1、赤水市人民医院检验科SOP 文件输血科SOP文件（第一版）二0一0年十一月目录1、5% 红细胞悬液的制备12、A、B、O血型鉴定23、Rh血型鉴定 34、盐水介质交叉配血 55、凝聚胺交叉配血 7赤 水 市 人 民 医 院 检 验 科标题： 5% 红细胞悬液的制备版本号：A修订号：0文件编号：XXX-MY-SOP-001发布日期：2010年10月06日生效日期：2010年11月01日发布部门： 编制人： 王兴跃审核人： 龚光卫批准人： 页码： 共 1 页5% 红细胞悬液的制备一、 制备目的 5% 红细胞悬液一般用于血型鉴定及交叉配血。二、 试剂与设备生理盐水、1ml 吸管、试管、离心机 三、
2、操作步骤1. 取全血1ml，加等渗盐水2-3ml，充分摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后再加生理盐水2-3 ml，按上述方法洗涤，共3次。2. 最后取压积RBC 5滴，加新鲜等渗生理盐水4 ml，即成5% 红 细胞悬液。（标准RBC 盐水悬液最多存放3天，用ACD溶液冷藏保存最长1周）- 1 -赤 水 市 人 民 医 院 检 验 科标题：A、B、O血型鉴定版本号：A修订号：0文件编号：XXX-MY-SOP-002发布日期：2010年10月06日生效日期：2010年11月01日发布部门：编制人： 王兴跃审核人： 龚光卫批准人： 页码： 共 2 页A、B、O血型鉴定一、方法试管法二、原理1 正定型：用
3、标准抗-A、抗-B分型血清测定红细胞上有无A抗原或B抗原来确定ABO血型。2 反定型：用已知有A抗原、B抗原及H抗原的红细胞测定血清中有无抗-A、抗-B来确定ABO血型。三、试剂与材料1.标准抗-A、抗-B血清。2.标准A、B、O型红细胞：取健康献血员之A、B、O三种血型的红细胞各3份，用生理盐水洗涤3次，分型混合，用红细胞保养液配制成5%悬液，经标准抗血清鉴定特异性合格，分装4保存。3.受检者5%红细胞悬液及其血清。四、操作程序1 正定型：取试管2支，分别标明抗A、抗B，并分别加入标准的抗A、抗B血清各2滴，加受检者的5%红细胞悬液各2滴，离心1000rpm一分钟，先观察试管中上清液有否溶血
4、，然后轻摇试管，肉眼及显微镜观察是否凝集，按下表报告结果。2 反定型：取试管3支，分别标明A、B、O，并分别加入5%标准A、B、O型红细胞悬液各2滴，加受检者的血清每管2滴，离心1000rpm一分钟，先观察试管中上清液有否溶血，然后轻摇试管，肉眼及显微镜观察是否凝集，按下表报告结果。 ABO血型正反定型结果判断 （“+”为凝集，“-”为不凝集）分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+标准红细胞抗-A血清 抗-B血清A型红细胞 B型红细胞 O型红细胞 + - - + - - + + A B O AB - + - + - - + + - - - -五、质量保证措施 1.分型血清质量效能符合要求
5、，用毕速放冰箱4保存，以免效价下降及细菌污染。 2.试剂红细胞以二个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤。 3.所用试管、滴管、破片要清洁干燥，防止溶血。 4.操作时应先加血清、再加红细胞恳液，以免使血清中抗体被稀释。 5.离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性出现。6.如室温过低，应将试管放入37水浴箱中保温。7.判断结果应仔细核对、记录、避免笔误。六、临床意义 1.防止输ABO血型不合，引起输血反应。临床上多采用正向定型，只有结果可疑时再做反向定型。 2.避免ABO血型不合，引起器官移植中的超急性排斥。 3.用于母子血型不合，引起新生儿溶血病的诊断。4.用于可疑
6、血迹，毛发和亲缘鉴定，以及与某些疾病相关的调查等。七、参考资料1全国临床检验操作规程第二版2试剂盒说明书标题：Rh血型鉴定版本号：A修订号：0文件编号：XXX-MY-SOP-003发布日期：2010年10月06日生效日期：2010年11月01日发布部门：编制人： 王兴跃审核人： 龚光卫批准人： 页码： 共 2 页Rh血型鉴定一、 方法：试管法应用标准抗-D血清与被检红细胞发生凝集与否而定，发生凝集者即有D抗原，为Rh阳性，反之则为Rh阴性。二、试剂与材料1 标准Rh抗血清：抗-D。2 受检者5%红细胞悬液。三、操作程序1 取试管1支，作抗D标记，加入抗-D血清2滴，再加受检者5%红细胞悬液2滴
