,1 1,1 4,1 7-二十碳五烯酸(简称 E P A)、顺式-4,7,1 0
4、,1 3,1 6,1 9-二十二碳六烯酸(简称 DHA)和顺式-5,8,1 1,1 4-二十碳四烯酸(简称 AA)的气相色谱测定方法。本文件适用于出口鱼油和鱼油复合胶囊制品中E P A、DHA、AA含量的测定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件,不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 6 6 8 2 分析实验用水规格和试验方法。3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法提要样品中E P A甘油酯、DHA甘油酯、AA甘油酯和游离的E P A、DHA
5、、AA经氢氧化钠甲醇溶液和三氟化硼甲醇溶液甲酯化,异辛烷提取,采用气相色谱配氢火焰离子检测器(F I D)检测,内标法定量。5 试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,所用试剂对测定无干扰,实验用水为符合G B/T 6 6 8 2规定的一级水。5.1 异辛烷。5.2 甲醇。5.3 1 2%三氟化硼甲醇溶液。5.4 氢氧化钠。5.5 氯化钠。5.6 氢氧化钠甲醇溶液(0.5 m o l/L):称取2.0 g氢氧化钠,加1 0 0 m L甲醇溶解。5.7 饱和氯化钠溶液:3 6 g氯化钠,溶于1 0 0 m L水中。5.8 标准物质5.8.1 二十三酸甲酯:C A S N o.2 4 3 3-
6、9 7-8,相对分子质量为3 6 8.6 4,纯度9 9.0%,内标物。5.8.2 E P A甲酯:C A S N o.2 7 3 4-4 7-6,相对分子质量为3 1 6.4 8,纯度9 9.0%。5.8.3 DHA甲酯:C A S N o.2 5 6 6-9 0-7,相对分子质量为3 4 2.5 1,纯度9 9.0%。1S N/T2 9 2 22 0 2 2以正式出版文本为准5.8.4 AA甲酯:C A S N o.2 5 6 6-8 9-4,相对分子质量为3 1 8.4 9,纯度9 9.0%。5.9 标准溶液配制5.9.1 内标二十三酸甲酯储备液:准确称取适量二十三酸甲酯(精确到0.0
7、0 0 1 g),用异辛烷溶解,配制成浓度为1.0 0 m g/m L的内标储备液。5.9.2 E P A甲酯储备液:准确称取适量E P A甲酯(精确到0.0 0 0 1 g),用异辛烷配制成浓度为1 0 0.0 m g/m L的标准储备液。5.9.3 DHA甲酯储备液:准确称取适量DHA甲酯(精确到0.0 0 0 1 g),用异辛烷配制成浓度为1 0 0.0 m g/m L的标准储备液。5.9.4 AA甲酯储备液:准确称取 适量AA甲酯(精确到0.0 0 0 1 g),用 异 辛 烷 配 制 成 浓 度 为1 0 0.0 m g/m L的标准储备液。注:上述标准溶液应于-1 8 冰箱中保存。
8、6 仪器和设备6.1 气相色谱仪:配有氢火焰离子检测器(F I D)。6.2 天平:感量0.0 0 0 1 g。6.3 旋涡震荡器。6.4 烘箱:2 5 2 0 0,1。6.5 氮气吹干仪。6.6 甲酯化反应瓶:带聚四氟乙烯垫旋盖的顶空进样瓶或玻璃试管,2 5 m L。6.7 玻璃刻度试管:5.0 m L,具塞。7 测定步骤7.1 准确移取内标二十三酸甲酯储备液(5.9.1)2.0 m L(相当于內标物2.0 m g)于甲酯化反应瓶(6.6)中,用氮气吹干,待用。如果不马上使用,甲酯化反应瓶应于-1 8 冷冻储存。7.2 称取试样(胶囊样品取内含物)0.0 2 g(精确至0.0 0 0 1 g
9、)于含有内标二十三酸甲酯储备液的甲酯化反应瓶中(7.1),加1.5 m L 0.5 m o l/L氢氧化钠甲醇溶液(5.6),充入氮气,加盖密封,旋涡震荡混匀,置于1 0 0 烘箱内,加热5 m i n,冷却,加2 m L 1 2%三氟化硼甲醇溶液(5.3),充入氮气,加盖密封,旋涡震荡混匀,置于1 0 0 烘箱内,加热3 0 m i n,冷却至3 0 4 0,注入1 m L异辛烷,趁热涡旋振荡3 0 s,再注入5 m L饱和氯化钠溶液(5.7),涡旋振荡,冷却至室温,静置分层,将异辛烷层移入玻璃刻度试管,充入氮气,加盖。在水相中再加入1 m L异辛烷,重复萃取一次,合并异辛烷提取液,通氮气浓
10、缩至1.0 m L,待测。7.3 标准系列工作液配制:准确移取E P A甲酯(5.9.2)、DHA甲酯(5.9.3)和AA甲酯(5.9.4)适量,再在每个容量瓶中加入相同量的内标适量,用异辛烷定容,配制成标准系列工作液,E P A甲酯、DHA甲酯和AA甲酯的浓度依次为0.0 2 m g/m L、0.5 m g/m L、1.0 m g/m L、2.0 m g/m L、4.0 m g/m L、1 0.0 m g/m L,内标浓度均为2.0 m g/m L。标准工作曲线溶液现用现配。7.4 测定7.4.1 气相色谱条件7.4.1.1 色谱柱:D B-2 3毛细管柱,6 0 m0.2 5 mm(i.d
