1、猪瘟间接血凝抗体检测试验一、原理：用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验（IHA）。抗原与其对应的抗体相遇，在一条件下形成抗原抗体复合物。但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。将抗原吸附（致敏）在红细胞表面，制成猪瘟血凝抗原，用于检测免疫动物血清中的猪瘟抗体水平。这种经过猪瘟抗原致敏的红细胞与猪瘟抗体相遇，红细胞便出现清晰的凝集现象。二、 主要组分：1猪瘟血凝抗原5ml/瓶，5瓶/盒；2猪瘟阳性对照血清0.5ml/管，1管/盒；3猪瘟阴性对照血清0.5ml/管，1管/盒；4稀释液50ml/瓶，2瓶/盒；5封板膜10张/盒。三、试验器材： 196孔110V型医用血凝板； 28
2、道或12道移液器； 3微量振荡器。四、 物理性状：1抗原 摇匀呈棕红色（或咖啡色），静置后，血球逐渐沉入瓶底；2阴性对照血清 淡黄色清亮稍带粘性的液体；3阳性对照血清 微红或淡黄色稍浑浊带粘性的液体；4稀释液 淡黄或无色透明液体，低温下放置，瓶底易析出少量结晶，在水浴中加温后即可全溶，不影响使用。五、 作用与用途：用于检测猪瘟疫苗免疫动物血清抗体效价。六、 用法与判定： 1、用法 1.1加稀释液 在血凝板上17排的110孔、第8排的14孔和第57孔；加稀释液50l/孔。 1.2稀释待检血清 待检血清使用前，需经过56水浴灭活30分钟，取待检灭活血清样品50l，分别加入反应板16排的第1孔中，与
3、稀释液混匀后，吸取50l，加于第2孔中，依次作2倍系列稀释至第10孔，第10孔混匀后取出50l弃去。 1.3稀释阳性对照血清 在血凝板的第7排第1孔加阳性血清50l，2倍系列稀释至第10孔，混匀后从该孔取出50l丢弃。此时被检血清和阳性血清的稀释倍数依次为1:21:1024。 1.4稀释阴性对照血清 在血凝板上的第8排第1孔加阴性血清50l，对倍稀释至第3孔，混匀后从该孔取出50l丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为1:2、1:4、1:8。第57孔为稀释液对照，每孔仅加入50l稀释液。 1.5加血凝抗原血清稀释孔和稀释对照孔加血凝抗原（充分摇匀，瓶底应无血球沉淀）25l/孔。将反应板置微型振荡器
4、上震荡23分钟或用手依次四边轻拍，直至血球分布均匀。封板膜封板，室温下静置23小时判定结果，也可延至翌日判定。2、 判定以呈现“”血凝反应的血清最高稀释度作为该血清的间接血凝抗体效价。血凝反应强度表示如下：“” 红细胞全部凝集，形成一层均匀膜，布满整个孔底。“” 红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者略小。“” 红细胞在孔底形成薄膜凝集，边缘松散或呈锯齿状。“” 红细胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圆点。“” 红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑。“” 红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。当阳性血清抗体效价1:256、阴性血清抗体效价1:8、稀释液对照孔无自凝现象时，试验成立。接种猪瘟
5、疫苗的猪群免疫抗体效价1:16为免疫合格。七、 注意事项：1为使您的实验获得正确结果，请您在实验前仔细阅读本说明书；2收到本试剂盒时，应立即打开包装，取出血凝抗原瓶，用力摇动，使粘附在瓶盖上的红细胞摇下，否则易出现沉渣，影响使用效果；3勿用90和130血凝板，严禁使用一次性血凝板，以免误判结果；4严重溶血或严重污染的血清样品不易检测，以免发生非特异性反应；5每次检测只做一份阴性、阳性和稀释液对照；6用过的血凝板应及时在水龙头下冲净血球。再用蒸馏水或去离子水冲洗2次，甩干水分放37恒温箱内干燥备用。检测用具应煮沸消毒，37干燥备用。血凝板应定期浸泡在洗液中也可浸泡在5%盐酸液内，48小时取出后清水冲净。