1、 乙肝病毒五项检测乙肝病毒五项检测 双抗体夹心法 乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面抗原 乙型肝炎病毒表面抗体乙型肝炎病毒表面抗体 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗原抗原 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗体抗体 乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒核心抗体 双抗体夹心法 双抗原夹心法 竞争抑制法 竞争抑制法 乙肝病毒五项检测乙肝病毒五项检测 乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面抗原 检验原理检验原理 本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标记抗体(HBsAb-HRP)及TMB显色剂等其他试剂,检测人血清或血浆中的乙肝表面抗原(HBsAg)。乙
2、型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面抗原 样本要求样本要求 本试剂使用样品为人血清或血浆,含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。不能检测含叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样品。样品中应无微生物,可在28储存一周,长期储存应低温冻存,避免反复冻融。使用前请将样品室温平衡30分钟以上,冷冻样品实验前需混匀。乙型肝炎病毒表面抗原 检验方法检验方法 配液:将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。编号:将样品对应微孔板按序编号,每板应设阴性对照孔3孔,阳性对照孔2孔和空白对照孔1孔。(用双波长检测,可不设空白对照孔)。稀释:每孔加入样品稀释液20 L,空白对照孔除外。加样:分别
3、在相对应孔中加入待测样品或阴性、阳性对照100L,轻轻振荡混匀。(非常重要)温育:用封板膜封后,置371温育602分钟。(如有酶联反应加速仪温育时间可减半)。加酶:每孔加入酶标试剂50L,空白孔除外,轻轻振荡混匀。温育:用封板膜封后,置371温育301分钟。(如有酶联反应加速仪温育时间可减半)。洗版:小心揭掉封板膜,用洗板机洗涤5遍,拿出来在扣在洗版纸上重重拍干。显色:每孔加入显色剂A、B液(底物)各50L,轻轻振荡混匀,371避光显色30分钟。测定:每孔加入终止液50L,轻轻振荡混匀,十分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处(建议用双波长450um/600650nm),用空白孔凋零点后
4、测定各孔A值。乙型肝炎病毒表面抗原 乙型肝炎病毒表面抗原 注意事项注意事项 本样品仅用于体外诊断,操作应按说明说严格进行。封板膜不能重复使用,不同批号、酶标试剂和阴性对照不可混用,不能与其它厂家试剂混用。避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒液(如84消毒液)的环境下操作。使用前请将试剂平稳至室温(平衡30分钟以上),实验前将试剂轻轻振荡混匀,使用后立即回放28。未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封28保存。过期试剂请勿使用。加液时必须用加样器,并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组份时,应更换加样器的吸头和加样槽,以防止出现交叉污染。洗涤时各孔均匀需加满洗液,防止孔内有游离酶不能洗
5、净。使用洗板机应设定3060秒浸泡时间。在洗版结束后,必须立即进行下一步,不可使用酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤,以确保每孔实验条件的均一。结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时,应擦干酶标板底部,且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁,指引或划痕可能影响板孔的读值。所有样品、废液和废弃物都应按照传染物处理。终止液为硫酸,使用时必须注意安全。显色时必须先加显色剂A液后再加显色剂B液,以免显色过低。由于ELISA反应原理的限制,本试剂检测阴性并不排除HBV(乙型肝炎)感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。乙型肝炎病毒表面抗体【检验原理】本试剂采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验原
6、理。在微孔条上预包被乙肝表面抗原(HBsAg),加入待测样品及酶标抗原(HBsAg-HRP)试剂进行温育。样品中的HBsAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原-抗体-酶标抗原”复合物。洗板后加入显色剂(TMB),复合物上连接的HRP催化显色剂反应,生成蓝色产物,终止反应后为黄色。若样品中乙无型肝炎表面抗体时,不显色。乙型肝炎病毒表面抗体【检验方法】配液:将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20稀释。编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照3孔,阳性对照2孔和空白对照1孔(用双波长检测,可不设空白对照孔)。加样:分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50ul。加霉:每孔加入酶标试剂50ul,