11、.)0.1 5 m,或性能相当者。7.4.1.2 升温程序:1 5 0(2 m i n)3/m i n 2 0 0 2/m i n 2 2 0(2 m i n)2 5/m i n 2 3 0(2 m i n)。7.4.1.3 进样口温度:2 5 0。7.4.1.4 检测器温度:2 8 0。2S N/T2 9 2 22 0 2 2以正式出版文本为准7.4.1.5 载气:氮气(纯度9 9.9 9 9%),流量2.0 m L/m i n。7.4.1.6 进样模式:分流进样,分流比3 01。7.4.1.7 进样量:1.0 L。7.4.2 气相色谱测定内标法定量:标准工作溶液(7.3)和样液等体积参插进
12、样测定。以标准溶液中被测组分峰面积和二十三酸甲酯峰面积的比值为纵坐标,标准溶液中被测组分浓度与二十三酸甲酯浓度的比值为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,标准工作溶液和样液中待测物响应值均应在仪器检测线性范围内。在上述色谱条件下,AA甲酯的保留时间约为2 0.2 m i n,E P A甲酯的保留时间约为2 1.3 m i n,DHA甲酯的保留时间约为2 5.4 m i n,内标二十三酸甲酯的保留时间约为2 2.9 m i n。标准品的色谱图参见附录A中图A.1。8 结果计算和表述用气相色谱数据处理软件或按照式(1)计算试样中E P A或DHA或AA的含量:X=CsAciAs
13、iVkAscs iAim(1)式中:X 试样中E P A或DHA或AA含量,单位为毫克每克(m g/g);cs 标准溶液中E P A甲酯或DHA甲酯或AA甲酯的浓度,单位为毫克每毫升(m g/m L);A 试样中E P A甲酯或DHA甲酯或AA甲酯的峰面积;ci 试样溶液中内标二十三酸甲酯的浓度,单位为毫克每毫升(m g/m L);As i 标准溶液中内标二十三酸甲酯的峰面积;V 最终样液的定容体积,单位为毫升(m L);k 0.9 5 6或0.9 5 9;0.9 5 6为E P A甲酯和AA甲酯换算为E P A和AA的换算因子;0.9 5 9为DHA甲酯换算为DHA的换算因子;As 标准溶液
14、中E P A甲酯或DHA甲酯或AA甲酯的峰面积;cs i 标准溶液中内标二十三酸甲酯的浓度,单位为毫克每毫升(m g/m L);Ai 试样中内标二十三酸甲酯的峰面积;m 最终样液所代表试样量,单位为克(g)。注:计算结果应表示到小数点后一位。9 定量限和回收率9.1 定量限本方法E P A、DHA和AA的定量限均为1.0 m g/g。9.2 回收率在各种鱼油中,E P A、DHA和AA的 回收率范围 分别为9 7.1%1 0 2%、9 7.2%1 0 2%和9 7.0%1 0 3%,参见附录B。3S N/T2 9 2 22 0 2 2以正式出版文本为准附 录 A(资料性)E P A甲酯、D H
15、 A甲酯和A A甲酯的标准品气相色谱图 E P A甲酯、DHA甲酯和AA甲酯的标准品气相色谱图如图A.1所示。标引序号说明:1 AA甲酯;2 E P A甲酯;3 内标二十三酸甲酯;4 DHA甲酯。图A.1 E P A甲酯、D H A甲酯和A A甲酯的标准品气相色谱图(G C-F I D)4S N/T2 9 2 22 0 2 2以正式出版文本为准附 录 B(资料性)E P A、D H A和A A的回收率数据 E P A、DHA和AA的回收率数据见表B.1。表B.1 E P A、D H A和A A的回收率样品名称添加水平m g/g回收率范围/%E P ADHA添加水平m g/g回收率范围/%AA深
16、海鱼油胶囊5 0.09 7.41 0 09 7.61 0 11 0.09 7.61 0 21 0 09 8.19 9.69 7.81 0 15 0.09 7.51 0 22 0 09 8.81 0 09 8.71 0 11 0 09 8.41 0 1鱼油DHA提取物5 0.09 8.01 0 19 7.51 0 11 0.09 8.21 0 21 0 09 9.21 0 19 8.01 0 05 0.09 8.01 0 22 0 09 9.11 0 19 9.61 0 11 0 09 9.01 0 1鱼油E P A提取物5 0.09 7.11 0 29 8.01 0 21 0.09 7.41 0 31 0 09 8.81 0 19 8.21 0 15 0.09 7.71 0 12 0 09 9.11 0 19 8.81 0 11 0 09 8.11 0 1金枪鱼鱼油5 0.09 8.31 0 19 7.61 0 11 0.09 7.41 0 21 0 09 8.71 0 19 8.31 0 15 0.09 9.01 0 22 0 09 9.11 0 19 8.51 0 01 0 09
