1、培养细胞的取材与分离培养细胞的取材与分离 取材部位准确 严格无菌操作，避免微生物和化学污染 尽快培养，24h以内 减小损伤，使用锐器，避免撕扯 制备标本，以便鉴定 体外细胞的纯化体外细胞的纯化 人工纯化：酶消化法、机械刮除法、反复贴壁法、克隆法、培养基限定法、流式细胞仪分离法 等 自然纯化 细胞冻存要点：细胞冻存要点：冷冻过程要缓慢 冻存细胞必须处在对数生长期 细胞复苏要点：细胞复苏要点：快速解冻 解冻后的细胞应离心去除冷冻保护剂后再接种到培养基中 细胞培养的污染、检测与控制 微生物污染：细菌，真菌，支原体等污染 污染的途径：空气、器材、操作、试剂、组织标本 微生物污染的检测 微生物污染的控制
2、：抗生素除菌法；加温处理 细胞培养常用方法：细胞培养常用方法：组织块培养法 酶消化法 第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点 一、牙齿相关细胞一、牙齿相关细胞 牙髓细胞（Dental pulp cells）培养方法：组织块法；酶消化法 细胞形态特点 免疫组织化学染色 体外培养细胞的生长增殖特点 功能特点 牙髓细胞 波形丝蛋白染色波形丝蛋白染色(+)未分化间充质细胞未分化间充质细胞 成纤维细胞成纤维细胞 牙髓细胞 体外培养细胞的生长增殖（体外培养细胞的生长增殖（Cell proliferation in vitro）生长增殖较快 传代期较短，15-20代(2-4
3、 M)可复层生长 牙髓细胞 功能特点功能特点 碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP)活性 矿化现象(Von Kossa)对细胞因子的反应 对盖髓剂的反应 牙髓细胞 培养方法：组织块培养法；酶消化法 细胞形态特点：成纤维细胞型（与牙周膜细胞类似）免疫组织化学染色：波形丝蛋白（+）；角蛋白（-）体外培养细胞的生长增殖特点 功能特点 牙周膜细胞（periodontal ligament cells）培养方法：组织块法；酶消化法 细胞形态特点 免疫组织化学染色 体外培养细胞的生长增殖特点 功能特点 牙周膜细胞增殖分化的影响因素 原代 人牙周膜成纤维细胞 传代人牙周膜成纤维细胞
4、免疫组织化学染色免疫组织化学染色 波形丝蛋白染色阳性 角蛋白染色阴性 牙周膜细胞 成纤维样细胞，培养成功率高 细胞增殖快 体外存活时间长(4-12 M)功能特点功能特点 分泌功能：胶原、非胶原蛋白、碱性磷酸酶。矿化功能 收缩功能 再生功能 根面吸附等 二、唾液腺细胞二、唾液腺细胞 细胞形态特点细胞形态特点 腺泡上皮细胞：体外培养的腺泡细胞多呈“铺路石”样排列 导管上皮细胞：导管上皮细胞呈多边形 肌上皮细胞：肌上皮细胞呈梭形或星形 唾液腺细胞 导管上皮细胞导管上皮细胞 HSG细胞系 HSG细胞系 A 小型猪腮腺上皮细胞原代培养（10）B 小型猪腮腺上皮细胞alpha淀粉酶免疫组化染色（10）腺泡
5、细胞上皮细胞腺泡细胞上皮细胞 免疫组织化学染色免疫组织化学染色 腺泡上皮细胞：角蛋白、淀粉酶、对氨基水杨酸、导管上皮膜、前角蛋白、单克隆角蛋白、分泌成分阳性反应 导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应 肌上皮细胞：肌动蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应 三、口腔黏膜细胞三、口腔黏膜细胞 口腔黏膜细胞口腔黏膜细胞 培养方法：组织块法和酶消化法 形态特点：卵圆形、多边形，呈“铺路石”样单层排列 免疫组织化学染色：波形丝蛋白阴性，角蛋白阳性 功能：分泌大量的胶原蛋白与非胶原蛋白 兔口腔黏膜上皮细胞兔口腔黏膜上皮细胞 A A B B A 无血清培养基培养条件下（10）B
6、 滋养细胞层培养条件下（4）四、颌骨相关的硬组织细胞四、颌骨相关的硬组织细胞 破骨细胞破骨细胞 形态学特点：多核巨细胞，体积大 组织化学染色：破骨细胞单克隆抗体呈阳性反应；降钙素反应呈蓝紫色；抗酒石酸磷酸酶反应呈棕褐色 功能：骨吸收功能 影响因素：促进：破骨细胞激活因子、甲状旁腺素 抑制：-干扰素、降钙素 成骨细胞成骨细胞 形态学特点：不同培养方法所获得的成骨细胞形态各有差异 免疫组织化学染色特点：BGP、型胶原、碱性磷酸酶活性 功能：成骨作用 调节破骨细胞骨吸收作用 五、口腔肿瘤细胞五、口腔肿瘤细胞 口腔鳞癌细胞口腔鳞癌细胞 细胞系来源：鳞状细胞癌标本原代及传代培养 生物学特性：多角形上皮样细胞 核/浆比例高，多核仁 高贴壁率，克隆形成率和软琼脂集落形成率 Cal27 cell