7、空白孔除外,轻轻震荡混匀。温育:用封板膜封板后,置于37温育30分钟。洗涤:小心揭掉封板莫,用洗板机洗涤5遍,最后一次尽量扣干。显色:每孔加入显色剂A、B液各50ul,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟。测定:每孔加终止液50ul,轻轻震荡混匀,10分钟内测定结果。乙型肝炎病毒e抗体 检验原理:本试剂采用竞争抑制酶联免疫法吸附法实验原理,在微孔板上预包被乙肝e抗原,加入待测样品及酶标抗体(HBeAb-HRP)试剂进行温育,酶标抗体和样品中的HBeAb竞争酶标板上的包被抗原。若样本中无乙型肝炎e抗体时,酶标抗体与包被抗原结合形成“包被抗原-酶标抗体”复合物,洗板后加入显色剂(TMB),复合物上连
8、接的HRP催化显色剂反应,生产蓝色产物,终止反应后变为黄色。若样本中存在乙型肝炎e抗体时,会与酶标抗体竞争形成“包被抗原-抗体”复合物,不显色。乙型肝炎病毒e抗体 检验方法:配液:将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水配液:将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。倍稀释。编号:将样品对应微孔板按序编号,每板应设阴性对照编号:将样品对应微孔板按序编号,每板应设阴性对照3孔,阳孔,阳性对照性对照2孔和空白对照孔和空白对照1孔(用双波长检测,可不设空白对照孔)。孔(用双波长检测,可不设空白对照孔)。加样:分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各加样:分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50l。加酶
9、:每孔加人酶标试剂加酶:每孔加人酶标试剂50ul,空白孔除外,轻轻振荡混匀。,空白孔除外,轻轻振荡混匀。温育:用封板膜封板后置温育:用封板膜封板后置37温育温育30min。洗涤:小心撕掉封板膜,用洗板机洗涤洗涤:小心撕掉封板膜,用洗板机洗涤5遍,最后一次尽量扣干。遍,最后一次尽量扣干。显色:每孔加人显色剂显色:每孔加人显色剂A、B液各液各50l,轻轻振荡混匀,轻轻振荡混匀,37避光避光显色显色15min。测定:每孔加终止液测定:每孔加终止液50l,轻轻振荡混匀,轻轻振荡混匀,10min内测定结果。内测定结果。设定酶标仪波长于设定酶标仪波长于450nm处(建议用双波长处(建议用双波长450nm/
10、600-650nm检测),用空白孔调零点后测定各孔检测),用空白孔调零点后测定各孔A值。值。乙型肝炎病毒核心抗体 乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)、e抗体(抗-HBe)检测(1)抗-HBc检测 先用生理盐水将待测血清作1:30稀释,然后取50l加入相应的包被板(或条)中,同时设阳性、阴性及空白对照各一孔(对照血清不必稀释);再向每孔加入酶结合物50l(空白孔不加),再进行同1的操作。但结果观察需反看:目测法是以不显色(无色)孔为阳性;比色法是以标本吸光度A值0.5N(阴性对照值)为阴性,标本吸光度A值0.5N者判为阳性。序号 HbsAg HbsAb HbeAg HbeAb HBcAb 1-过
11、去和现在未感染过 HBV。1-30%2-+(1)既往感染未能测出抗-HBs;(2)恢复期 HBsAg 已消,抗-HBs 尚未出现;(3)无症状 HBsAg 携带着。5-10%3-+(1)既往感染过 HBV;(2)急性 HBV 感染恢复期;(3)少数标本仍有传染性。HBV 感染已过;抗 HBs 出现前的窗口期 2-10%4-+-(1)注射过乙肝苗有免疫;(2)既往感染;假阳性 1-6%5-+-+急性 HBV 感后康复。0.5-5%6+-+(1)急性 HBV 感染;(2)慢性 HBsAg 携带者;(3)传染性弱。10-15%7-+-+既往感染,仍有免疫力。HBV 感染,恢复期。5-15%8+-+(
12、1)急性 HBV 感染趋向恢复;(2)慢性 HBsAg 携带者;(3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。5-10%9种种常常见见模模式式 9+-+-+急性或慢性乙型肝炎感染。提示 HBV 复制,传染强。即俗称的“大三阳”。30-40%乙肝五项的32种组合 10+-(1)急性 HBV 感染早期,急性 HBV 感染潜伏期;(2)慢性 HBV携带者,传染性弱。11+-+-(1)慢性 HBsAg携带者易转阴;(2)急性 HBV感染趋向恢复。12+-+-急性 HBV感染早期或慢性携带者,传染性强。13+-+(1)急性 HBV感染趋向恢复;(2)慢性携带者。14+-(1)亚临床型 HBV感染早期;(2)不同亚
13、型HBV二次感染。15+-+(1)亚临床型 HBV感染早期;(2)不同亚型HBV二次感染。16+-+-亚临床型或非典型性感染。17+-+亚临床型或非典型性感染。18+-+亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物,新的不同亚型感染。19-+-(1)非典型性急性感染;(2)见于抗-HBc 出现之前的 感染早期,HBsAg滴度低而呈阴性,或呈假阳性。20-+-+非典型性急性感染。21-+急性 HBV感染中期。22-+-+-HBV感染后已恢复。23-+-非典型性或亚临床型HBV感染。24-+-+非典型性或亚临床型HBV感染。25-+-急性 HBV感染趋向恢复。26+一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs(常见);血清从HBsAg转化为抗HBs的过程(少见)。27-+-28-+29-+-30+-+-31+-32+-谢谢谢谢