1、中国胃癌中国胃癌HER2HER2检测指南解读检测指南解读 （20112011版）版）概述概述 本指南推荐本指南推荐IHCIHC与与FISHFISH和（或）和（或）DSISHDSISH相结合的检测策略相结合的检测策略 胃癌有必要进行准确的胃癌有必要进行准确的HER2HER2检测检测 HER2HER2状态检测首先选用免疫组织化学法（状态检测首先选用免疫组织化学法（IHCIHC）IHC 3+IHC 3+的病例视为的病例视为HER2HER2阳性阳性 IHC 2+IHC 2+的病例建议进一步行原位杂交（的病例建议进一步行原位杂交（ISHISH：FISHFISH和或和或DSISHDSISH）检测，检测，I
2、HC 2+/ISH+IHC 2+/ISH+的病例视为的病例视为HER2HER2阳性阳性 IHC 1+IHC 1+和和IHC 0 IHC 0 病例，病例，IHC 2+/ISH IHC 2+/ISH-病例视为病例视为HER2HER2阴性阴性 胃癌胃癌HER2HER2检测应在有能力的实验室进行检测应在有能力的实验室进行 检测质量取决于标本的采集、处理过程、检测质量取决于标本的采集、处理过程、IHC/ISH IHC/ISH 检测方法和评检测方法和评判标准的执行判标准的执行 问题一 1.1.请问您所在的医院胃癌HER2检测是否属于常规检测项目？A.是 B.否 C.不清楚 问题二 请问您所在的医院，由谁决
3、定是否做胃癌HER2免疫组化检测？A.病理科 B.外科 C.肿瘤内科 D.消化内镜室 问题三 请您对多学科合作对胃癌HER2检测的重要性打分（0-5重要性逐渐递增），请按投票器选择 A.0 B.1 C.2 D.3 E.4 F.5 胃癌胃癌HER2检测检测 切片切片 脱水 包埋 固定固定 HER2HER2检测的相关流程检测的相关流程 切片 检测 判读 标本标本 收取收取 问题四 贵单位胃癌手术标本送到病理科处理的时间？贵单位胃癌手术标本送到病理科处理的时间？A 30分钟内 B 1小时内 C 2小时内 D 2小时 E 不清楚 问题五 贵单位手术标本固定时间？贵单位手术标本固定时间？A.不固定直接取
4、材 B.固定时间在8小时内 C.固定时间在12小时左右（过夜）D.固定时间12-24小时 E.不清楚 标本类型 原发病灶的原发病灶的手术切除标本手术切除标本 原发病灶的原发病灶的胃镜活检标本胃镜活检标本 建议取建议取6 6-8 8块，以获得块，以获得足够的样本组织足够的样本组织，多点活检多点活检对对准确的检测有必要准确的检测有必要 切除标本离体后切除标本离体后20203030分钟内分钟内进行标记、切开、固定等进行标记、切开、固定等初步处理后，及时送病理科初步处理后，及时送病理科 活检标本的大小活检标本的大小2x2x2mm2x2x2mm3 3 原发灶活检组织、手术切除组织皆有的病例，原发灶活检组
5、织、手术切除组织皆有的病例，建议使用建议使用手术切除组织进行检测手术切除组织进行检测 标本采集 问题六 贵单位送检标本采用何种固定液？贵单位送检标本采用何种固定液？A.不用固定液，直接送病理科 B.10%福尔马林固定液（蒸馏水配）C.10%福尔马林固定液（中性缓冲液配）D.10%甲醛固定液 E.不清楚 标本固定 采用新鲜配制采用新鲜配制10%10%中性缓冲福尔马林中性缓冲福尔马林作为固定液作为固定液 固定液的量应为组织的固定液的量应为组织的1010倍倍 手术切除标本的固定时间为手术切除标本的固定时间为8 848h48h (至少至少1h/mm1h/mm组织组织)活检标本的固定时间活检标本的固定时
6、间不超过不超过24h24h (至少至少1h/mm1h/mm组织组织)不宜使用其它固定液，非不宜使用其它固定液，非10%10%中性缓冲福尔马林制剂中性缓冲福尔马林制剂可能会妨碍可能会妨碍IHCIHC和和ISHISH检测的可靠性检测的可靠性 不宜用微波快速固定组织不宜用微波快速固定组织 规范的标本固定是规范的标本固定是HER2检测质量的保障；保存良好的组织检测质量的保障；保存良好的组织形态，防止细胞内蛋白和核酸的丢失形态，防止细胞内蛋白和核酸的丢失 标本准备 固定1小时 固定52小时 固定4小时 固定2周 固定时间影响固定时间影响HER2染色结果染色结果 固定22小时 图片由 of A Morey
