1、一、血液的组成和功能：普通正常人血液量约为体重的7%左右，可分为液体的血浆（Plasma）和血细胞（Blood Cells）两部分，其中血浆约占55%，血细胞约占45%。血浆由水、食物营养成份、代谢废物、激素、抗体、酶、蛋白质等组成。红细胞（RBC）（内含血红蛋白）血细胞分为3种白细胞（WBC） （俗称血球）血小板（PLT）三者在血液中的数量比约为RBC：WBC：PLT=500：1：30。 嗜中性粒细胞（Neutrophil） 粒细胞（75%） 嗜酸性粒细胞（Eosinophil）（Granulocyte） 嗜碱性粒细胞（Basophil）WBC又分为 淋巴细胞（25%）（Lymphcyte）
2、 单核细胞（5%） （Monocyte） 人类生理和病理的变化，往往会引起血液组分的变化，比如全身各组织的感染性炎症可引起血液内白细胞总数和分类计数的改变。所以及时了解血液组分的变化，可以为医生提供诊断与治疗疾病的重要依据。所谓血球计数主要是计数单位容积中红细胞、白细胞和血小板的个数，它已成为各级医院进行血液常规检验的必做项目之一。RBC、PLT和大多数WBC在骨髓生成，其功能特点如下：生命周期功能正常值直径体积RBC120天运送O2和CO23.55.51012/L68m60120m3（f l）WBC7天抗感染，产生抗体参与免疫反应3.29.7109/L820m1201000m3（f l）PL
3、T810天止血、凝血100300109/L24m230m3（f l）二、血液标本的收集和处理：血液自血管内采出后如不加抗凝剂将很快发生凝集反应，形成血凝块（由血细胞和纤维蛋白等凝缩而成）和淡黄色的血清（SERUM），该反应是不可逆转的，标本将无法用于血细胞测定。所以要进行血细胞分析必须对血液进行抗凝处理，国外大多数已采用静脉抗凝血标本，国内则以末梢血（即指尖血或耳垂血）标本为主。抗凝剂：以EDTA为进行血细胞分析的首选抗凝剂，浓度为EDTA K2：1.52.2 mg / ml全血，室温24小时内，白细胞、红细胞、血小板测定结果不变。白细胞分类可稳定68小时，血红蛋白可稳定数日，但镜下的白细胞分
4、类，2小时后粒细胞形态即有变化，故需作镜检分类者，应及早推制血片。标本采集注意事项：A 静脉抗凝血采集后应立即连续充分混匀2分钟，加盖。B 若在4小时内测定，标本放室温下；若要在4小时后测则要放在5C，但低温贮存时血小板和MPV值会受影响。C 冰箱内取出的抗凝血应恢复至室温时才能测定。D 毛细采样管采取的末梢血要立即加入稀释液中混匀，避免形成血凝块和PLT聚集，应特别注意稀释溶血现象。三、 血液细胞分析仪的工作原理：传统的血细胞计数是将血液稀释后，滴在有分划的玻璃片上，在显微镜下用人工计数。这种计数方法速度慢、劳动强度大、眼睛易疲劳、计数精度低，且误差因人而异，通常在5%10%之间。随着检验标
5、本量的增加和对精度要求的提高，使得这种传统的血细胞计数方法远不能满足临床要求。随着电子工业和计算机技术的发展，人们已研制成精密的电子血液细胞分析仪，简称血球计数仪或血球仪。工作原理：变阻法（又称电阻抗法）血细胞是电的不良导体，标本稀释液为电解质溶液，能使血细胞保持在血液中的原有形状。悬浮在稀释液中的血细胞在负压作用下一个一个地通过内外电极间的计数微孔时，将明显增大整段电解液的等效电阻，而该电解液外接恒流电源，则此时电解液两极产生电压脉冲信号，电脉冲的大小直接与血细胞的电阻率成正比，即与血细胞的体积相关。如果控制定量溶有血细胞的电解液通过微孔，则可得到一连串不同幅度的脉冲信号，对这些脉冲个数计数
