1、解剖实验报告蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备、不同频率刺激对肌肉收缩的影响一目的要求1. 掌握蛙类双毁髓的试验方法；2. 掌握坐骨神经腓肠肌标本标本的制作方法；3. 观察不同刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。二根本原理蛙类动物的某些根本活动，如神经的生物电活动、肌肉收缩等与哺乳动物相似。其离体组时所需的生活条件比较简单，易于控制和掌握，而且动物来源丰富，因此在生理实验中常用蛙类的坐骨神经腓肠肌标本和坐骨神经标本来观察组织的兴奋性、刺激与反响的规律以及骨骼肌收缩的特点等。肌肉受到一次阈上刺激而产生的一次收缩为单收缩，其过程可分为三个时相，即潜伏期、缩短期和舒张期。肌肉受到连续的阈上刺激时，如果刺激间隔小
2、于单收缩的过程，相邻两单收缩的时相会出现融合，表现为强直收缩现象。如果表现为每次收缩的开始发生在上次收缩的缩短期，称完全强直收缩，如果表现为每次收缩的开始发生在上次收缩的舒张期，称不完全强直收缩。使用生物信号采集处理系统，可以观察到腓肠肌收缩的情况。三实验材料实验动物：健康青蛙一只；实验器材和药品：蛙类手术器械一套（粗剪刀一把，组织剪一把，眼科剪一把，镊子一把，探针一根、玻璃分针2把，蛙钉4个、培养皿一个，蛙板一个、滴管一个、棉线假设干），张力换能器，肌槽，刺激电极，铁架台，生物信号采集处理系统，微机，任氏剂。四实验步骤捣毁蟾蜍脑脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握蛙，用食指下压头部前端
3、，拇指按压背部，使头前俯。中指与无名指夹其前肢，无名指与小指夹其后肢，使整个躯干做最大屈曲。把探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使其逐渐刺入整个椎管内，完全彻底捣毁脊髓。脊髓破坏完全的标志是：下颌呼吸运动消失，反射消失，四肢松软。剪除躯干上部和内脏，去皮，制备下肢标本： 用粗剪刀在骶髂关节前1厘米处剪断脊柱，握住蟾蜍下肢，沿躯干两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂。剪除全部躯干及内脏组织。剪去肛周皮肤；用圆头镊子夹住脊柱，注意不要碰到坐骨神经，捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤
4、。将全部皮肤剥除后，把标本置于盛有任氏液的培养皿中。 2.1.1.3洗净双手和用过的全部手术器械。别离两下肢： 避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开，将已别离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。 2.1.1.5 取出一下肢，用蛙钉固定于蛙板上，固定时要注意，坐骨神经和腓肠肌朝上。先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向别离暴露坐骨神经之大腿局部直至腘窝，在别离过程中，把神经周围的结缔组织去除干净，并把神经的细小分支剪断，但要注意不要用金属器械碰触神经，也不要对神经过度牵拉。实验期间应不断滴加任氏液使神经
5、保持湿润。用玻璃分针游离腓肠肌，并在下面穿线，在跟腱处打结。在结扎线的下方剪断跟腱，在膝关节处把除腓肠肌外的小腿其他局部剪除。注意保持完整的腓肠肌。 2.1.1.7用棉线在靠近脊柱的位置结扎坐骨神经，并在结扎线的上方剪断神经，用眼科剪剪断坐骨神经的全部支。从腘窝处开始剪掉大腿所有的肉，尽量把股骨刮干净，在膝关节上至少1cm处剪去上段股骨。将标本浸入任氏剂的培养皿中。实验装置与仪器连接：1.将标本股骨残端固定在肌槽上的小孔内；2.将结扎腓肠肌肌腱的棉线与张力换能器连接，调节棉线的松紧，要与桌面垂直；3.将神经置于肌槽的刺激电极上，用任氏剂保持标本湿润；4.刺激电极插入微机上的刺激输入孔；5.张力
6、换能器与微机相应通道相连。翻开，进入生物信号采集处理系统，在菜单栏选择“实验工程-“神经肌肉-“刺激强度与反响的关系实验模块点击开始，调节刺激参数，使频率自动逐渐递增，串间隔为2.连续记录不同频率时的肌肉收缩曲线。五结果与分析不同频率刺激对肌肉收缩的影响：串间隔为2,频率增量为1时的张力变化（如图）可见单收缩、不完全强直收缩、完全强直收缩。分析：刺激强度到达阈刺激时腓肠肌开始收缩，在最大刺激收缩力前随刺激强度增大而增大，到达最大刺激强度后，收缩力不发生明显改变；在最大刺激强度条件下，某较小频率使腓肠肌发生单收缩(如图中第一次刺激)，频率增大到，单收缩变为不完全强直收缩（如图中第2-6次刺激），频率继续增大，不完全强直收缩变为完全强制收缩（如图中第7、8次刺激）。不同的腓肠肌其阈刺激，最大刺激均存在差异；其单收缩，不完全强直收缩和完全强直收缩所要频率也不尽相同。六实验总结本次试验严格按照操作步骤进行，所得实验结果较为理想，很容易观察到腓肠肌的单收缩、不完全强直收缩、完全强直收缩现象。在实验的过程中，制备坐骨神经-腓肠肌标本是最繁琐的步骤，也是实验成功的关键所在，期间，我们进行的比较缓慢，生怕弄错了哪一步，一步步想原理、回忆老师是怎么说的，所幸的是我们最终成功了，得到了较好的结果，在这次的不断尝试和思考中，很好地锻炼了我们的动手能力和思维能力。
