细菌样品冷冻干燥制样方法1) 取样：取大量样品离心（转速 3000r4000r），去除上清液，加入适当 PH（7.27.4）的0.1 M PBS清洗三遍；清洗时菌体温柔悬浮。2) 固定：2.5%戊二醛固定3h（此步时间非绝对，112h都可），用PBS清洗两遍，每遍10min。再用纯水清洗两遍。3) 梯度脱水： 用乙醇的水溶液按30%、50%、70%、80%、90%的浓度梯度对样品进行脱水，每步15min，之后在100%乙醇的水溶液中脱水 15min2 次；再将样品置于乙醇和叔丁醇 1:1混合液中15min；最后置样品于叔丁醇中 15min2次。（此步也可以尝试不做）4) 冷冻干燥：滴加处理好的样品于5*5 mm的盖玻片上，置-80度冰箱冷冻后放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥。5) 电镜观察： 样品充分干燥后，进行扫描电镜观察。2.5%戊二醛：Step 1:0.2M磷酸缓冲液的配制：（0.1M的就是稀释2倍）取50mL定容100mL- 磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O）2.6克 磷酸氢二钠 (Na2HPO4.12H2O)29克 双蒸馏水 加至500毫升 pH调至7.4Step 2:戊二醛固定液的配制：- 25% 戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度2.5% pH值7.3-7.4