6、，就可得到血细胞数量，这就是变阻脉冲法（简称变阻法）的原理。白细胞计数、HGB测量和红细胞/血小板计数血细胞中红细胞、白细胞和血小板正常体积范围约为：RBC：60120fl、WBC：1201000fl、PLT：230fl，三者在血液中的数量比约为：RBC：WBC：PLT=500：1：30。由于红细胞的大小与小的白细胞类似，二者难以靠大小进行区分，因此，稀释的血液需要先进行溶血处理以破坏红细胞，红细胞的碎片远小于白细胞，这样在专门的WBC微孔中计数WBC的数目。RBC在被破坏的同时，释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂反应形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长下比色，如氰化高铁法中形成
7、氰化高铁血红蛋白，其最大吸收峰在540nm，吸光度的变化与液体中血红蛋白的含量成比例，由此即可测得血红蛋白的浓度。由于正常红细胞的浓度比白细胞高出几百倍，因此，必须对检测白细胞的稀释液预先再次进行百倍稀释，又称为二次稀释。血细胞分析仪用另一个专用检测通道，吸入血细胞稀释液，并根据脉冲的高低对RBC和PLT分别计数，稀释的血液进入该红细胞检测通道时，其中含有白细胞，其数量影响可以忽略不计。细胞分布直方图仪器除了给出细胞数量结果之外，同时提供细胞体积分布图形，这些可以表示出细胞群体分布情况的图形，称为细胞分布直方图。血细胞分析仪在进行细胞分析时将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配并储存在相应的体积通
8、道中，每个通道收集的数据被统计出血细胞的相对数并表示在“Y”轴上，体积数据以飞升（fl）为单位，表示在“X”轴上。 红细胞或血小板通过微孔时，形成相应大小的脉冲，脉冲的多少即红细胞或血小板的数目，脉冲的高度代表单个脉冲细胞的体积。红细胞脉冲高度叠加经换算即可得红细胞的比积（HCT）。根据所测单个红细胞或血小板体积及相同体积细胞占总体的比例，可打印出红细胞或血小板体积分布直方图。白细胞分类（群）正常生理情况下，WBC用显微镜按形态、颜色、功能不同可分为淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞五类。淋巴细胞体积最小，单核细胞体积最大，而其它三种细胞大小类似，但用仪器只能靠体积来分
9、类，因此区分起来比较困难。因为这些细胞大小虽有差异，但每一种细胞有大有小，小的单核细胞可能与大的中性粒细胞体积很接近，仪器很难区分，相对来讲淋巴细胞较小，与其它四种细胞的界限比较清楚，仪器容易区分。而临床上则以淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞对临床诊断帮助最大。两分类的仪器仅能将淋巴细胞从其它白细胞中区分出来，而其余四种细胞混在一起报告成“大白细胞”，这对临床诊断意义不大，在正规的大医院干脆就不报白细胞的这种分类结果，而用手工方法再作白细胞分类，这就等于两分类如同不分类。 白细胞三分类的仪器则能够将白细胞分成淋巴细胞、中性粒细胞和中间细胞三类（中间细胞内包含单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）
10、，这对临床帮助很大，对于仪器报告结果正常的标本一般就不用再用手工方法分类了。仪器实现白细胞三分群，除了仪器测定精密性和技术性能要比两分类仪器高得多以外，还需要使体积大小比较接近的几种白细胞人为地拉开距离便于仪器识别。加入溶血剂后使白细胞膜不完全破坏，细胞发生固缩，细胞浆内的液体部分排出胞外，而细胞核和胞浆中的颗粒留在胞内，这样就使得细胞核大，胞浆颗粒多的细胞变得大，反之则较小，使不同种类的白细胞之间大小差异增大。最终使仪器测得最小体积的白细胞为淋巴细胞，最大体积的白细胞为中性粒细胞，中等体积大小的白细胞则为单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，这与显微镜下看到的细胞大小有不同。由于溶血剂可使白
