1、关键词：地中海贫血;聚合酶链反应（PCR）;少数民族;海南省 摘要:目的研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失（-SEA）、右侧缺失（-3.7）和左侧缺失（-4.2）三种-地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。方法应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失（-SEA）、右侧缺失（-3.7）和左侧缺失（-4.2）三种-地中海贫血缺失突变。结果在197例海南汉族人中检出25例-地中海贫血携带者，携带率为12.69%;三种-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.0635，其中-SEA、-3.7和-4.2的基因频率分别为0.0127、0.0305、0.0203
2、，共发现-SEA/、-3.7/和-4.2/三种基因型，其中-SEA/5例，-3.7/12例，-4.2/8例。在201例海南黎族人中检出114例-地中海贫血携带者，携带率为56.72%，三种-地中海贫血缺失突变的基因频率为0.3607，其中-SEA、-3.7和-4.2的基因频率分别为0.3607、0.0075、0.1891，共发现-SEA/、-3.7/、-3.7/-3.7、-3.7/-4.2、-4.2/、和-4.2/-4.2六种基因型，其中-SEA/3例，-3.7/39例，-3.7/-3.76例，-3.7/-4.218例，-4.2/38例，-4.2/-4.210例。结论海南省汉、黎族人群是-地中
3、海贫血的高发群体。 关键词:地中海贫血;聚合酶链反应（PCR）;少数民族;海南省 Investigationintothedeletiontypesof-thalassemiainHanandLINationalitiesinHainanProvince. Abstract:ObjectiveToinvestigatetheincidences、theallelicfrequenciesandthegenotypesfrequenciesofthree-tha-lassemiadeletiontypes（-SEA、-3.7、-4.2）andtheirdistributionsinHanandL
4、inationalitiesinHainanProvince.MethodsThree-thalassemiadeletiontypes，i.eSoutheastAsiadeletion（-SEA），rightdeletion（-3.7）andleftdeletion（-4.2），werescreenedbasedonpolymerasechainreaction（PCR）inHanandLinationalitiesinHainan.Results25carriersweredetectedin197Hanindividuals，andtheincidenceofcarrierswas12.
5、69%.Thegenefrequencyofthesethreedeletiontypeswas0.0127，0.0305and0.0203respectively，totally0.0635inHannationalityinHainan.Threegenotypesof5（-SEA/）cases，12（-3.7/）casesand8（-4.2/）casesweredetected.Onthecontrary，114carriersweredetectedfrom201individualsinLinationality，andtheincidenceofcarrierswas56.72%.
6、Thegenefrequencyofthesethreedeletiontypeswas0.0075，01716and0.1891respec-tively，totally0.3607inLinationality.Sixgenotypesweredetectedincluding3（-SEA/）cases，39（-3.7/）cases，6（-3.7/-3.7）cases，18（-3.7/-4.2）cases，38（-4.2/）casesand10（-4.2/-4.2）cases.ConclusionThereisahighincidenceof-thalassemiainHanandLina
7、tionalitiesinHainanprovince. !-empirenews.page- Keywords:Thalassemia;Polymerasechainreaction（PCR）;Minoritynationality;HainanProvince -地中海贫血（-地贫）是一种严重危害人类健康的遗传病，其主要特征是-珠蛋白链合成减少（+地贫）或缺如（0地贫）。-地贫分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失突变两大类1，-珠蛋白基因缺失是导致-地贫的主要原因。目前全世界已发现了35种-珠蛋白基因缺失突变，在中国人中已发现7种，其中东南亚型缺失突变（-SEA）、右侧缺失型突变（-3.7）
8、和左侧缺失型突变（-4.2）三种突变类型是我国南方最常见的缺失类型24。为了研究海南省汉、黎族人群中-地中海贫血的发病率及其基因型的分布特点，我们应用聚合酶链反应（PCR）技术直接筛查197例海南汉族人和201例海南黎族人中的东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失这三种最常见的缺失型-地贫突变类型，现将结果报告如下。 1材料与方法 1.1DNA样品用EDTA抗凝，采取海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县正常体检、兵检和中小学生黎族人末梢血;采取海南省文昌市正常体检、兵检的海南籍汉族人群末梢血，按Lahiri等方法5提取DNA，阳性对照标本由南方医科大学医学遗传学教研室徐湘民教授惠赠。 1.2PCR
