1、天道酬勤HPLC法分析川芎-香附配伍前后指标成分的变化柴胡香附川芎作者简介 张文娟，女，主管药师，硕士，主要从事中药化学成分分析。 通讯作者 王庆伟，男，主管药师，博士，主要从事药物代谢动力学及透皮制剂的研究。 目的：研究药对川芎-香附配伍对单味药材中指标成分的影响。方法：以川芎嗪、阿魏酸、藁本内酯和-香附酮为指标成分，采用HPLC法分析川芎、香附及川芎-香附配伍前后变化。色谱条件：色谱柱为Inertsil ODS-34.6 mm250 mm，5 m；流动相为：甲醇-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱，020 min：45%48%甲醇；2025 min：48%70%甲醇；2550 min：70%75
2、%甲醇；5055 min：75%100甲醇；5560 min：100%45%甲醇，检测波长为270 nm。结果：药对中指标成分川芎嗪、阿魏酸、藁本内酯含量与单味药材相比均有所增大。结论：川芎-香附配伍前后特征峰面积均发生明显变化。 关键词 HPLC；川芎-香附；川芎嗪；阿魏酸；藁本内酯；-香附酮 中图分类号 R284.2文献标识码A 文章编号1673-7210202307b-096-03 Analysis of the diversify in the matched pair of Chuanxiong Rhizoma and Cyperi Rhizoma by HPLC ZHANG Wen
3、juan, XU Yuan, WANG Qingwei Department of Pharmacy, Tangdu Hospital, the Fourth Military Medical University, Xian 710038, China Abstract Objective: To study the effect on the index component of Chuanxiong Rhizoma and Cyperi Rhizoma after matched. Methods: The ligustrazine, ferulic aid and ligustilid
4、e were used as the index ingredients to analyze the diversity in the matched pair of Chuanxiong Rhizoma and Cyperi Rhizoma by HPLC. The Inertsil ODS-3 (4.6 mm250 mm, 5 m) column was used; methanol-0.05% phosphoric acid was used as mobile phase in a gradient elution(0-20 min: 45%-48% methanol; 20-25
5、min: 48%-70% methanol; 25-50 min: 70%-75% methanol; 50-55 min: 75%-100% methanol; 55-60 min: 100%-45% methanol). The detective wavelength was 270 nm, and the flow rate was about 1 ml/min. Results: The concentration of ligustrazine, ferulic acid and ligustilide in crude drug pairs were increased comp
6、ared with the single plant medicine. Conclusion: The peak area has changed absolutely after matched. Key words HPLC; The matched pair of Chuanxiong Rhizoma and Cyperi Rhizoma; Ligustrazine; Ferulic acid; Ligustilide; -Cyperone 川芎-香附既是行气疏肝的药对，也是很多大复方中常用的配伍结构，临床主要用于郁证的治疗。川芎味辛，性温。入肝、胆、心包经，具有活血行气、祛风止痛的成
7、效1，为治头痛之要药2。香附味辛、微苦、微甘，性平，归肝、三焦经，具有疏肝行气、调经止痛的成效，常用醋制。 由于香附、川芎化学成分复杂，既含有大量的脂溶性成分，又有水溶性成分。本试验选择川芎中成清楚确的生物碱主成分川芎嗪、酸性主要成分阿魏酸及挥发油主要成分藁本内酯；选择香附中成清楚确的挥发油主成分-香附酮作为指标，采用HPLC法分析药对川芎-香附配伍前后的含量变化，探讨川芎-香附配伍对指标成分的影响。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪岛津SPD-10AvP；超声波清洗器昆山市超声波仪器厂；电子分析天平BS 223S 赛多利斯。甲醇分析纯，天津市红岩化学试剂厂，乙醇分析纯，天津市红岩化学试剂厂。磷
8、酸分析纯，天津市百世化工公司化学试剂厂。 流动相所用甲醇、乙腈均为色谱纯美国FISHER公司，纯化水；阿魏酸对照品含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号110773-202211；盐酸川芎嗪对照品含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号110817-200305； 藁本内酯对照品天津一方科技，批号：00012180-3956；-香附酮对照品供鉴别用，中国药品生物制品检定所，批号110748-202209)。川芎药材，香附药材均购于西安中药饮片厂，经第四军医大学药学院生药教研室鉴定分别为伞形科植物川芎的枯燥根茎和莎草科植物莎草的枯燥根茎。制香附为按照2023版中国药典自制。 2 方法与结果 2