7、，混匀后离心1000rpm一分钟，观察凝集结果。2 结果判断：凝集为Rh阳性，不凝集为Rh阴性。四、质量保证措施1 如抗-D检测管不凝集，应进一步用抗人球蛋白试验证实，以排除Du的因素。2 Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，同时由于Rh抗原、抗体凝集反应的凝块比较疏松，观察结果时应轻轻转动试管，不要用力摇动。3 为避免发生假阴性，受检者红细胞应新鲜。4阳性对照取3人O型红细胞混和配成。阴性对照一般应选择AB型血清一滴，测定时加5阳性红细胞悬液一滴和试剂一滴混匀，。5抗D试剂质量效能正常,在有效期内使用。五、临床意义 1.血型不合输血引起的溶血反应：“天然”产生的RH抗体极为少见，几乎所有的Rh
8、抗体都是由于输入血型不合的血液或胎母Rh血型不合等同种免疫作用而产生的。因机体已产生Rh抗体在输入Rh血型不合的血液时，将会发生溶血性输血反应，甚至导致死亡。2.新生儿溶血病： 若胎儿与母亲Rh抗原不同，母亲受到胎儿血液中不配合的血型抗原刺激，可以产生相应的血型抗体。大约5的Rh阴性产妇含有抗D抗体。如果发生在第一胎，一般对胎儿无明显影响。如再次妊娠Rh阴性胎儿时，可产生新生儿溶血病。六、参考资料：1全国临床检验操作规程第二版； 2试剂盒说明书标题：盐水介质交叉配血版本号：A修订号：0文件编号：XXX-MY-SOP-004发布日期：2010年10月06日生效日期：2010年11月01日发布部门
9、：编制人： 王兴跃审核人： 龚光卫批准人： 页码： 共 2 页盐水介质交叉配血一、方法盐水介质交叉配血法二、原理用以检测受血者（献血者）血清（浆）中有无破坏献血者（受血者）红细胞的抗体。如存在相应的抗体，则交叉管中将发生凝集或溶血现象，此即为交叉不合，反之则为相合。三、试剂与材料1受血者血清（浆）2受血者5%红细胞悬液3献血者血清（浆）4献血者5%红细胞悬液四、操作程序 见下表： 主 管 次 管 受血者血清（浆） （滴） 2 / 受血者5%红细胞悬液 （滴） / 2 献血者血清（浆） （滴） / 2 献血者5%红细胞悬液 （滴） 2 / 混匀，离心10002000rpm 12分钟，肉眼及显微镜
10、观察结果。五、结果判断1 主、次、混合管均无凝集、无溶血现象，表示无配血禁忌，可 以输血。2 主、次、混合管均有凝集和/或溶血现象，表示有配血禁忌，绝不可输血。六、临床意义减少临床输血反应,减轻病人输血危险,提高输血质量七、质量保证措施1先核病人姓名，标本是否合格，试管上联号与化验单上联号是否相同，是否有抽血者姓名，以防血标本混调。2病人血液及献血员红细胞配成5%左右红细胞悬液，不要太浓太稀。3必须做正反血型鉴定保证ABO血型。4结果观察时，除肉眼观察外，尚需显微镜观察。5要注意真、假凝集的鉴别。八、参考资料 1全国临床检验操作规程第二版 标题：凝聚胺交叉配血版本号：A修订号：0文件编号：XX
11、X-MY-SOP-005发布日期：2010年10月06日生效日期：2010年11月01日发布部门：编制人： 王兴跃审核人： 龚光卫批准人： 页码： 共 2 页凝聚胺交叉配血一、方法凝聚胺介质交叉配血二、 原理凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低介质的离子强度，减少RBC周围的阳离子云，以促进RBC和血清（浆）中的抗体结合；其后加入凝聚胺（Polybrene）溶液，以中和RBC表面带有的负电荷，使RBC产生非特异性的凝集；最后加入悬浮液（Resuspending），中和凝聚胺的作用，使正常的RBC非特异性凝集散开，结果为阴性。如果RBC被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，结
12、果为阳性。三、试剂组成1 LIM（Low Ionic Medium）： 葡萄糖、EDTA（2Na）2 Polybrene Solution（黑色瓶）： Polybrene、NaCL3 Resuspending Solution（白色瓶）：柠檬酸钠、葡萄糖4 Positive Control： 抗-D四、操作程序1 取试管二支，标明主、次侧，主侧管加病人血清（浆）2滴，加供血者5%RBC悬液（洗涤或不洗涤均可）2滴；次侧管加病人5%RBC悬液2滴及供血者血浆2滴。2 各加LIM0.6ml（吸管12滴），混匀，再各加Polybrene（黑色瓶）2滴，混匀后离心3400rpm10秒，倒掉上清液，留约0.1mL液体。- 9 -3 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。4 最后各加入2滴Resuspending（白色瓶），轻轻转动试管混合，并同时观察结果。五、结果判断1如果在30秒内凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合。2如果在30秒内凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异