11、细胞的胞浆发生绕核皱缩，血细胞分析仪得到的白细胞直方图所反映的只是白细胞的相对大小，白细胞体积在3590fl范围内的为淋巴细胞，体积在90160fl范围内的为中间细胞，主要包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，体积在160450fl范围内的为中性粒细胞。因此，利用白细胞的直方图可以对淋巴细胞、中间细胞和中性粒细胞进行初步分类（群），并计算出各类（群）白细胞的绝对值和百分比。四、血液细胞分析仪的分类：血液细胞分析仪分为几种档次。根据白细胞分类结果可以将血液细胞分析仪分为三种档次：1 二分类血液细胞分析仪：该类仪器只能报出淋巴细胞和粒细胞（或称小白细胞和大白细胞）二项百分比和绝对值。2 三分类
12、血液细胞分析仪；该类仪器能报出淋巴细胞、中间细胞和粒细胞三项百分比和绝对值（部分可以进行嗜酸性细胞、嗜碱性细胞的半定量分析）。3 五分类血液细胞分析仪：该类仪器能报出淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和中性粒细胞五项百分比和绝对值。 其中，二分类和三分类血液细胞分析仪是应用电阻抗法和光电比色法进行血常规检查的基本仪器。但二分类仪器很难正确地反映病人状况，难以用于白细胞分类的筛选。三分类仪器适用于血常规检查和作规模较大的过筛检查。五分类仪器由于使用了新技术（如激光散射、射频电导、细胞化学染色等等），使细胞分析更精确，筛选后需镜检的标本假阳性约从30%降为10%左右，更适用于较大规模标本量
13、的医院使用。此类分类方法列表概述如下：仪器类别白细胞分类仪器原理二分类淋巴细胞、粒细胞阻抗法三分类淋巴细胞、粒细胞、中间细胞阻抗法五分类淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、单核细胞阻抗法+激光散射、射频电导、细胞化学染色等根据仪器的自动化程度又可以将血液细胞分析仪分为三种档次：（1） 半自动血液细胞分析仪：该类仪器的操作程序是标本经机外两步预稀释、手工加溶血素并手工混匀后上机自动定时检测、分析、显示和打印结果。（2） 准全自动血液细胞分析仪：该类仪器的操作程序是标本经机外两步预稀释后上机自动加溶血素并自动混匀，自动定时检测、分析、显示和打印结果。（3） 全自动血液细胞分析仪：该类仪器
14、的典型操作程序是标本直接被吸入机内自动稀释、分流，自动加溶血素并自动混匀，自动定时检测、分析、显示和打印结果。此类分类方法列表概述如下：仪器类别全血自动进样加溶血素自动分析打印半自动（F820）手工准全自动（BC2200）自动 全自动（BC3000）自动五、各项参数的代号、参考值及简要临床意义：1 白细胞（WBC）：（3.29.7）109/L绝对值和百分率：淋巴细胞（Lymph#）：（1.03.3）109/L中间细胞（Mid#）：（0.20.7）109/L中性粒细胞（Gran#）：（1.86.4）109/LLymph%：18.7%47%Mid%：3.5%7.9%Gran%：46%76.5%临床
15、意义：A 增多：a) 中性粒细胞：急性化脓感染、粒细胞白血病、急性出血、溶血、手术后、尿毒症、酸中毒、急性汞中毒、急性铅中毒等。b) 嗜酸性粒细胞：变态反应、寄生虫病、某些血液病、手术后、烧伤等。c) 嗜碱性粒细胞：慢性粒细胞白血病、何杰金病、癌转移、铅及铋中毒等。d) 淋巴细胞：百日咳、传染性单核细胞增多症、慢性淋巴细胞白血病、麻疹、腮腺炎、结核、传染性肝炎等。e) 单核细胞：结核、伤寒、亚急性感染性心内膜炎、疟疾、黑热病、单核细胞白血病、急性传染病的恢复期等。B 减少：a) 中性粒细胞：伤寒、副伤寒、疟疾、流感、化学药物中毒、X线和镭照射、抗癌药物化疗、极度严重感染、再障、粒细胞缺乏等。b) 嗜酸性粒细胞：伤寒、副伤寒以及应用肾上腺皮质激素后。c) 淋巴细胞：