9、.1 色谱条件 色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为Inertsil ODS-34.6 mm250 mm，5 m)；以甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，020 min：45%48%甲醇；2025 min：48%70%甲醇；2550min：70%75%甲醇；5055 min：75%100%甲醇；5560 min：100%45%甲醇；检测波长为270 nm；柱温25；流速为1 ml/min。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取川芎嗪对照品3.68 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 ml含川芎嗪0.368 mg。 精密称取阿魏酸对照品2.41 mg，置10
10、 ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 ml含阿魏酸0.241 mg。 精密称藁本内酯对照品1.022 7 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 ml含藁本内酯0.102 27 mg。 精密称取-香附酮对照品85.93 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 ml含-香附酮8.593 mg。 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 2.3供试品溶液的制备 取川芎、制香附药材粉末过三号筛各约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加70%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声提取30 m
11、in，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜0.45 m滤过，取续滤液，即得。取川芎制香附11混合药材粉末过三号筛约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加70%甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜0.45 m滤过，取续滤液，即得。 2.4 结果 分别精密吸取对照品溶液与川芎及制香附供试品溶液各20 l，川芎-制香附配伍供试品40 l注入液相色谱仪，测定，即得。对照品及供试品色谱图见图1，单味药材及药对中峰面积数据见表1。由表1峰面积数据可以看出，10个特
12、征峰中其中29号特征峰的峰面积明显增加。其中1号峰与9号峰为制香附与配伍后药对中的共有峰，27号峰为川芎与配伍后药对中的共有峰。2号、4号、7号峰分别为指标成分川芎嗪、阿魏酸和藁本内酯。 表1 川芎、制香附及川芎制香附11特征峰的保存时间及峰面积 3 讨论 药对是组成方剂的核心，它构成简单，却具备了复方根本主治功能，是中医遣方用药特点之一；药对是介于单方与复方之间的配伍单元，表达着中药方剂适证化裁、灵活加减的运用特点3，以点带面，对于分析中药方剂的配伍规律有事半功倍之效。 化学成分是中药作用的物质根底，任何配伍效应都应有特定的化学表述。因此研究药对配伍前后化学成分的变化是探讨其配伍规律的一个重
13、要途径。所以本文采用HPLC法测定了川芎-香附配伍前后指标成分的变化。测定结果显示：药对中除2号、10号特征峰外其余的含量与单味药材相比均有所增大，但其发生变化的配伍机制还有待进一步深入研究。 川芎样品中有一与-香附酮几乎相同保存时间的物质出现-香附酮标准品保存时间为59.079 min，制香附中-香附酮保存时间为59.079 min，川芎中10号峰的保存时间为59.066 min。但该特征峰在川芎制香附配伍后保存时间稍有滞后为59.129 min。而且该峰的峰面积相对与川芎和制香附单味药材发生了不同的变化。相对与川芎该峰的峰面积有所增加，而相对与制香附该峰的峰面积有所减小。此峰的变化可能由于
14、梯度洗脱流动相极性的变化，也有可能是两味药材配伍后物质相互影响而导致保存时间发生变化。该峰的峰面积相对川芎和制香附单味药材发生了不同的变化，相对川芎该峰的峰面积有所增加，而相对于制香附该峰的峰面积有所减小。对该物质的此种变化我们将在以后的实验中进一步探讨研究。 现代医家蒲辅周认为香附、川芎二药合用肝胆气郁才能推动4。鲁府禁方香茗散(香附子二钱，川芎一钱，细茶一撮。水煎温服) 主治气脑冲动，头痛。川芎与香附配伍长于利气开郁，活血止痛，为治疗气郁头痛之重要方剂。临床用于肝气郁结之头痛甚佳。川芎中的生物碱与有机酸是其活血化瘀的主要活性成分，川芎嗪有明显镇痛作用5，阿魏酸已经被证实为川芎治疗偏头痛的有
15、效成分6。川芎挥发油中苯酞类成分含量最高，多种苯酞类化合物被证明是川芎中对心脑血管作用的主要成分7。挥发油是香附主要有效成分之一，-香附酮是香附挥发油的主要成分8，且为较强的前列腺素生物合成抑制剂，被认为是镇痛作用的有效成分之一9-10。中药成分复杂，协同起效的特点提示药对配伍前后化学成分的变化值得深入探讨。同时也为川芎制香附配伍前后药理药效变化的研究奠定了一定的根底。 参考文献 1国家药典委员会.中国药典S.一部.北京:中国医药科技出版社,2023:38. 2王筠默.中药药理学M.上海:上海科学技术出版社,1987:111-112. 3孙洋,陈婷,徐强.从药对的角度考察复方配伍规律J.世界科学技术-中医药现代化,2004,(1):17-21. 4肖森茂,彭永开.百家配伍用药经验菜箐M.北京:中国中医药出版社,1992:149. 5杨丽娟.川芎的药理作用研究进展J.黑龙江医药,2023,23(4):599- 600. 6袁莹,林晓,冯怡,等.川芎治疗偏头痛效应组分的体内移行研究J.中国药学杂志,2023,45(9):694-697. 7Natio T, Kubota K, Shimoda Y, et al. Effects of constistuent