9、扩增东南亚型缺失突变分析按文献6进行;右侧缺失型突变和左侧缺失型突变分析参照AmoldS.-C.Tan7等报道合成引物。扩增-SEA、-3.7和-4.2的多重PCR体系均采用TaKaRaLATaqTMJ及缓冲液（宝生物工程有限公司产品），PCR反应体积为25l，在PCR缓冲液（1GCBuffer，2.5mmol/LMgCl2）中含模板DNA0.2g，引物0.20.5mol/L，dNTP为200mol/L，1UTaqDNA聚合酶，循环参数为99变性5min，85加酶，56退火1min，72延伸2min，然后951min，561min，722min，30个循环后72延伸7min。扩增产物在1%琼脂
10、糖凝胶中电泳，经EB染色在紫外光灯下观察结果并照相。 2结果 2.1-SEA、-3.7和-4.2缺失型突变的多重PCR扩增在PCR反应体系中同时扩增了2基因的一个1800bp的片段，用以判断样品DNA的2基因是否缺失，从而判断-地中海贫血突变患者是杂合子还是纯合子。无-SEA、-3.7和-4.2缺失型突变的正常人DNA样品经PCR扩增后只出现一条1800bp的2基因扩增片段;东南亚缺失型杂合子（-SEA/）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因扩增片段外，还出现一条740bp的特异扩增片段;右侧缺失型杂合子（-3.7/）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因
11、扩增片段外，还出现一条2022bp的特异扩增片段;右侧缺失型纯合子（-3.7/-3.7）的DNA样品经PCR扩增后只出现一条2022bp的特异扩增片段;左侧缺失型杂合子（-4.2/）的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的2基因扩增片段外，还出现一条1628bp的特异扩增片段;左侧缺失型纯合子（-4.2/-4.2）的DNA样品经PCR扩增后只出现一条1628bp的特异扩增片段;右侧缺失型并左侧缺失型双重杂合子（-3.7/-4.2）的DNA样品经PCR扩增后同时出现2022bp和1628bp两条特异扩增片段。见图1。 !-empirenews.page-图1-SEA、-3.7和-4.2
12、缺失型突变的多重PCR检测结果（略） Fig1ThePCR-amplifiedresultof-SEA、-3.7、-4.2deletion 注:M为GeneRulerTMDNALadder（华美产品），泳道1-7对应的样本基因型分别为aa/aa，-SEA/，-3.7/，-3.7/-3.7，-4.2/，-4.2/-4.2，-3.7/-4.2。 M:Themarker（GeneRulerTMDNALadder）.Thegenotyesofsamplescorrespondingtofromlane1tolane7wereaa/aa，-SEA/，-3.7/，-3.7/-3.7，-4.2/，-4.2/
13、-4.2，-3.7/-4.2. 2.2 海南汉、黎族人群中-地中海贫血（- SEA 、- 3.7 、- 4.2 ）等位基因频率（见表1）。三种缺失在海南汉族人群中的频率分别为0.0127、0.0305和0.0203，在黎族人群中的频率分别为0.0075、0.1716和0.1891。两个人群中的三种缺失型-地中海贫血突变经 2 检验均符合Hardy-Weinbery遗传平衡。2.3 海南省汉、黎族人群中- SEA 、- 3.7 和- 4.2 缺失突变的基因型（见表2）。在197例海南汉族人中检出25例-地中海贫血携带者，携带率为12.69%，共发现- SEA /、- 3.7 /和- 4.2 /三
14、种基因型，其中- SEA /5例，- 3.7 /12例，- 4.2 /8例;在201例海南黎族人中检出114例-地中海贫血携带者，12下一页 携带率为56.72%，共发现- -SEA /、- 3.7 /、- 3.7 /- 3.7 、- 3.7 /- 4.2 、- 4.2 /和- 4.2 /- 4.2 六种基因型，其中- SEA /3例，- 3.7 /39例，- 3.7 /- 3.7 6例，- 3.7 /- 4.2 18例，- 4.2 /38例，- 4.2 /- 4.2 10例。 表1 海南省汉、黎族人群中三种-地中海贫血缺失突变的等位基因频率（略）Tab1 The allelic freque
15、ncies of three-thalassemia deletion mutation（- SEA 、- 3.7 、- 4.2 ）in Han and Li nationalities of Hainan provinc 表2 海南省汉、黎族人三种缺失型-地中海贫血突变的基因型结果（略）Tab2 The genotypes of three-thalassemia deletion（- SEA 、- 3.7 、- 4.2 ）in Han and Li nationalities of Hainan Province 3 讨论 -地中海贫血是一种遗传性溶血性血液疾病，也是世界上最常见的单基因遗传病之一，其主要特征是-珠蛋白链合成减少（ + 地贫）或缺如（ 0 地贫）。我国南方各省是该病的高发地区。因此，研究我国南方各省分的-地中海贫血的基因类型和频率分布，对开展遗传咨询和确定有效的普查法、产前诊断策略具有重要意义。 以聚合