7、,St Vincents Hospital,NSW,Australia提供 固定较差示例：乳腺癌固定较差示例：乳腺癌HER2 IHC检测检测 固定较差会导致染色结果的异质性 胞质染色可能是由固定较差导致 图片由 W Hanna提供 固定较差示例：胃癌固定较差示例：胃癌HER2 IHC检测检测 固定不完全会导致假阳性检查结果 胞质染色可能由于使用了不恰当的固定方式 图片由Targos Molecular Pathology.提供 固定较差示例：固定较差示例：HER2 ISH检测检测 图片由 Abbott/Vysis.提供 固定不完全-SISH，“空核”固定不完全导致探针信号较弱或缺失 过度染色会
8、导致持续性自发荧光 探针信号可能较弱或缺失 HER2检测 HER2HER2过表达的检测过表达的检测 HER2HER2扩增的检测扩增的检测 免疫组织化学染色方法免疫组织化学染色方法（IHC）自动化自动化 原位杂交方法原位杂交方法（ISH）FISH Dual SISH 实验室总体要求 应当在有条件的实验室进行，拥有试验所需的仪器应当在有条件的实验室进行，拥有试验所需的仪器和设备及空间条件和设备及空间条件 实验室掌握包括标本的制备、抗体的选择、抗原修实验室掌握包括标本的制备、抗体的选择、抗原修复方法及其它相关技术；探针的选择、检测预处理复方法及其它相关技术；探针的选择、检测预处理方法及其它相关技术方
9、法及其它相关技术 实验室经过严格的内部和外部质量控制程序验证，实验室经过严格的内部和外部质量控制程序验证，建立完善的建立完善的实验室标准操作流程（实验室标准操作流程（SOPSOP）实验室技术员具备相关资质及经过合格培训实验室技术员具备相关资质及经过合格培训 HER2检测-IHC IHCIHC方法方法 试验方法根据实验室条件可以选择手工染试验方法根据实验室条件可以选择手工染 色、半自动染色和全自动免疫组化染色色、半自动染色和全自动免疫组化染色 建议使用全自动染色方法建议使用全自动染色方法 建议使用建议使用我国相关部门我国相关部门（SFDASFDA）批准的试剂盒）批准的试剂盒 自行组配和分装的抗体
10、必须经过严格的内部和外部质自行组配和分装的抗体必须经过严格的内部和外部质 量控制程序验证，并与权威机构批准的检测试剂盒进量控制程序验证，并与权威机构批准的检测试剂盒进 行比对，以保证检测结果的可靠性行比对，以保证检测结果的可靠性 IHCIHC抗体抗体 结果判读和分析 普通光学显微镜普通光学显微镜 荧光显微镜荧光显微镜 病理医生需要经过培训 IHC评分标准和乳腺癌有所不同 样本：活检组织和切除组织有所不同 观察：高异质性需要全面观察所有肿瘤组织 沟通：结果不确定时需要与肿瘤科医生沟通 IHCIHC判读标准判读标准（参照ToGA经验，所有图片来自SCC）0 0 无反应或肿瘤细胞膜染色无反应或肿瘤细
11、胞膜染色10%1+1+10%肿瘤细胞微弱或隐约膜染色，肿瘤细胞微弱或隐约膜染色，细胞膜仅部分区域着色细胞膜仅部分区域着色 2+2+10%肿瘤细胞弱到中度的完全或肿瘤细胞弱到中度的完全或 细胞基底部和两侧边膜染色细胞基底部和两侧边膜染色 3+3+10%肿瘤细胞完全性或基底部和肿瘤细胞完全性或基底部和 两侧边膜强染色（对两侧边膜强染色（对3+的病例同时的病例同时 表明百分率，注明是否有异质性）表明百分率，注明是否有异质性）IHCIHC结果判读时应注意：细胞质着色应忽略不计，正常胃黏膜上皮细胞不应着色结果判读时应注意：细胞质着色应忽略不计，正常胃黏膜上皮细胞不应着色 HER2检测-IHC 原位杂交检
12、测方法（原位杂交检测方法（ISHISH）荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISH）双色银染原位杂交（双色银染原位杂交（Dual SISH，DSISH）探针探针 建议使用我国相关部门（建议使用我国相关部门（SFDASFDA）批准的试剂盒）批准的试剂盒 FISH，HER2红色信号增多，局部呈红色信号增多，局部呈簇状，簇状，CEP17信号信号1-2个，个，比值比值7.2，有扩增（，有扩增（100）FISH，HER2和和CEP17信号各信号各1-2个，比值个，比值1.65，无扩增（，无扩增（100）FISHFISH：严格按照试剂盒标准程序执行：严格按照试剂盒标准程序执行 HER2检测-FISH 图片来自图
13、片来自SCC DSISH HER2黑色信号扩增，呈簇状；黑色信号扩增，呈簇状；CEP17红色信号红色信号1-2个；比值个；比值15，有，有扩增扩增(100)DSISH HER2和和CEP17信号各信号各1-2个，个，比值比值0.8，无扩增，无扩增(100)DSISHDSISH：实验室应先进行严格的对比试验和程序优化：实验室应先进行严格的对比试验和程序优化 严格按照所用全自动染色仪器的优化程序和严格按照所用全自动染色仪器的优化程序和SOPSOP执行执行 HER2检测-DSISH 图片来自图片来自SCCSCC 请问贵院是否有统一的HER2检测病理报告格式？A.是 B.否 问题七 检测报告内容 胃癌
14、HER2 IHC/ISH检测报告 临床信息：临床信息：姓名 性别 年龄 门诊住院号 送检医师 联系方式 检测日期 年 月 日 标本信息：标本信息：病理号/蜡块号 标本类型：手术切除 活检 肿瘤部位：胃食道交界处 胃底 胃体 胃窦 幽门管 转移灶 标本固定液种类（10中性缓冲福尔马林）是 否 标本离体至固定时间(如有记录)分钟 标本固定的时间(如有记录)分钟 组织学类型/分级 Laurn分型 临床分期 T N M HER2 IHC 检测报告 检测信息：检测信息：抗体信息(克隆号生产商)检测方法 手工/半自动 全自动 对照设置情况 3+0 样本量是否足够用于评估 是 否 具有膜着色的肿瘤细胞的百分
15、比%着色的异质性 有 无 肿瘤细胞膜染色模式 完整 基底和侧膜（U-shaped)两者皆有 判读结果：判读结果：0 l+2+3+无法判读 结论：结论：阳性；不确定；阴性；无法判读 检测人员：技术员检测人员：技术员 病理医师病理医师 HER2 ISH 检测报告 检测信息：检测信息：探针信息(生产商/商品号)检测方法 对照设置情况 阳性对照 阴性对照 样本量是否足够用于评估 是 否 IHC检测结果 0 l+2+3+无法判读 判读结果：判读结果：用于评估的肿瘤细胞数量 HER2信号总数CEPl7信号总数 HER2信号数平均值细胞核 CEPl7信号数平均值细胞核 17号染色体是否为多体 是 否 结论：
16、结论：阳性阳性(扩增扩增)阴性阴性(无扩增无扩增)无法判读无法判读 检测人员：检测人员：技术员技术员 病理医生病理医生 实验室质量控制（1）HER2蛋白和基因扩增的检测均应在内、外部质量控制良好的病理实验室进行 检测必须严格按照指南要求执行，以保证结果可靠 不具备HER2检测条件的单位应按照指南要求，妥善处理和准备好标本，提供给有质量保证的病理实验室进行检测 实验室质量控制（2）实验室内、外部质量控制和SOP的主要要求如下 准备开展GC HER2检测的实验室应选择12家已较好开展该项检测的实验进行25100例标本的对比验证 或通过参加有关外部质量控制活动来实现，外部质控阳性和阴性结果的一致性应达到90以上，每年应进行12次 从事GC HER2检测的实验室技术人员和病理医师应进行必要的培训和资格考核 实验室质量控制（3）实验室应建立完善的SOP，并做好每次检测情况的记录和存档工作 任何改变操作程序和试剂的行为均应重新进行严格的验证 内部质控应包括同一组织不同批次染色结果的重复性分析，每次染色阳性、阴性对照的设置，如有可能还应没置包括低表达低扩增对照 检测相关的仪器和设备需定期维护、校验